中國(guó)醫(yī)藥生物技術(shù)學(xué)會(huì)質(zhì)量控制專業(yè)委員會(huì)第三屆動(dòng)物血清生產(chǎn)與管理學(xué)術(shù)研討會(huì)牛血清的病毒安全檢測(cè)與病毒滅活工藝ViralSafetyDetectionandViralRemoval/InactivationofBovineSerum章金剛軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血醫(yī)學(xué)研究所國(guó)家生物醫(yī)學(xué)分析中心病毒安全檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室北京1008502007年09月牛血清的重要性與生物藥品的病毒安全性牛的病原與病毒安全性關(guān)注的重點(diǎn)歐盟對(duì)牛血清病毒檢測(cè)的要求病毒分類與牛的某些病毒牛血清的病毒安全檢測(cè)技術(shù)血清的病毒清除/滅活工藝病毒安全實(shí)驗(yàn)室的部分研究工作2007年09月在人用和動(dòng)物用疫苗的制備過程中，牛血清是最為重要的細(xì)胞培養(yǎng)添加物。鑒于世界衛(wèi)生組織（WHO）提倡疫苗生產(chǎn)的細(xì)胞基質(zhì)從動(dòng)物的使用轉(zhuǎn)換為細(xì)胞培養(yǎng)，牛血清的應(yīng)用會(huì)得到進(jìn)一步的擴(kuò)大?？梢哉J(rèn)為，如果沒有充足牛血清的供應(yīng)，許多醫(yī)藥產(chǎn)品的生產(chǎn)和供應(yīng)均將受到極大的影響。牛血清的重要性與生物藥品的病毒安全性2007年09月WHO和各國(guó)管理當(dāng)局、行業(yè)協(xié)會(huì)等高度關(guān)注醫(yī)藥產(chǎn)品生產(chǎn)使用細(xì)胞基質(zhì)的安全問題，尤其是潛在病毒污染的問題。疫苗病毒安全性的可能污染途徑：活疫苗種毒的污染，制備工藝中原、敷料的污染和其他需要考慮的問題。其中，牛血清的質(zhì)量控制與病毒安全檢測(cè)最受關(guān)注。

牛血清的重要性與生物藥品的病毒安全性2007年09月牛血清的重要性與生物藥品的病毒安全性牛的病原與病毒安全性關(guān)注的重點(diǎn)歐盟對(duì)牛血清病毒檢測(cè)的要求病毒分類與牛的某些病毒牛血清的病毒安全檢測(cè)技術(shù)血清的病毒清除/滅活工藝病毒安全實(shí)驗(yàn)室的部分研究工作2007年09月細(xì)菌性疾?。航Y(jié)核桿菌病、布魯氏桿菌病、沙門氏菌病、炭疽……病毒性疾?。嚎谔阋摺魅拘院＞d樣腦病、白血病、藍(lán)舌病…...寄生蟲性疾病：日本分體吸蟲病、弓形體病……牛的感染性疾病2007年09月消除牛源病原體技術(shù)2007年09月DNA病毒牛乳頭狀瘤病毒（bovinepapillomaviruses,BPV）牛多型瘤病毒（bovinepolyomaviruses,BPyV）腺病毒（Adenoviruses）皰疹病毒（Herpesviruses）牛痘病毒（Poxviruses）細(xì)小病毒（Parvovirus）等?？梢愿腥镜牟《?007年09月RNA病毒口蹄疫病毒（FMDV）牛病毒性腹瀉病毒（BVDV）輪狀病毒（Rotavirus）呼腸孤病毒（Reovirus）牛白血病病毒（BLV）牛免疫缺陷病病毒（BIV）藍(lán)舌病病毒（BTV）牛呼吸道合胞體病毒（BRSV）狂犬病病毒（RV）等倍受關(guān)注的朊病毒牛海綿狀腦病(Bovinespongiformencephalpopathy,BSE)因子。

?？梢愿腥镜牟《?007年09月值得得關(guān)關(guān)注注的的對(duì)對(duì)象象潛在在性性感感染染的的病病毒毒：：（1））隱隱性性感感染染而而不不引引起起任任何何疾疾病病的的病病毒毒；；（2））某某些些持持續(xù)續(xù)性性感感染染的的病病毒毒；；（3））處處于于潛潛伏伏狀狀態(tài)態(tài)的的病病毒毒。。由于于機(jī)機(jī)體體生生理理狀狀態(tài)態(tài)（（如如懷懷孕孕））、、外外界界環(huán)環(huán)境境的的變變化化，，機(jī)機(jī)體體抵抵抗抗力力下下降降等等因因素素，，這這類類病病毒毒可可能能大大量量增增殖殖或或引引起起疾疾病病的的發(fā)發(fā)生生。。2007年年09月月關(guān)注注的的對(duì)對(duì)象象內(nèi)源源性性病病毒毒：：內(nèi)源源性性反反轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)錄錄病病毒毒（（ERV））是是指指以以前前病病毒毒DNA形形式式整整合合進(jìn)進(jìn)宿宿主主細(xì)細(xì)胞胞基基因因組組中中，，并并隨隨細(xì)細(xì)胞胞染染色色體體復(fù)復(fù)制制而而復(fù)復(fù)制制的的反反轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)錄錄病病毒毒。。朊病病毒毒：：朊病病毒毒是是亞亞病病毒毒中中的的重重要要感感染染因因子子，，侵侵害害動(dòng)動(dòng)物物與與人人類類。。因因其其主主要要由由蛋蛋白白質(zhì)質(zhì)構(gòu)構(gòu)成成，，迄迄今今尚尚無無含含有有核核酸酸的的確確切切證證據(jù)據(jù)，，故故暫暫定定名名為為朊朊病病毒毒(Virino)或或蛋蛋白白侵侵染染子子(Prion)。。由于于對(duì)對(duì)各各種種朊朊病病毒毒的的本本質(zhì)質(zhì)的的了了解解不不夠夠，，采采用用““因因子子””命命名名，，例例如如癢癢疫疫因因子子和和牛牛海海綿綿狀狀腦腦病病因因子子等等，，似似乎乎較較為為恰恰當(dāng)當(dāng)。。2007年年09月月重點(diǎn)點(diǎn)關(guān)關(guān)注注兩兩大大類類病病毒毒應(yīng)該該考考慮慮生物物安安全全性性的病病毒毒集集中中在在兩兩個(gè)個(gè)方方面面：人獸共患患病病毒毒與致癌、、免疫抑抑制或嚴(yán)嚴(yán)重退行行疾病有有關(guān)的病病毒2007年09月牛血清的的重要性性與生物物藥品的的病毒安安全性牛的病原原與病毒毒安全性性關(guān)注的的重點(diǎn)歐盟對(duì)牛牛血清病病毒檢測(cè)測(cè)的要求求病毒分類類與牛的的某些病病毒牛血清的的病毒安安全檢測(cè)測(cè)技術(shù)血清的病病毒清除除/滅活活工藝病毒安全全實(shí)驗(yàn)室室的部分分研究工工作2007年09月2007年09月2007年09月2007年09月2007年09月2007年09月2007年09月牛血清的的重要性性與生物物藥品的的病毒安安全性牛的病原原與病毒毒安全性性關(guān)注的的重點(diǎn)歐盟對(duì)牛牛血清病病毒檢測(cè)測(cè)的要求求病毒分類類與牛的的某些病病毒牛血清的的病毒安安全檢測(cè)測(cè)技術(shù)血清的病病毒清除除/滅活活工藝病毒安全全實(shí)驗(yàn)室室的部分分研究工工作2007年09月三牛源源制品的的病毒安安全性脊椎動(dòng)物物病毒的的形態(tài)－－DNA病毒毒2007年09月脊椎動(dòng)物物病毒的的形態(tài)－－RNA病毒毒2007年09月DNA病病毒－－牛乳頭狀狀瘤病毒毒牛乳頭狀狀瘤病毒毒（bovinepapillomaviruses,BPV）分類地位位：乳多多空病毒毒科，乳乳頭狀瘤瘤病毒屬屬形態(tài)特征征：無囊囊膜，55nm理化特性性：對(duì)酸酸、堿、、有機(jī)溶溶劑有抵抵抗Amodelofthepapillomaviruscapsid2007年09月DNA病病毒－－牛乳頭狀狀瘤病毒毒根據(jù)交叉叉雜交試試驗(yàn)，可可以感某些亞群可以轉(zhuǎn)化人細(xì)胞，這些病毒與牛的消化道、生殖道和眼部腫瘤等的發(fā)展有關(guān)。不能用細(xì)胞感染檢測(cè)，可用PCR檢測(cè)。2007年09月DNA病病毒－－牛多型瘤瘤病毒牛多型瘤瘤病毒（（bovinepolyomaviruses,BPyV））分類地位位：乳多多空病毒毒科，多多型瘤病病毒屬形態(tài)特征征：無囊囊膜，45nm理化特性性：對(duì)酸酸、堿、、有機(jī)溶溶劑有抵抵抗PCR檢檢測(cè)，BPyV在胎牛牛血清中中的污染染批次達(dá)達(dá)70％％，可從從某些批批次的血血清中分分離到病病毒。2007年09月DNA病病毒－－牛多型瘤瘤病毒BPyV倍受關(guān)關(guān)注，它它可能是是一種人人獸共患患病，飼飼養(yǎng)人員員、獸醫(yī)醫(yī)的體內(nèi)內(nèi)有較高高水平的的抗體，，而對(duì)大大多數(shù)人人群則缺缺乏抵抗抗力。可以感染染靈長(zhǎng)類類細(xì)胞，，包括人人的細(xì)胞胞。影響細(xì)胞胞培養(yǎng)的的結(jié)果。。檢測(cè)：能用細(xì)胞胞感染檢檢測(cè)，在在猴腎細(xì)細(xì)胞可以以產(chǎn)生特特異性的的病變，，即胞漿漿、胞核核空泡化化。PCR檢檢測(cè)，使使用特異異性的引引物擴(kuò)增增、雜交交或測(cè)序序。2007年09月DNA病病毒－－牛腺病毒毒牛腺病毒毒（Adenoviruses）分類地位位：腺病病毒科，，哺乳動(dòng)動(dòng)物腺病病毒屬形態(tài)特征征：無囊囊膜，90nm理化特性性：對(duì)酸酸、堿、、有機(jī)溶溶劑有抵抵抗分2個(gè)主主要亞群群，10個(gè)血清清型。2007年09月DNA病病毒－－牛腺病毒毒尚不清楚楚是否人人獸共患患，但可可以轉(zhuǎn)化化人細(xì)胞胞。能用細(xì)胞胞感染檢檢測(cè)，1群感染也可用PCR檢測(cè)。2007年09月DNA病病毒－－牛皰皰疹病毒毒牛皰疹病病毒（Herpesviruses）：：有囊膜膜，150nm，有4個(gè)種。。2007年09月DNA病BHV-1:引引起牛鼻鼻氣管炎炎，牛源源制品應(yīng)應(yīng)該檢測(cè)測(cè)病毒。。能用細(xì)細(xì)胞感染染檢測(cè)，，也可用用PCR檢測(cè)。。BHV-2:引引起牛牛潰瘍瘍性乳乳頭炎炎，奶奶制品品的污污染。。BHV-3:引引起牛牛惡性性卡他他熱，，具有有異源源宿主主感染染性。。BHV-5:引引起牛2007年年09月DNA病毒毒－－牛痘病病毒牛痘病病毒（（Poxviruses）：：有囊囊膜，，300nm，，有2個(gè)種種病毒毒必須須考慮慮。假牛痘痘病毒毒牛丘疹疹性口口炎病病毒Orfvirus2007年年09月DNA病毒毒假牛痘痘病毒毒:引起牛牛乳房房和乳乳頭增增生性性病變變、擠擠奶工工皮膚膚丘疹疹。牛丘疹疹性口口炎病病毒引起牛?？谇磺徽衬つ?、鼻鼻鏡、牛源制品應(yīng)該檢測(cè)病毒。能用細(xì)胞感染檢測(cè)，也可用PCR檢測(cè)。2007年年09月RNA病毒能用細(xì)細(xì)胞感感染檢檢測(cè)，，也可可用PCR檢測(cè)測(cè)。2007年年09月RNA病毒毒－－牛牛病毒毒性腹腹瀉病病毒牛腹瀉瀉病毒毒（BVDV）：：有能用細(xì)胞感染檢測(cè)，也可用PCR檢測(cè)。2007年年09月RNA病毒牛輪狀狀病毒毒：無無囊膜膜，80nm，，牛群群中普普遍存存在，，對(duì)人人和能用細(xì)胞感染、ELISA等檢測(cè)，也可用PCR檢測(cè)。2007年年09月RNA病毒毒－－牛呼腸腸孤病病毒呼腸孤孤病毒毒：無無囊膜膜，80nm，，牛群群中能用細(xì)胞感染、ELISA等檢測(cè)，也可用PCR檢測(cè)。2007年年09月RNA病毒毒－－牛與生物物安牛白血病病毒（BLV）牛免疫缺陷病病毒（BIV）2007年年09月RNA病毒毒－－牛白血血病病病毒牛白血血病病病毒（（BLV））：有有囊膜膜，100nm，牛牛群中中普遍遍存在在。未發(fā)現(xiàn)現(xiàn)對(duì)人人的感感染性性，可可用PCR檢測(cè)測(cè)。2007年年09月RNA病毒毒－－牛免疫疫缺陷陷病病病毒牛免疫疫缺陷陷病病病毒2007年年09月朊病毒毒朊病毒毒引起起的人人和動(dòng)動(dòng)物的的疾病病多種動(dòng)動(dòng)物和和人的的亞急急性海海綿樣樣腦病病與羊羊癢疫疫因子子有關(guān)關(guān)人的庫庫魯病病(Kuru)、克克-雅雅氏病病(Creutzfeldt-Jakobdisease)、、阿阿耳茨茨海默默病(Alzheimerdisease)、格格-史史氏綜綜合征征(Gerstmann-Strausslersyndrome)羊的癢癢疫(Scrapie)，水水貂傳傳染性性腦病病(Transmissibleminkencephalo2007年年09月朊病毒毒Prusiner1982:theplaqueproteinistheinfectiousagThenormal,non-infectiousProtein(PrPC)isencodedbythehostandismainlyexpressedonlymphocytesandneuronsTheinfectiousprionprotein(PrPSc)hasthesameaminoacidcomposition,butisresistanttoproteasesandtendstopolymerize2007年年09月2007年年09月2007年年09月veryslowrapidrapidPrPCPrPScPrPCPrPScSeedingmodel(nucleatedcrystallization)Refoldingmodel(templatedirected)朊病毒毒2007年年09月牛血清清的重重要性性與生生物藥藥品的牛的病原與病毒安全性關(guān)注的重點(diǎn)歐盟對(duì)牛血清病毒檢測(cè)的要求病毒分類與牛的某些病毒牛血清的病毒安全檢測(cè)技術(shù)血清的病毒清除/滅活工藝病毒安全實(shí)驗(yàn)室的部分研究工作2007年年09月細(xì)胞培培養(yǎng)抗體檢檢測(cè)抗原檢檢測(cè)核酸檢檢測(cè)牛血清清的病病毒安安全檢檢測(cè)技技術(shù)2007年年09月細(xì)胞培培養(yǎng)主要檢檢測(cè)血血清中中是否否存在在可致致敏感感細(xì)胞胞病變變的病病毒，，一般要要求至至少使使用2種細(xì)細(xì)胞，其中中1種細(xì)細(xì)胞為為牛源源細(xì)胞胞。牛血清清的病病毒安安全檢檢測(cè)技技術(shù)2007年年09月抗體檢測(cè)主要檢測(cè)血清清中某些病毒毒的抗體，預(yù)預(yù)示牛群曾經(jīng)經(jīng)感染病毒或或接種過疫苗苗，普遍要求求BVDV抗體體為必檢項(xiàng)目牛血清的病毒毒安全檢測(cè)技技術(shù)2007年09月抗原檢測(cè)主要檢測(cè)血清清中某些病毒毒蛋白的存在在，預(yù)示血清清來源的牛群群近期感染或或潛在感染了了某種病毒，，如BVDV、BTV、、腺病毒、狂狂犬病病毒等等，常用的方方法是ELISA、免疫疫熒光技術(shù)等牛血清的病毒毒安全檢測(cè)技技術(shù)2007年09月核酸檢測(cè)主要檢測(cè)血清清中某些病毒毒核酸的存在在，預(yù)示血清清來源的牛群群近期感染或或潛在感染了了某種病毒，，如BVDV、FMDV、BTV、、細(xì)小病毒等等，常用的方方法是PCR、RT-PCR、熒光光定量PCR等。牛血清的病毒毒安全檢測(cè)技技術(shù)2007年09月朊病毒的構(gòu)象依賴性免免疫測(cè)定構(gòu)象依賴性免免疫測(cè)定方法法（conformation-dependentimmunoassay,CDI）能檢出微量的的prion蛋白，5h即可出結(jié)結(jié)果?？蓹z測(cè)出8株株prion，其中包括括分別導(dǎo)致綿綿羊癢病、鹿鹿的慢性消耗耗性疾病和瘋瘋牛病的各株株prion。可用于檢測(cè)活活動(dòng)物。對(duì)西西班牙、德國(guó)國(guó)和英國(guó)的11000頭頭屠宰牛檢測(cè)測(cè)結(jié)果完全與與現(xiàn)在應(yīng)用的的方法相符，，而且在實(shí)驗(yàn)該方法的另一突出優(yōu)點(diǎn)是自動(dòng)化，因此可以用于大量動(dòng)物的篩選。2007年09月PositiveControlDilutiontoEnd-Point朊病毒2007年09月牛血清的重要要性與生物藥藥品的病毒安安全性牛的病原與病病毒安全性關(guān)關(guān)注的重點(diǎn)歐盟對(duì)牛血清清病毒檢測(cè)的的要求病毒分類與牛牛的某些病毒毒牛血清的病毒毒安全檢測(cè)技技術(shù)血清的病毒清清除/滅活工工藝病毒安全實(shí)驗(yàn)驗(yàn)室的部分研研究工作2007年09月血清的病毒清清除/滅活工工藝鑒于牛血清中中病毒污染的的危險(xiǎn)性，在在進(jìn)行病毒直直接檢測(cè)的同同時(shí)，對(duì)血清清進(jìn)行病毒清清除與滅活很很有必要。醫(yī)藥管理當(dāng)局局也強(qiáng)烈推薦薦對(duì)牛血清進(jìn)進(jìn)行病毒滅活活和驗(yàn)證。2007年09月血清的病毒清清除/滅活工工藝生物技術(shù)產(chǎn)品品病毒清除與與滅活的技術(shù)術(shù)方法巴斯德消毒法法（巴氏消毒毒法）干熱法（凍干干制品）有機(jī)溶劑/去去污劑（S/D）處理法法膜過濾法低pH孵放法法γ-射線法2007年09月血清的病毒清清除/滅活工工藝適于牛血清病病毒清除與滅滅活的技術(shù)方方法對(duì)于牛血清，，病毒滅活多多選用γ-射射線法。選取原則均需驗(yàn)證病毒毒去除/滅活活工藝的有效效性，不影響響血清的質(zhì)量量。2007年09月常用的γ射線線放射源有兩兩種:60鈷和137銫γ射線的產(chǎn)生生γ射線來自核核的轉(zhuǎn)變,由由光子組成。。在放射性衰衰變過程中所所形成的子核核處于激發(fā)和和不穩(wěn)定狀態(tài)態(tài),當(dāng)由高激激發(fā)態(tài)躍遷回回到低激發(fā)態(tài)態(tài)時(shí)即釋放出出γ射線。。γ射線滅活病病原體的種類類與產(chǎn)生2007年09月γ射線滅活病病原體的機(jī)理理直接作用：指射線直接破壞壞病原體的核核酸、蛋白質(zhì)質(zhì)和酶等生命命有關(guān)的物質(zhì)質(zhì)。當(dāng)病原體受到到γ射線照射射時(shí)，接受光光子能量的電電子由低能級(jí)級(jí)殼層躍到高高能級(jí)殼層，，使原子呈激激發(fā)狀態(tài)，而而當(dāng)激發(fā)能高高于分子電離離電位時(shí)，則則分子發(fā)生電電離，破壞了共價(jià)鍵鍵，從而破壞了了病原體的分分子結(jié)構(gòu)。間接作用：指射線作用用于病原體時(shí)時(shí)，其中的水分子等輻解解產(chǎn)生自由基基，自由基再作作用于生命物物質(zhì)而使病原原體死亡。自自由基攻擊DNA分子中中的堿基、核核糖和磷酸二二酯鍵,造成成堿基與核糖糖氧化、鏈斷斷裂、與蛋白白質(zhì)交聯(lián)等多多種類型的損損傷。2007年09月γ射線消毒殺殺菌的優(yōu)缺點(diǎn)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)：不使物品升升溫；穿透力力強(qiáng)；被照物物品不會(huì)產(chǎn)生生放射性，輻輻照后無殘留留毒性；方法法簡(jiǎn)便；節(jié)省省人力、節(jié)約約能源。缺點(diǎn)：安全性（人的吸收劑劑量達(dá)1～2Gy即可引起輕度度急性放射病病，若靠近放放射源，則數(shù)數(shù)秒鐘即可致致死；30cm鉛板、150cm混凝土或5cm深的水可以阻阻擋放射源對(duì)對(duì)人的危害））；對(duì)物品的影響響（可使血液溶溶血，有些藥藥品如蛋白酶酶水溶液、胰胰島素溶液等等，照射后幾幾乎90％以以上被破壞；可使普通玻玻璃變黃，也可使棉纖纖維解聚而降降低其抗張強(qiáng)強(qiáng)度；亦可使使食物變色變味味，有的蔬菜、、水果香味喪喪失，某些營(yíng)營(yíng)養(yǎng)成分喪失失）。2007年09月纖維蛋白原病病毒滅活前后后效果比較病毒滅活前的的纖維蛋白原原病病毒滅滅活后的纖維維蛋白原2007年09月γ射線輻照在在血漿病毒滅滅活中的應(yīng)用用馬平,周錫鵬,張艷宇,等.60Coγ-射線對(duì)凍干血血漿中病毒滅滅活效果的研究究[J].中國(guó)消毒學(xué)雜雜志,2005,22(4):424-426凍干血漿中病病毒滅活效果果60Coγ-射線線輻照處理結(jié)結(jié)果顯示,60Coγ-射線線滅活凍干血血漿中病毒的的效果隨輻照照劑量增加而而增強(qiáng)。30kGy以上的輻照劑劑量能完全滅滅活血漿中滴滴度在5.5lgTCID50以上的各指示示病毒。2007年09月牛血清的重要要性與生物藥藥品的病毒安安全性牛的病原與病病毒安全性關(guān)關(guān)注的重點(diǎn)歐盟對(duì)牛血清清病毒檢測(cè)的的要求病毒分類與牛牛的某些病毒毒牛血清的病毒毒安全檢測(cè)技技術(shù)血清的病毒清清除/滅活工工藝病毒安全實(shí)驗(yàn)驗(yàn)室的部分研研究工作2007年09月病毒安全檢測(cè)測(cè)的有關(guān)工作作血液生物制品品與病毒安全全檢測(cè)研究室室：應(yīng)用發(fā)展研究究為主，應(yīng)用用基礎(chǔ)研究為為輔；以血液液制品及病毒毒安全性為主主線，適當(dāng)拓拓展研究領(lǐng)域域；積極尋求求合作，發(fā)揮揮集成優(yōu)勢(shì)。。下設(shè)課題組/方向：血漿蛋白的分離純化工藝藝、特性鑒定定、藥理藥效效等重組蛋白的研研究：原核、酵母、、哺乳細(xì)胞、、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物物等抗體制備與應(yīng)應(yīng)用：?jiǎn)慰?、基因重重組單抗等配配套研究病毒安全檢測(cè)測(cè)：國(guó)家生物醫(yī)學(xué)學(xué)分析中心分分支血型抗原的相相關(guān)研究2007年09月病毒安全檢測(cè)測(cè)的有關(guān)工作作病毒安全檢測(cè)測(cè)實(shí)驗(yàn)室掛靠靠在國(guó)家生物物醫(yī)學(xué)分析中中心。主要工作包括括以下幾個(gè)方方面：病毒滅活工藝藝與檢測(cè)技術(shù)術(shù)：血漿衍生物、、生化制品、、相關(guān)原材料料等異種移植的病病毒安全性研研究：國(guó)家項(xiàng)目為主主抗病毒藥物的的篩選：自選與合作項(xiàng)項(xiàng)目為主單克隆抗體的的制備與應(yīng)用用：自選與合作項(xiàng)項(xiàng)目為主2007年09月病毒安全檢測(cè)測(cè)的有關(guān)工作作生物活性材料料的病毒安全全性檢測(cè)：牛血清、血漿漿衍生物、生生化制品、相相關(guān)原材料等等符合規(guī)范的二二級(jí)上午安全全實(shí)驗(yàn)室2007年09月牛血清病毒安安全檢測(cè)的相相關(guān)工作細(xì)胞基質(zhì)與指指示病毒細(xì)胞基質(zhì)體系系完善：擁有有30種以上上動(dòng)物的傳代代細(xì)胞系；自自行制備的牛牛、人原代與與繼代細(xì)胞指示病毒體系系完善：DNA病毒與RNA病毒；；有囊膜病毒毒與無囊膜病病毒完全可以滿足足牛血清病毒毒安全檢測(cè)與與病毒清除/滅活工藝研研究與驗(yàn)證的的要求。2007年09月牛血清病毒安安全檢測(cè)的相相關(guān)工作BVDV方面面抗體檢測(cè)：目目前直接使用用IDEXX的ELISA試劑盒，，正在組建全全病毒抗原和和基因重組抗抗原的ELISA試劑盒。1陽性對(duì)照平均均值22陰性對(duì)照平均均值2-21樣品品1-20s/p值按試劑盒要求求，陰性平均均值應(yīng)小于0.20，本次次測(cè)測(cè)定定陰陰性性平平均均值值小小于于0.05，測(cè)測(cè)定定結(jié)結(jié)果果有有效效。。樣樣品品S/P值大大于于0.5判為為陽陽性性，，本本次次實(shí)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)20份原原料料血血樣樣品品的的抗抗體體檢檢測(cè)測(cè)S/P值均均小小于于此此值值，，故故全全部部判判為為陰陰性性。。原料料血血漿漿BVDV抗體體檢檢測(cè)測(cè)結(jié)結(jié)果果2007年年09月月牛血血清清病病毒毒安安全全檢檢測(cè)測(cè)的的相相關(guān)關(guān)工工作作BVDV方方面面核酸酸檢檢測(cè)測(cè)：：自自行行建建立立了了RT-PCR檢檢測(cè)測(cè)技技術(shù)術(shù)?？乖瓩z檢測(cè)測(cè)：：正正在在制制備備BVDV的的單單克克隆隆抗抗體體和和表表達(dá)達(dá)了了相相關(guān)關(guān)基基因因2007年年09月月牛血血清清病病毒毒安安全全檢檢測(cè)測(cè)的的相相關(guān)關(guān)工工作作BTV方方面面抗體體檢檢測(cè)測(cè)：：自自行行建建立立了了c-ELISA試試劑劑盒盒。。抗原原檢檢測(cè)測(cè)：：正正在在進(jìn)進(jìn)行行中中，，主主要要是是標(biāo)標(biāo)記記的的熒熒光光抗抗體體。。純化化VP7蛋蛋白白和和3E2-HRP單單抗抗的的競(jìng)競(jìng)爭(zhēng)爭(zhēng)ELISA反反應(yīng)應(yīng)特特異異性性柱柱狀狀圖圖與VMRD公公司司c-ELISA試試劑劑盒盒比比較較樣品品1:2和和1:4倍倍稀稀釋釋時(shí)時(shí)，，組組裝裝試試劑劑盒盒檢檢測(cè)測(cè)與與美美國(guó)國(guó)c-ELISA試試劑劑盒盒符符合合率率為為100%；；樣樣品品1:8倍倍稀稀釋釋，，BTV-18和和BTV-22組組裝裝試試劑劑盒盒為為陽陽性性，，進(jìn)進(jìn)口口試試劑劑盒盒為為陰陰性性；；1:16倍倍稀稀釋釋時(shí)時(shí)，，BTV-6組組裝裝試試劑劑盒盒為為陽陽性性，，進(jìn)進(jìn)口口試試劑劑盒盒為為陰陰性性，，其其余余相相同同；；1:32和和1:64倍倍稀稀釋釋時(shí)時(shí)；；BTV-19組組裝裝試試劑劑盒盒為為陽陽性性，，進(jìn)進(jìn)口口試試劑劑盒盒為為陰陰性性；；1:64倍倍稀稀釋釋時(shí)時(shí)，，兩兩試試劑劑盒盒檢檢測(cè)測(cè)結(jié)結(jié)果果一一致致。。2007年年09月月牛血血清清病病毒毒安安全全檢檢測(cè)測(cè)的的相相關(guān)關(guān)工工作作BTV方方面面核酸酸檢檢測(cè)測(cè)：：自行行建建立立了了通用用RT-PCR和Q-PCR試試劑劑盒盒，，正正在在報(bào)報(bào)批批中中。。M：：DL2000；；A：：50μμlBTV5+150μμl小小牛牛血血清清；；B：：100μμlBTV5+100μμl小小牛牛血血清清C：：150μμlBTV5+50μμl小小牛牛血血清清；；D：：200μμlBTV5BTV的的