農(nóng)殘檢測技術綜述

目 錄（一）

農(nóng)殘檢測前處理技術簡介（二）

國外農(nóng)殘檢測技術發(fā)展趨勢（三）

國內(nèi)農(nóng)殘檢測面臨任務（四）

CDFA-MRSM特點（五）

CDFA-MRSM儀器配置（六）

保留時間鎖定功能（一）農(nóng)殘檢測前處理技術簡介一 樣品予處理取樣：均勻、代表性處理：水樣，過濾；土樣，陰干、研細、過篩（40目）；動植物樣：高水分（水果、蔬菜），切塊、食品加工器中加工低水分（糧食）磨碎，過篩高脂肪（畜產(chǎn)品），切塊，攪肉機中加工。（一）農(nóng)殘檢測前處理技術簡介二 提取

用溶劑把分析目的物從樣品中溶解抽提出來。

溶劑的選擇：目的物溶解度大，基質干擾物溶解度小，純度高（農(nóng)殘級、HPLC級、分析純重蒸，濃縮200X，儀器檢測）（一）農(nóng)殘檢測前處理技術簡介二 提取按溶劑類型分類乙腈法—CDFA（US）

Dr.Mill乙酸乙酯法—歐盟法

(Sweden)丙酮法—FDA（US）

Dr.Luke混合溶劑法（乙腈-丙酮-甲醇）

—

FDA（US）

（測定牛奶中有機磷、有機氯）有機溶劑提取效果比較乙酸乙酯丙酮乙腈農(nóng)藥回收率高高高除脂肪一般較好好除蛋白好較好好除糖份好一般較好除水分好一般較好GC兼容性較好一般較好SPE

兼容性一般一般好GPC兼容性好一般一般揮發(fā)性一般較高一般成本低低較低毒性低低較低（一）農(nóng)殘檢測前處理技術簡介二 提取按樣品類型分類浸泡、振蕩、索氏提取-土壤（非結合殘留）勻漿外攪拌器

：水果、蔬菜、茶葉、糧食，（脂肪<2%）。內(nèi)攪拌器

：畜產(chǎn)品，（脂肪>2%）其它—SFE，超聲波提取（一）農(nóng)殘檢測前處理技術簡介三 凈化1液液萃取法（LLE）

分析目的物在兩種不相溶的溶劑中進行分配。

利用目的物與干擾物在兩種不相溶的溶劑中溶解度差異而達到分離目的。

根據(jù)目的物與干擾物性質，選擇溶劑對。

傳統(tǒng)方法多采用（如國標法）。

逐漸被取代（費時、費試劑、回收率易偏低）。（一）農(nóng)殘檢測前處理技術簡介三 凈化2固相萃取法SPE固相微萃取法SPME

分析目的物在鍵合硅吸附劑與溶劑中進行分配，而與干擾物分離。

原理：如圖1，圖2

適用范圍廣，各種不同結構類型的SPE商品柱適用于各種結構類型的農(nóng)藥分析。如表1

優(yōu)點：如表2

已成為農(nóng)殘分析主要前處理手段，代替LLE。發(fā)達國家廣泛應用，我國正在推廣。Next（一）農(nóng)殘檢測前處理技術簡介圖

1（一）農(nóng)殘檢測前處理技術簡介圖

2（一）農(nóng)殘檢測前處理技術簡介aminopropyl(Weak)表

1鍵合官能團分析官能團基質典型洗脫溶液應用范圍非極性萃取C18-Ocatadecyl疏水基：水基質：甲醇濫用藥物C8-OctylC2-EthylCH-CyclohexylPH-PhenylCN-End-capped芳香環(huán)烷基鏈水緩沖溶液生物流體乙腈乙酸乙酯氯仿酸化甲醇肽農(nóng)藥治療類藥物的監(jiān)測Cyanopropyl己烷極性萃取CN-Cyanopropyl親水基團：非極性基質：甲醇維生素D代謝物2OH-DiolSl-SilicaNH2-Aminopropyl羥基胺基雜原子（S.O.N)己烷油類氯仿異丙醇丙酮脂肪分離油類添加劑碳水化合物脂肪類酚類陽離子交換萃取SCX-BenzenesulfonicAcid(Strong)PRS-Propylsulfonic陽離子：胺類嘧啶類水基質：水酸性緩沖溶液堿性緩沖溶液高離子強度緩沖溶液兒茶酚胺類除草劑藥物Acid(Strong)生物流體CBA-Carboxylic

Acid(weak)陰離子交換萃取SAX-QuaternaryAmine(Strong)PSA-Primary/Secondary陰離子：羧酸磺酸水基質：水堿性緩沖溶液酸性緩沖溶液高離子強度緩沖溶液有機酸維生素脂肪酸Amine磷酸鹽（或酯）生物流體磷酸鹽（或酯）NH2-Aminopropyl(Weak）DEA-Diethyl-（一）農(nóng)殘檢測前處理技術簡介續(xù)表

1鍵合官能團分析官能團基質典型洗脫溶液應用范圍共價萃取PBA-Phenyl-連位二醇水基質：酸性緩沖溶液核苷酸類boronicAcid堿性緩沖溶液酸化甲醇核苷類生物流體碳水化合物兒茶酚胺類特殊相Bond

ElutCertify陽離子型濫用藥水基質：強酸堿性藥物物水強堿中性藥物藥物酸性緩沖溶液酸/堿性有機混合生物流體物Bond

ElutCertify陰離子型濫用藥水基質：強酸酸性藥物II物水強堿藥物堿性緩沖溶液酸/堿性有機混合羧酸生物流體物磺酸EnvirElut疏水基：水基質：己烷油、油脂、脂肪芳香環(huán)水二氯甲烷農(nóng)藥烷基鏈流體酚類多環(huán)芳烴（一）農(nóng)殘檢測前處理技術簡介續(xù)表

1鍵合官能團分析官能團基質典型洗脫溶液應用范圍特殊相AccuCAT陰，陽離子水基質：酸性/堿性緩沖溶有機酸水液兒茶酚胺類生物流體緩沖溶液高離子強度緩沖溶液堿性藥物TCA疏水基：水基質：甲醇Tricyclics芳香環(huán)生物流體堿性甲醇Benzodiazepines烷基鏈LMS疏水基：水基質：乙腈藥物芳香環(huán)水烷基鏈流體ENV疏水基：水基質：乙腈爆炸物芳香環(huán)水甲醇農(nóng)藥烷基鏈流體乙酸乙酯PPL疏水基：水基質：甲醇酚類芳香環(huán)水乙酸乙酯烷基鏈流體（一）農(nóng)殘檢測前處理技術簡介表2 固相萃取法與液-液萃取法操作比較方法項目液-液萃取法（LLE)固相萃取法(SPE)取樣量1000ml

×

42-200ml

×

4包裝運輸貯藏大量水樣少量柱或溶劑（田間過柱、洗脫或實驗室洗脫）萃取有機溶劑用量100ml/樣8ml/樣操作時間0.5小時/樣（萃?。?—8小時（脫水）/樣5—10分鐘（過柱，100ml)6分鐘/樣（轉移、定容）濃縮100ml20

分鐘1ml(100倍）不需濃縮過鍵柱時100ml1ml(100x)凈化過凈化柱不需凈化總耗時間6—10小時/樣10—20分鐘/樣優(yōu)缺點費時、費溶劑、設備復雜省時，省溶劑、操作簡單、易實現(xiàn)半自動結果準確度、精密度較低化、自動化，結果準確度、精密度較高（一）農(nóng)殘檢測前處理技術簡介三 凈化3 凝膠滲透法（GPC）.

原理：基于物質分子大小和形狀不同來實現(xiàn)分離的。主要依據(jù)相對分子量的差別，通過GPC將農(nóng)藥與農(nóng)藥、農(nóng)藥與共提取物分開。從而使之得到分離和凈化。（大多數(shù)農(nóng)藥分子量小于500）如圖3

優(yōu)點：凈化容量大，適用于有機磷、有機氯農(nóng)藥的提取，去除脂肪和色素。大多數(shù)農(nóng)藥回收率較高。容易實現(xiàn)自動化。

缺點：凝膠柱成本較高，溶劑用量大。

歐洲應用的較多。（一）農(nóng)殘檢測前處理技術簡介圖

3（一）農(nóng)殘檢測前處理技術簡介三 凈化4 超臨界萃取法（SFE）

用超臨界流體為萃取劑，從復雜組分中把目的物組分提取出來。

原理：依據(jù)超臨界流體中不同物質的溶解度不同達到分離的目的。

優(yōu)點：①快速方便、選擇性強；②流體密度、溶解度、粘度都能通過壓力控制；③超臨界流體常溫下可自然揮發(fā)，省去了濃縮步驟；④可與GC、LC及超臨界色譜聯(lián)機；⑤樣品用量少、回收率高等。

缺點：①設備投資大、技術要求高；②分析物質濃度過高干擾檢測；③基質對萃取過程影響較大；④適用的農(nóng)藥和樣品范圍較窄

SFE是農(nóng)藥多殘留分析中具有發(fā)展前景的技術。（一）農(nóng)殘檢測前處理技術簡介三 凈化5其它：磺化法、冷凍法、凝結沉淀法。

磺化法：利用脂肪和蠟質能與濃硫酸進行磺化反應的原理，有效去除基質中的脂肪和蠟質（前提是測定的農(nóng)藥不與硫酸反應，常用于有機氯農(nóng)藥檢測）。

冷凍法：低溫下有機溶液里，動植物中脂肪、蠟質沉淀析出，而農(nóng)藥留在溶液中，達到分離目的。

凝結沉淀法：用凝結劑將脂肪和色素等雜質沉淀的凈化方法，適用于極性較強，在水中有一定溶解度的農(nóng)藥。（一）農(nóng)殘檢測前處理技術簡介四 濃縮

真空旋轉蒸發(fā)法：處理溶劑量大、速度快、損失率高。

KD濃縮器：處理量大、農(nóng)藥提取較充分、損失率較真空旋轉蒸發(fā)器低、耗時較長。

氮吹儀：濃縮效率高，農(nóng)藥損失率低，溶劑處理量小，與SPE凈化方法結合是理想的濃縮裝置。

自然揮發(fā)法：濃縮慢，適于體積小，易揮發(fā)的溶劑。（二）國外農(nóng)殘檢測技術發(fā)展趨勢一 趨勢:對農(nóng)產(chǎn)品,食品安全高度重視,表現(xiàn)在:-體系完備；法規(guī)、標準健全；機構、人員、設備完善-監(jiān)控、檢測及時有力；確保消費者身體健康和商品在國際市場上的競爭力為達到ISO9000和各國政府法律法規(guī)和標準（如GLP），要求檢測技術：-檢測能力大-方法指標嚴-樣品處理量小-分析目的物種類,數(shù)量多-準確度精確度靈敏度要求高-數(shù)據(jù)文件處理量大（二）國外農(nóng)殘檢測技術發(fā)展趨勢二 概況:GC-揮發(fā)性農(nóng)藥快速篩選HPLC-半揮發(fā),不揮發(fā),極性,熱不穩(wěn)定性農(nóng)藥確證(結構鑒定)-GC/MS,LC/MS分析目的物-母體,農(nóng)藥代謝物,降解產(chǎn)物,結合殘留（二）國外農(nóng)殘檢測技術發(fā)展趨勢二

概況:1前處理技術(1)傳統(tǒng)技術如液-液萃取(LLE);索式提取(SoxhletExtraction);振蕩-過濾(Shake-Filter);勻漿(blending)等仍在使用(參考文獻1)。(2)最大進展是固取萃取(SPE)廣泛用于農(nóng)殘分析,集萃取、凈化、濃縮于一步,具有縮短分析時間,降低成本,節(jié)省有機溶劑,可實現(xiàn)半自動化,全自動化操作等優(yōu)點(參考文獻2,3)。(3)用活性碳柱和SPE柱凈化,GC/MS和HPLC-FLD，檢測水果,蔬菜中200多種有機氯、有機磷、含氮和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留方法已發(fā)表(參考文獻7)。（二）國外農(nóng)殘檢測技術發(fā)展趨勢二 概況:1前處理技術(4)非極限萃取(nonexhaustiveextraction)、用SPE拄(Cartridges)和膜(disks)結合GC和GC/MS方法，在線和非在線液體提??；固相微萃取(SPME)；超臨界萃取(SFE)；基質固相分散萃取(Matrixsolid-phasedispersionextraction)；苯乙烯-二乙烯基苯共聚物萃?。欢嗫滋贾蚐PE拄或膜(特別是C8,C18)結合使用；加速溶劑萃取(acceleratedsolvantextraction)；微波萃??；鈍化擴散聚合物膜(passivediffusionthroughpolymericmembranes)；離心分離層析；自動液-液、索氏和SPE萃??；自動化凝膠滲透層析；液體樣品經(jīng)固相沉淀后，SFE萃取水中揮發(fā)和半揮發(fā)農(nóng)藥；頂空SPME等前處理技術，在制備液體和固體樣品時如何應用均有報導(參考文獻4,5,6)。（二）國外農(nóng)殘檢測技術發(fā)展趨勢二 概況:2GC,GC/MS(1)高效毛細管柱(非極性和中等極性固定相）,雙柱定性定量代替?zhèn)鹘y(tǒng)填充柱。(2)廣泛使用元素選擇撿定器(ECD,FPD,NPD等)。(3)GC/MS和GC/MS-MS作確證和結構鑒定。(4)SPE結合GC/MS，提供了有效和強有力的分析系統(tǒng)。(5)用原子發(fā)射撿定器(AED)可以篩選400多種農(nóng)藥殘留。(6)手性高分辨率GC/MS用于選擇性檢測農(nóng)藥異構體和對映異構體。（二）國外農(nóng)殘檢測技術發(fā)展趨勢二 概況:3HPLC，LC/MS(1)C8、C18反相柱最常用于HPLC農(nóng)殘檢測。(2)吸附柱

(silica,gel)；極性鍵合柱(cyano,amino)；離子交換；離子色譜(IC)；離子對；混合官能度柱(multimodal)也用于特殊分析。(3)HPLC-SFC/MS改善選擇性,達到凈化測定一體化(4)固定和可調(diào)波長UV-VIS檢定器常用于HPLC農(nóng)殘分析，二極管陳列UV-VIS檢定器和MS，提供農(nóng)藥結構鑒定,其他如FLD和電化學檢定器用于單個或多個檢定器系統(tǒng)。(5)LC/MS和LC/MS-MS(ES)用于農(nóng)藥多殘留分析已有報導。（二）國外農(nóng)殘檢測技術發(fā)展趨勢二 概況:4CE(capillaryelectrophoresis),IC(ionchroniatography)和其他色譜(1)SFC(超臨界色譜)結合SFE用于土壤中農(nóng)藥分析。(2)歐洲廣泛應用高效自動化薄層層析(TLC)定量檢測飲用水中污染物。(3)CE,CE/MS和IC分離,測定作物和其他基質中農(nóng)藥、農(nóng)藥代謝物殘留和無機物殘留是很大進展。用CE分析大豆中多種極性農(nóng)藥是一個典型例子。(4)CE,IC和AAS(原子吸收),ICP-AES,ICP-MS結合用于重金屬分析（二）國外農(nóng)殘檢測技術發(fā)展趨勢二 概況:5生物技術方法(1)

特異性抗體的開發(fā)，導致免疫分析方法(Immunoassay)用于實驗室和田間農(nóng)殘分析。(2)免疫分析商品化檢測試紙，在分析有機磷、氨基甲酸酯、硫代氨基甲酸酯、氯代苯氧羧酸、均三氮苯、苯胺、有機氯等農(nóng)藥殘留成為有價值的方法。(3)免疫分析用于大監(jiān)測項目、農(nóng)藥登記、代謝物研究、親合色譜(affinitychromatography)

、食品調(diào)查、人類和環(huán)境對農(nóng)藥暴露研究等方面。（三）國內(nèi)農(nóng)殘檢測面臨任務形勢:1.農(nóng)藥生產(chǎn)產(chǎn)量40萬噸,居世界第二位(僅次于美國)，其中殺蟲劑占總量70%；有機磷殺蟲劑占殺蟲劑產(chǎn)量70%；甲胺磷,甲基對硫磷,對硫磷,氧樂果，久效磷又占有機磷殺蟲劑產(chǎn)量70%。2.農(nóng)藥使用年使用量27萬噸

居世界前列；使用區(qū)域集中(江蘇,浙江,山東等)；施用作物-蔬菜,播種面積占農(nóng)作物10%,單位面積施藥量最大,年人均占有量最大(300公斤)（三）國內(nèi)農(nóng)殘檢測面臨任務3.農(nóng)藥污染(蔬菜)1)2001年

全國23個城市181種蔬菜檢測,超標率47.5%。2)某省五個菜市場抽檢48個菜樣,44個不合格,高毒農(nóng)藥檢出率達30%。3)

北京部分市場檢測超標率18%,自產(chǎn)有機磷超標率17%,進京菜農(nóng)藥超標率69%。4)

上海,廣西,天津相繼發(fā)生甲胺磷污染蔬菜造成急性中毒事件,中毒人數(shù)達數(shù)百人。5)

調(diào)查結果表明，有機磷(甲胺磷,乙酰甲胺磷,氧樂果,敵敵畏等)和氨基甲酸酯(克百威)是造成蔬菜中農(nóng)殘超標,引發(fā)急性中毒的主要農(nóng)藥品種。（三）國內(nèi)農(nóng)殘檢測面臨任務基于上述情況造成農(nóng)產(chǎn)品(蔬菜),污染嚴重

國際市場-出口受阻(面臨法規(guī),標準;檢測技術,方法的嚴重挑戰(zhàn))。

國內(nèi)市場-消費者憂心重重(放心工程)。

農(nóng)業(yè)部實施無公害食品行動計劃，建立農(nóng)藥殘留檢測系統(tǒng)。

急需建立與國際接軌的農(nóng)殘檢測技術,標準操作程序(SOP)和GLP實驗室,取代我國現(xiàn)有檢測農(nóng)藥品種數(shù)量單一、前處理復雜、費時、靈敏度，準確度差的農(nóng)殘檢測方法，以出具科學,公正,國際認可的農(nóng)殘檢測數(shù)據(jù)。（四）CDFA-MRSM特點一 簡介CDFA-MRSM

是由CaliforniaDepartmentofFoodandAgriculture(CDFA)

下屬CenterofAnalyticalChemistry(CAC)開發(fā)的農(nóng)藥多殘留快速掃描技術(Multiresiduescreenmethod-MRSM)適用于新鮮蔬菜水果中四大類（有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯、氨基甲酸酯）200多種農(nóng)藥母體

、代謝物、降解產(chǎn)物的檢測固相萃取代替液-液萃取,

氮吹儀濃縮代替旋轉蒸發(fā)儀,雙毛細管柱、雙檢定器、GC、HPLC定性定量，GC/MS確證是美國農(nóng)業(yè)部(USDA)、FDA、EPA認可的官方方法在加州CDFA、佛羅里達州FDOACS(FloridaDepartmentofAgricultureandConsumerServices)和

WashingtonDepartmentofAgriculture等實驗室使用，質量保證和方法認證程序，遵從美國農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥數(shù)據(jù)庫項目(USDA、PDP)和EPA、FDA的GLP規(guī)定97年引入中國，在農(nóng)業(yè)部環(huán)境監(jiān)測總站（天津），Agilent實驗室，北京錦繡大地農(nóng)業(yè)股份有限公司檢測中心驗證和應用，即將批準為國家標準和農(nóng)業(yè)行業(yè)標準檢測方法。二CDFA-MRSM在中國實驗室驗證技術指標表0.005-0.2<20%70-120%CH:0.2

–1.6OP:0.25CARB:0.25CDFACH:0.0001-0.0170(μECD)OP:0.0100-0.2000

(FPD)CARB:0.0010-0.0020(FLD)<20%70-120%CH:0.01-1.00OP:0.05-3.00CARB:0.05-0.50北京錦繡大地檢測中心CH:0.0011-0.1154(ECD)OP:0.0065-0.1725

(FPD)0.0104-0.8625(NPD)CARB:0.0051-0.0106(FLD)<20%70-120%CH:0.01-4.25OP:0.05-2.00CARB:0.10-0.55農(nóng)業(yè)部環(huán)境監(jiān)測總站（天津）CH:0.0001-0.0480(μECD)OP:0.0250-0.6000

(FPD)CARB:0.0010-0.0030(FLD)<20%70-120%CH:0.01-1.00OP:0.05-3.00CARB:0.05-0.50Agilent實驗室MDL（ppm）變異系數(shù)平均回收率（%）添加濃度范圍（ppm）項目類別三

方法評價CDFA-MRSR與傳統(tǒng)方法比較取100ml

士/樣10-15分/樣（不需脫水）60-120分/樣（脫水）濃縮氮吹儀旋轉蒸發(fā)儀或K-D濃縮器3-5分/樣15-20分/樣<3%10-20%或<10%凈化不需凈化柱層析（有機氯），30-60分/樣0ml/樣50-100ml/樣2-3小時/樣（有機磷）前處理總消耗時間0.5-1小時/樣8-12小時/樣（有機氯）檢測農(nóng)藥類型一次處理可同時檢測有機磷、有機氯、菊酯、氨基甲酸酯類不同農(nóng)藥采用不同方法分別處理檢測農(nóng)藥數(shù)量200種（一次處理）其中：有機磷80種、有機氯、菊酯100種氨基甲酸酯20種34種（分類處理）其中：有機磷20種有機氯11種菊酯3種檢測準確度、靈敏度步驟簡單、損失小；毛細管柱，雙柱、雙檢定器同時定性、定量。檢測準確度、靈敏度高。步驟多、易損失；一般用填充柱、單檢定器定性、定量檢測時間未知掃描200種（一次處理）1-1.5小時/樣<20種/類(一次處理)4-13小時/樣方法特點省溶劑、省時、省工；前處理設備簡單，一次處理檢出農(nóng)藥多，適合于未知農(nóng)藥多殘留快速掃描。用于果蔬批發(fā)市場和生產(chǎn)基地，進出口基地執(zhí)法檢測。溶劑、時間、人工消耗較多，前處理設備復雜（索氏提取器、K-D濃縮器、旋轉蒸發(fā)器）；一次處理檢出農(nóng)藥少，適于已知單殘留檢測。難以滿足市場檢測需要。法 MRSM（CDFA)固相萃取傳統(tǒng)方法(國標方法)萃方 式溶

劑

用

量時 間儀 器時 間損

失

率時

間溶

劑

用

量液-液萃取15ml

士/樣方項目CDFA-MRSM與酶法比較較酶法慢，一個樣品掃描200種農(nóng)藥需1.0-1.5小時。成本高?？焖佟⒑唵?、易操作、成本低檢測時間與成本檢測數(shù)據(jù)可直接作為執(zhí)法依據(jù)通常檢測數(shù)據(jù)不能直接作為執(zhí)法依據(jù)，還需用化學法驗證后方可生效檢測數(shù)據(jù)的可靠性用雙色譜柱雙檢定器同時定性定量，準確度均較高對殘毒愈高的樣品誤差愈小檢測準確度在實驗室進行可在現(xiàn)場檢測（便攜式）檢測方式對各類農(nóng)藥靈敏度均較高，如：甲胺磷可檢出0.01-0.05ppm有的農(nóng)藥靈敏度很低，如：甲胺磷

感度為65.62ppm檢測靈敏度適用于各類蔬菜（葉菜、果菜、根菜、莖菜等）葉菜類；不適于果菜及根菜類檢測蔬菜品種約200多種（其中1類80多種，2類20多種，3、4類100多種）約20多種（僅1，2類）檢測農(nóng)藥數(shù)量1.有機磷3.有機氯2.氨基甲酸酯4.擬除蟲菊酯1.有機磷2.氨基甲酸酯檢測農(nóng)藥類型MRSM法（CDFA)酶法檢測方法FDA、CDFA、Canada方法比較方

法提取溶劑SPE柱農(nóng)藥數(shù)量回收率綜合比較FDA（GC、HPLC、GC/MS)丙酮C18,SAX100以上80-110%甲胺磷、乙酰甲胺磷、氧樂果、氯硝銨、異菌脲

R>80%成本高，步驟多（LLE，CH2CL2)靈敏度、準確度高CDFA（GC、HPLC、GC/MS)乙腈FL,NH2-Propyl20070-120%成本較低快速簡便（無LLE，少量CH2CL2

)Canada(GC/MS)乙腈C18,EnvirocarbNH2-Propyl;Chorcoal-celite20170-110%DDVP、甲胺磷、乙酰甲胺磷、百菌清、氯硝銨R<70%成本較高簡便快速（無LLE，CH2CL2)（五）CDFA—MRSM要求的儀器配置農(nóng)藥類別儀器進樣器色譜柱檢定器數(shù)據(jù)處理有機氯、GC自動進樣器HP-1或

DB-1ECD一臺化學工作站控制二臺氣菊酯類Agilent689030m×0.25mm×0.25μmHP-50+

或

DB-1730m×0.25mm×0.25μmECD譜有機磷類GCAgilent6890自動進樣器HP-1或DB-130m×0.53mm×1.5μmHP-17或DB-1730m×0.53mm×1.0μmFPDFPD氨基甲酸酯類HPLC(帶柱后衍生系統(tǒng))自動進樣器或手動進樣C8

4.6mm×250mm，5μC18

4.6mm×250mm，5μFLD積分儀或化學工作站Agilent1100Pickering5200確證GC-MSAgilent5973自動進樣器HP-5MS30m×0.25mm×0.25μmMSD化學工作站（六）保留時間鎖定功能保留時間鎖定軟件（RetentionTimeLocking）介紹氣相色譜是現(xiàn)代分析儀器當中分析復雜有機樣品的有力工具。氣相色譜依據(jù)樣品當中不同化合物在同一根色譜柱上保留時間的差異對其進行定性分析。在不同的操作條件下，不同的儀器上同一化合物的保留時間會發(fā)生漂移。即使在同一臺儀器上，相同的操作件下，由于載氣壓力的變化或者由于色譜柱的長度發(fā)生變化同樣會導致化合物的保留時間發(fā)生變化。所有這些都給化合物的定性帶來困難。Agilent

公司獨有的保留時間鎖定軟件利用6890N氣相色譜精確的EPC控制技術，通過繪制保留時間與載氣壓力的關系曲線，可將目標化合物的保留時間牢牢鎖定。而分析方法一旦被鎖定，在其被移植到其它儀器上時，也能確保目標化合物的保留時間保持恒定。保留時間鎖定軟件操作基本步驟：（六）保留時間鎖定功能1.在Agilent公司氣相色譜軟件上安裝保留時間鎖定軟件后，在儀器控制界面（Instrument）第一行會出現(xiàn)兩個新的按鈕：RTLock和

RTSearch,

分別點擊這兩個按鈕，會出現(xiàn)一系列操作命令（見圖1）圖

1.

方法和運行控制界面中與RTL相關的菜單（六）保留時間鎖定功能2．如果是第一次建立保留時間鎖定方法，必須預先在恒壓工作方式下以五個不同的載氣壓力（其它操作條件一樣）運行同一樣品，得到五個數(shù)據(jù)文件，選擇某一化合物作為鎖定對象，記錄下此化合物在上述五個不同載氣壓力下的保留時間。然后選取RTLock按鈕下的New

RTLCalibration..命令，出現(xiàn)如右圖所示的界面：（六）保留時間鎖定功能在圖中的Run1-Run5行中分別填入載氣壓力和與此相關的化合物的保留時間，然后在DesiredRetTime空格中添入你希望的此化合物的保留時間，在隨后的兩行中設定允許的載氣壓力的最大和最小值，再添入化合物名稱即可（見圖2）圖

2.

保留時間鎖定校準表（六）保留時間鎖定功能3．軟件會根據(jù)以上步驟輸入的相關信息，自動描繪出保留時間與載氣壓力的關系曲線（如下圖）。整個保留時間鎖定方法的建立完成。（六）保留時間鎖定功能4．分析方法被鎖定后，在日常工作當中用此方法分析樣品，能夠確?；衔锏谋Ａ魰r間基本固定。如果由于某種原因（例如色譜柱的長度發(fā)生變化）導致化合物的保留時間出現(xiàn)較大偏移，此時需要對分析方法重新鎖定。在重新鎖定方法之前，必須用此分析方法對樣品進行一次分析，得到此時鎖定化合物的保留時間。然后點擊RTLock按鈕下的（Re）Lock

current

method命令，待出現(xiàn)如下顯示框后，在左邊窗口處輸入剛剛得到的當前化合物的保留時間，在右邊窗口輸入載氣壓力，隨后點擊Calc

new

pressure按鈕，軟件自動計算出為使化合物保留時間固定而需要的載氣壓力。最后點擊Updatecurrent

HP6890

Method按鈕，將更改后的載氣壓力保存到分析方法中。方法重新鎖定工作即完成。（六）保留時間鎖定功能5．在RTSearch

菜單中選擇EditRTTable命令，可編輯保留時間檢索表。將在鎖定方法下運行標樣得到的各化合物的保留時間及名稱和其它相關信息（包括分子式，化學文摘號等）輸入其中，然后將此表保存在鎖定分析方法中。以后在使用本方法進行樣品分析后，即可通過軟件對所得到的結果對目標化合物按照保留時間進行自動檢索，實現(xiàn)快速掃描。（六）保留時間鎖定功能自動保留時間鎖定軟件在Agilent6890N（雙柱雙檢測器）上的基本操作方法：1.軟件的安裝與啟動安裝：自動保留時間鎖定軟件的安裝與使用必須建立在保留時間鎖定軟件的基礎之上，即在安裝之前保留時間鎖定軟件應已經(jīng)安裝在工作站上。將“autolock.zip”文件解壓縮得到“ALCK1HPL.TXT”、“ALCK2HPL.TXT”、“AUTOLOCK.DOC”、“AUTORTCL.MAC四個文件，將“ALCK1HPL.TXT”、“ALCK2HPL.TXT”、“AUTORTCL.MAC”復制到工作站軟件安裝目錄中的“CORE”目錄下。如“C:\HPCHEM\CORE\…”。啟動：首先運行工作站軟件（instrumentonline）在命令行中輸入“MACROAUTORTCL.MAC,GO”[ENTER]（見圖1）。此時會在菜單欄“RTLock”下出現(xiàn)相關命令。圖1.

自動保留時間鎖定軟件的啟動（六）保留時間鎖定功能2.

運行自動保留時間鎖定程序。建立保留時間鎖定方法，必須先建立該方法的保留時間鎖定校準表。即分別在五個不同的載氣壓力下對某一樣品以恒壓模式運行此方法，得到五個數(shù)據(jù)文件，選擇樣品中某一化合物作為被鎖定的對象，繪制出該化合物的保留時間-壓力關系圖。（在建立保留時間鎖定校準表前，需用該方法測得此化合物的保留時間）保留時間鎖定方法建立后，如果化合物的保留時間發(fā)生漂移，只需用該樣品對此方法進行保留時間鎖定，軟件就會自動調(diào)節(jié)此方法中的載氣壓力，使被鎖定的化合物的出峰時間保持不變，進而使所有化合物的出峰時間保持恒定，從而達到保留時間鎖定的目的。A:對某一方法自動建立保留時間鎖定校準表（以A、B雙通道為例）。將要進行保留時間鎖定的方法分別令存為*A.m、*B.m（下文將以test.m、testA.m、testB.m為例），用來分別存放A、B通道各自的保留時間鎖定校準表。（六）保留時間鎖定功能對于A通道（前柱前檢測器）：步驟一：調(diào)入方法“testA.m”，改變方法為只用前進樣器進樣，柱1載氣采用恒壓模式，只保存前檢測器收集到的信號，保存方法。（見圖2）圖2.

樣品進樣方法的改變（六）保留時間鎖定功能步驟二：在菜單欄中找到RTLock頭AutoRTL

Calbration…(見圖3)圖3.

選擇自動建立保留時間鎖定校準表步驟三：將出現(xiàn)以下提示，將含有被鎖定化合物的樣品放在自動進樣器樣盤的第一位（如有自動進樣器），點擊OK（見圖4）圖4.

擺放樣品準備開始進樣（六）保留時間鎖定功能步驟四：設定建立保留時間校準表所需的各項參數(shù)。首先輸入目標化合物在A通道上的保留時間，然后選擇前進樣口進樣，輸入化合物名稱。（見圖5）圖5.

設定各項參數(shù)，以乙硫磷為例。（注意對于后進樣口，必須先輸入目標保留時間才能選擇進樣口和輸入化合物名稱）（六）保留時間鎖定功能步驟五：系統(tǒng)提示儀器將按照方法testA.m對樣品六次進樣，第一次不進樣空白運行方法，除去色譜柱中的雜質；第二至第六次分別以方法中設定的載氣壓力、設定載氣壓力的±20%、±10%測定樣品。如要終止程序只能選擇菜單欄“Abort”中的“Abort”退出命令。（見圖6）圖6.

開始進樣（六）保留時間鎖定功能步驟六：系統(tǒng)會自動生成一個臨時方法文件“RTL_TEMP.M”，如果該方法已存在，系統(tǒng)會詢問是否覆蓋，請選擇“YES”。儀器開始進樣自動運行。（見圖7）圖7.

儀器進樣運行步驟七：儀器運行完畢，保留時間鎖定方法A通道校準表建立完成。（見圖8）圖8.

校準表建立完成（六）保留時間鎖定功能步驟八：選擇菜單欄“RTLock”中“EditRTLCalibration…”選項，可看到剛才所