【實用】檢驗科SOP文件【實用】檢驗科SOP文件藥海無涯學(xué)無止境專注醫(yī)學(xué)領(lǐng)域藥海無涯學(xué)無止境專注醫(yī)學(xué)領(lǐng)域結(jié)核桿菌核酸擴(kuò)增熒光檢測目的：保證TBDNA檢測結(jié)果準(zhǔn)確、可靠。適用范圍：TBDNATaqMan熒光定量檢測，標(biāo)本類型為血清。負(fù)責(zé)人：操作人：RA（q酶（）PCR。性能參數(shù)：檢出低值＜1×103基因拷貝/ml。標(biāo)本要求：標(biāo)本類型：血清。標(biāo)本采集：見標(biāo)本采集手冊。8小時，4-872小時，-206個月，應(yīng)避免反復(fù)凍融。室溫運(yùn)輸。容器和添加劑類型：無菌離心管和無菌真空管。（4℃、℃、生物安全柜、紫外燈試劑：DNA提取液（500μl/管）2管；TB-PCR反應(yīng)液（未貼標(biāo)簽管）0（×8基因拷貝（/管1管；陰性質(zhì)控品管）1管。校準(zhǔn)程序（計量學(xué)溯源性程序步驟:：標(biāo)本處理：標(biāo)本采集、保存和運(yùn)送5ml或直接抽取外周血2ml（抗凝。標(biāo)本可立即用于測試，也可保存于-20℃待測，保存期為六個月。標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用0℃冰壺。標(biāo)本及質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品的處理44%NaOH1015000rpm51ml打勻，15000rpm5分（知液標(biāo)本直用淋巴細(xì)胞分離液分離沉淀）沉淀直接加50ulDNA,(,取樣沸水浴0分鐘（誤差不超過1分鐘，轉(zhuǎn)至℃靜置8小時以保52ulPCR反應(yīng)。另40ulDNA10分鐘后同上處理。PCRDA-620儀器熒光檢測操作取單管人份PCR反應(yīng)管一管，直接加入處理后樣品或陰陽性質(zhì)控品2ul，6000rpm離心數(shù)秒。將各反應(yīng)管放入PCR儀，按下列條件擴(kuò)增：93℃293℃4555℃120秒,10個循環(huán)后置33℃保溫,,93℃45120303393℃3055℃6093℃4555℃120秒。PCRPCR33擴(kuò)增后的反應(yīng)管放入熒光檢測儀，讀取并記錄讀數(shù)A1。熒光激發(fā)波。ABIGeneAmp5700操作PCRABIGeneAmp570093℃45秒55℃601093℃3055℃4530個循環(huán)。結(jié)果分析條件的設(shè)定ABIGeneAmp5700的條件設(shè)置：反應(yīng)結(jié)束后保存檢測數(shù)據(jù)文件。根據(jù)baselinestart值(2~4),stop值Threshold值,Ct30,Ct強(qiáng)陽CtCt值.質(zhì)量控制程序：陰性質(zhì)控品：全部陰性陽性定量標(biāo)準(zhǔn)品：全部陽性︱r︱≧0.97(correlation-0.97~-1);108104基因拷貝/ml的。干擾（如乳糜血、溶血、膽紅素血）和交叉反應(yīng)：乳糜血、溶血、膽紅素血基本不影響本實驗的測定。生物參考區(qū)間：正常人樣本為陰性或0基因拷貝/ml。值<40，實驗樣本的TBDNA含量（基因拷貝數(shù)值TBD