—、產(chǎn)品應(yīng)用ND-2000是目前國(guó)內(nèi)外實(shí)驗(yàn)室中使用最為廣泛的一款微量分光光度計(jì)，其優(yōu)越的性能、準(zhǔn)確的結(jié)果贏得了廣大用戶的好評(píng)。該產(chǎn)品可用于以下幾個(gè)方面：*紫外檢測(cè)：常規(guī)xx波長(zhǎng)下檢測(cè)樣品吸光值；*核酸檢測(cè)：可檢測(cè)dsDNA、ssDNA、RNA等不同類(lèi)型核酸的濃度及其在260nm、280nm處的吸光值；*探針檢測(cè)：檢測(cè)熒光標(biāo)記探針的吸光值，可用于去除未能標(biāo)記探針的樣品；*細(xì)胞培養(yǎng)物檢測(cè)：檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)物在600nm處的吸光值；*蛋白檢測(cè)：檢測(cè)普通純化后蛋白的濃度和280nm處的吸光值；*蛋白標(biāo)記檢測(cè)：可檢測(cè)被BCA、Bradford或Lowry標(biāo)定的蛋白樣品，自動(dòng)畫(huà)出標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算出待測(cè)蛋白質(zhì)濃度。二、產(chǎn)品簡(jiǎn)介NanoDrop2000超微量分光光度計(jì)是NanoDrop的最新產(chǎn)品，應(yīng)用液體的表面張力特性，樣品體積只需要0.5~2ul,在檢測(cè)臺(tái)上，經(jīng)上下臂的接觸拉出固定的光徑達(dá)到快速、微量、高濃度、免石英管、免毛細(xì)管等耗材檢測(cè)吸收值的優(yōu)點(diǎn)。此產(chǎn)品設(shè)計(jì)受專(zhuān)利保護(hù)，并在全世界廣受歡迎，其準(zhǔn)確度與便利性讓科學(xué)家得以更有效率進(jìn)行各項(xiàng)研究。NanoDrop2000使用高能量顯燈（pulsedxenonflashlamp）可提供190-840nm的全光譜檢測(cè)，且不需要暖機(jī)，開(kāi)機(jī)后立即使用。搭配高感度CCDarray檢測(cè)器，檢測(cè)吸收值可高達(dá)300Abs（dsDNA濃度2也5000ng/ul）,大部分純化后的核酸幾乎都不需要稀釋即可檢測(cè)。待測(cè)樣品的均質(zhì)性是NanoDrop2000的最高要求，一般核酸、蛋白質(zhì)樣品能在檢測(cè)前以vortexmixer震勻?yàn)樽罴眩魺o(wú)vortexmixer也應(yīng)以pipette吸放數(shù)次混勻。若擔(dān)心genomicDNA可能因前述動(dòng)作而斷裂，則改以55?C加熱約一分鐘，使樣品在偵測(cè)前呈現(xiàn)均勻狀態(tài)，以確保2ul具有代表性。檢測(cè)時(shí)選擇不同檢測(cè)模式，可以得到最快速的結(jié)果：NucleicAcid?C吸q攵光譜、230nm,260nm,280nm吸收值（換算成10mm光徑吸收值）、、及核酸濃度。UV-Vis?C190~840nm間所有波長(zhǎng)的吸收值及光譜（以1mm光徑吸收值呈現(xiàn)）。?A280蛋白質(zhì)定量法?C280nm吸收值（換算成10mm光徑吸收值）、ratio及蛋白質(zhì)濃度。僅適用于純化后的蛋白質(zhì)，須具有已知的質(zhì)量消光系數(shù)（massextinctioncoefficient）方可計(jì)算。BCA、Bradford及Lowry?C依不同呈色劑提供不同波長(zhǎng)吸收值結(jié)果，自動(dòng)畫(huà)出標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算Rsquare,待測(cè)蛋白質(zhì)濃度。*蛋白質(zhì)檢測(cè)模式目前提供BCA、Bradford及Lowry三種常見(jiàn)定量呈色劑，因呈色劑隨時(shí)間會(huì)逐漸加深，使用前請(qǐng)?jiān)旈喸噭┱f(shuō)明書(shū)并制備不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品，在最佳時(shí)間內(nèi)完成檢測(cè)，以得到良好的標(biāo)準(zhǔn)曲線。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線最多可有七個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品，每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品最多可做五重復(fù)。*測(cè)蛋白質(zhì)時(shí)樣品體積需使用2ul,每個(gè)樣品檢測(cè)后需以Kimwipes低塵擦拭紙(編號(hào)：34155)擦拭15~20回，以避免呈色劑與蛋白質(zhì)的殘留。BCAmodifiedBradfordMini樣品核酸純BSALowryBradford種類(lèi)最低濃度2ng/ul0.10mg/ml0.2mg/ml0.2mg/mll00ug/ml最高濃度15000ng/ul(dsDNA)12000ng/ul(RNA)IOOmg/ml8.0mg/ml4.0mg/ml8000ug/ml15ug/mllOOug/ml濃度范圍在濃度范圍2-100ng/ul在時(shí)，SD為士0.05-102ng/ulCV：±2%（在可偵測(cè)的濃度mg/ml范圍內(nèi)皆時(shí),SD為然）±0.10mg/mlCV：±2%濃度范圍（在可偵測(cè)在的濃度范圍100-500內(nèi)皆然）ug/ml時(shí)，SD為±25ug/ml濃度范圍在15-50ug/ml時(shí),SD為±4ug/ml濃度大于50ug/ml時(shí),CV為±5%濃度范圍大于100ng/ul時(shí)，CV為士2%濃度大于10mg/ml時(shí)，CV為±2%濃度大于500ug/ml時(shí),CV為±5%三、技術(shù)參數(shù)：1、 波長(zhǎng)范圍：190-840nm；2、 波長(zhǎng)精度:lnm；3、 分辨率：<1.8nm(FWHMatHg253.7nm)；4、 其它：1mm光程長(zhǎng)度(可自動(dòng)調(diào)整到0.05mm)；5、 檢測(cè)下限：2ng/pl(dsDNA)；6、 檢測(cè)上限：15000ng/〃(dsDNA)；7、 吸光率精確度：0.002absorbance(1mm光程);8、 吸光率準(zhǔn)確性：2%(at0.76at257nm)；9、 吸光率范圍：0.02-300(相當(dāng)于10mm光程)；10、核酸檢測(cè)周期：<5s；體積：14cmx20cmo四、 使用方法舉例：dsDNA：在主畫(huà)面點(diǎn)選NucleicAcid,計(jì)算機(jī)與儀器自動(dòng)完成聯(lián)機(jī)。依照DNA所溶于之液體準(zhǔn)備該溶液（務(wù)必確認(rèn)DNA溶于二次水、TEbuffer或哪一組kit的elutionbuffer）取出1.5ul點(diǎn)在偵測(cè)臺(tái)上，放下上臂后再按Blanko在右上方拉選SampleType選DNA-50,在SampleID位置輸入樣品名稱，將樣品混勻,取出1.5ul點(diǎn)在偵測(cè)臺(tái)上，放下上臂后再按Measureo五、 結(jié)果整理：NanoDrop2000軟件在偵測(cè)一開(kāi)始會(huì)詢問(wèn)檔案欲存至何處，若未指定，則檔案會(huì)存在上一個(gè)使用者的檔案內(nèi)。六、 注意事項(xiàng)：1.偵測(cè)后立即使用拭鏡紙（Kimwipe類(lèi)）擦拭臺(tái)面。先取一張將上下臺(tái)面的液體吸走，再將此laboratorywipe吸過(guò)樣品的面反折到內(nèi)部，折迭四次后以單方向多次擦拭臺(tái)面（DNA擦5次，Protein擦20次）。2.同一滴液體只能做一次偵測(cè)，欲重復(fù)定量同一樣品，請(qǐng)擦掉前一滴，重新取出一滴進(jìn)行偵測(cè)?；旧虾怂針悠房墒褂胠-2ul做測(cè)量，隨各液體體積特性之不同會(huì)有不同體積需求，原則上不超過(guò)2ul。并請(qǐng)使用2ulpipette避免體積不足導(dǎo)致液柱無(wú)法完整形成。唯蛋白質(zhì)樣品因呈色劑與蛋白質(zhì)本身特性，務(wù)必使用2ul進(jìn)行偵測(cè)。當(dāng)軟件跳出錯(cuò)誤訊息時(shí)，請(qǐng)?jiān)敿?xì)閱讀并依指示進(jìn)行障礙排除。最常發(fā)生的情形是在偵測(cè)過(guò)程液柱并未正確形成，軟件會(huì)出現(xiàn)以下訊息。可先用肉眼觀察液柱是否未完整連接上下臺(tái)面，或樣品內(nèi)有泡泡，將上臂拉起后，擦掉該滴樣品，再重新進(jìn)行偵測(cè)，必要時(shí)可將樣品體積加大至2ul。不可使用含有HydrofluoricAcid(HF)之腐蝕樣品，其它無(wú)腐蝕性之液體皆可使用。品牌：NanoDrop2000c同一儀器整合了NanoDrop2000的所有特性以及比色皿功能高級(jí)微底座座技術(shù)雙模式一一選擇比色皿或基座更寬的濃度范圍，可以測(cè)量很低或很高的濃度比色皿功能可以進(jìn)行動(dòng)力學(xué)(時(shí)間或時(shí)間/溫度研究