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文檔簡介

口腔生物學實驗

基礎醫(yī)學院·病原生物學教研室

何永林

2014.11ELISA法定量檢測抗原分子[實驗目的]

1.熟悉ELISA法；2.

掌握ELISA定量檢測抗原的操作方法和步驟；3.熟悉標準曲線制作和定量；【實驗內容】ELISA法定量檢測血清HBsAg；觀察耐氧試驗[實驗材料]

酶標記抗體：辣根過氧化物酶標記的抗-HBs(HRP-抗HBs-IgG)?？贵w：抗HBs-IgG、待測血清原液（1.5mlEP管中約1ml）。緩種液：包被液、稀釋液、洗滌液。底物液：含有鄰苯二胺底物的溶液(鄰苯二胺、或二胺基聯(lián)苯胺都是HRP的作用底物)。終止液：2mol/LH2SO4。酶標板、溫箱、酶標分光光度計。[實驗方法]

包被孔6個（標記空白；陰性；陽性；原液；1:2；1:4）1.加待檢血清(洗滌液空白；陰性；陽性；原液；1:2；1:4稀釋各0.1ml)2.加酶標抗體(0.05ml

，空白孔不加

)

37°C20min。

3.洗板3-5次后；加底物A、B液各0:05ml

37°C20min4.每孔終止液0.05ml

5.酶標儀檢測OD值）

37°C40min

[注意事項]3.板洗要干凈：每次注滿靜置5-10秒，孔間不交叉；每次倒完后在吸水紙扣干。4.終止液時不要沾到手上或皮膚上2.在孔中稀釋時不要接觸杯壁，不要有氣泡。1.待測血清稀釋示意圖1ml待測血清原液1:11:21:40.3ml稀釋液0.3ml稀釋液300ul300ul5.每班做1條標準曲線（濃度梯度遞減和空白）酶標儀使用說明：開電源——按1設定波長——輸入待測波長450nm（如更換波長，需用專用的更換啟子把濾光片旋下更換）——把空白孔放在濾光片上調零——按復位鍵——按“調零”（檢測光重啟測量OD值，如大于3示儀器良好）——按0，把此時的OD作為0——

按“換屏”——按1選擇統(tǒng)計，開始走紙——將待測孔放入，按孔上方的測量——換孔，再按測量，…,——測量完畢，按回車打印結果（顯示不全按走紙

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