食源性致病菌檢驗技術

及質量控制

內容1.創(chuàng)傷弧菌檢驗2.大腸菌群檢驗3.沙門氏菌檢驗4.大腸埃希氏菌O157:H7/NM檢驗5.副溶血弧菌檢驗6.空腸彎曲菌檢驗7.金黃色葡萄球菌檢驗8.單核細胞增生李斯特菌檢驗9.阪崎腸桿菌檢驗10.質量控制創(chuàng)傷弧菌檢驗沒有國標食物中毒診斷國外相關標準美國FDABAM網絡版第9章弧菌2004NMKL食品中致病性弧菌的檢驗1997加拿大魚和海產品創(chuàng)傷弧菌的分離計數(shù)MFLP-731995日本食品衛(wèi)生檢查指征2004選擇性增菌液堿性蛋白胨水選擇性分離培養(yǎng)基

硫代硫酸鹽－檸檬酸鹽－膽鹽－蔗糖（TCBS）瓊脂改良纖維二糖-多粘菌素B-多粘菌素E（mCPC）瓊脂和纖維二糖-多粘菌素E（CC）瓊脂平板

―探針克隆雜交顯示，兩種平板上均有95％以上的可疑菌落為創(chuàng)傷弧菌引起胃腸炎、傷口感染和原發(fā)性敗血癥人類感染是因為食用生或半生的受污染海產品,或是因為傷口接觸了帶菌的海水或海洋動物罹患肝病、血色病的個體易感者及免疫功能低下者,一旦感染創(chuàng)傷弧菌,更容易發(fā)生致命的傷口感染和原發(fā)性敗血癥,后者的病死率超過50％創(chuàng)傷弧菌是美國海產品消費引起死亡的首要原因,美國州際貝類衛(wèi)生委員會規(guī)定,收獲后經處理的牡蠣中創(chuàng)傷弧菌限量不超過30CFU/g。估計日本每年創(chuàng)傷弧菌敗血癥病例數(shù)約為425例。大陸沿海地區(qū)也時有創(chuàng)傷弧菌散發(fā)感染的報告創(chuàng)傷弧菌（Vibriovulnificus）1976年首次發(fā)現(xiàn)引起傷口感染致死性的原發(fā)性敗血癥胃腸道感染曾稱為乳糖陽性弧菌革蘭氏陰性嗜鹽菌兼性厭氧3個生物型36℃±1℃，18h～24h39℃～40℃或36℃±1℃，18h～24h36℃±1℃，12h～16h樣品25g（mL）+225mL3％氯化鈉堿性蛋白胨水3％氯化鈉堿性蛋白胨水3管×3個合適的稀釋度如果進行定性檢測，則不需要進行此步驟挑取可疑菌落，接種于3％氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂生化試驗或選用API20E生化鑒定試劑盒結果報告改良纖維二糖-多粘菌素B-多粘菌素E瓊脂或纖維二糖-多粘菌素E瓊脂劃線分離篩選試驗氧化酶試驗，革蘭氏染色，3％氯化鈉三糖鐵瓊脂，嗜鹽性試驗樣品制備非冷凍樣品采集后應立即置7℃～10℃冰箱保存，盡可能及早檢驗；冷凍樣品應在45℃以下不超過15min或在2℃～5℃不超過18h解凍；如果樣品需要冷凍貯存，應在樣品中加等量緩沖甘油-氯化鈉溶液（液體樣品應加雙料），推薦貯存溫度為-70℃以下。魚類和頭足類動物取表面組織、腸或鰓。貝類取全部內容物，包括貝肉和體液；甲殼類取整個動物，或者動物的中心部分，包括腸和鰓。如為帶殼貝類或甲殼類，則應先在自來水中洗刷外殼并甩干表面水分，然后以無菌操作打開外殼，按上述要求取相應部分。以無菌操作取檢樣25g（mL），加入3％氯化鈉堿性蛋白胨水225mL，用旋轉刀片式均質器以8000r/min均質1min，或拍擊式均質器拍擊2min，制備成1:10的均勻稀釋液。如無均質器，則將樣品放入無菌乳缽中磨碎，然后放在500mL的滅菌容器內，加225mL3％氯化鈉堿性蛋白胨水，并充分振蕩。增菌定性檢檢測將上述述1:10稀釋釋液于于36℃℃±1℃℃培養(yǎng)養(yǎng)12h～16h。。定量檢檢測用滅菌菌吸管管吸取取1:10稀釋釋液1mL，，注入入含有有9mL3％氯氯化鈉鈉堿性性蛋白白胨水水的試試管內內，充充分混混勻，，制備備1:100的的稀釋釋液。。另取1mL滅滅菌吸吸管，，按上上條操操作依依次制制備10倍倍遞增增稀釋釋液，，每遞遞增稀稀釋一一次，，換用用1支支1mL滅菌菌吸管管。根據對對檢樣樣污染染情況況的估估計，，選擇擇三個個連續(xù)續(xù)的適適宜稀稀釋度度，每每個稀稀釋度度接種種三支支含有有9mL3％氯氯化鈉鈉堿性性蛋白白胨水水的試試管，，每管管接種種1mL。置置36℃℃±1℃℃恒溫溫箱內內，培培養(yǎng)12h～～16h。分離對所有有顯示示生長長的增增菌液液，用用接種種環(huán)在在距離離液面面以下下1cm內內沾取取一環(huán)環(huán)，于mCPC或或CC平板板上劃劃線分分離。。一支試試管劃劃線一一塊平平板。于39℃℃～～40℃℃或36℃℃±±1℃℃培培養(yǎng)18h～～24h。分離平平板——mCPC和和CC典型的的創(chuàng)傷傷弧菌菌在mCPC和和CC平板板上呈呈現(xiàn)為為圓的的、扁扁平的的、中中心不不透明明邊緣緣透明明的黃黃色菌菌落，，直徑徑1mm～2mm。。純培養(yǎng)挑取三個個或以上上的可疑疑菌落，，劃線3％氯化化鈉胰蛋蛋白胨大大豆瓊脂脂平板，，36℃℃±1℃培培養(yǎng)18h～～24h。初步鑒定定氧化酶試試驗：挑挑選純培培養(yǎng)的單單個菌落落進行氧氧化酶試試驗，創(chuàng)創(chuàng)傷弧菌菌為氧化化酶陽性性。涂片鏡檢檢：將可可疑菌落落涂片，，進行革革蘭氏染染色，鏡鏡檢觀察察形態(tài)。。創(chuàng)傷弧弧菌為革革蘭氏陰陰性，呈呈棒狀或或弧狀。。挑取純培培養(yǎng)的單單個可疑疑菌落，，轉種3％氯化化鈉三糖糖鐵瓊脂脂斜面并并穿刺底底層，36℃℃±1℃℃培養(yǎng)養(yǎng)24h觀察察結果。。創(chuàng)傷弧弧菌在3％氯化化鈉三糖糖鐵瓊脂脂中的反反應為底底層變黃黃不變黑黑，無氣氣泡，斜斜面顏色色不變或或紅色加加深，偶偶爾斜面面變黃。。V-P試試驗：以以接種針針由3％％氯化鈉鈉三糖鐵鐵瓊脂斜斜面挑取取少許培培養(yǎng)物穿穿刺3％％氯化鈉鈉MR-VP培培養(yǎng)基，，36℃℃±1℃培培養(yǎng)24h，，在加V-P試試劑前應應先觀察察動力。。沿穿刺刺線周圍圍呈擴散散性生長長為動力力陽性。。嗜鹽性試試驗：挑挑取純培培養(yǎng)的單單個可疑疑菌落，，分別接接種于不不同氯化化鈉濃度度的胰胨胨水，36℃℃±1℃℃培養(yǎng)養(yǎng)24h，觀觀察液體體混濁情情況。創(chuàng)創(chuàng)傷弧菌菌在無氯氯化鈉、、8％氯氯化鈉和和10％％氯化鈉鈉的胰胨胨水中不不生長，，在6％％氯化鈉鈉的胰胨胨水中生生長旺盛盛。確定鑒定定生化試驗驗：取純純培養(yǎng)物物分別接接種含3％氯化化鈉的賴賴氨酸培培養(yǎng)基，，36℃℃±1℃培培養(yǎng)24h～～48h后觀觀察結果果。隔夜夜培養(yǎng)物物進行ONPG試驗。。API20E生化鑒鑒定試劑劑盒：刮刮取3％％氯化鈉鈉胰蛋白白胨大豆豆瓊脂平平板上的的單個菌菌落，用用3％氯氯化鈉溶溶液制備備成濁度度適當?shù)牡募毦鷳覒腋∫?，，使用API20E生化鑒鑒定試劑劑盒鑒定定。創(chuàng)傷弧菌菌的生化化性狀試驗項目結果革蘭氏染色鏡檢陰性，棒狀或弧狀氧化酶＋動力＋D-纖維二糖＋蔗糖－葡萄糖＋分解葡萄糖產氣－乳糖＋，或遲緩＋硫化氫－賴氨酸脫羧酶＋V-P－ONPG＋注：＋陽性；－陰性。報告當檢出的的可疑菌菌落生化化性狀符符合表1要求時時，報告告25g（mL）樣樣品中檢檢出創(chuàng)傷傷弧菌。。如果進進行定量量檢測，，根據證證實為創(chuàng)創(chuàng)傷弧菌菌陽性的的試管管管數(shù)，查查最可能能數(shù)（MPN））檢索表表，報告告每g（（mL））創(chuàng)傷弧弧菌的MPN值值。大腸菌群檢檢驗大腸菌群定義：一群在36℃條件下下培養(yǎng)24~48小小時能發(fā)酵酵乳糖、產產酸產氣的的需氧和兼兼性厭氧革革蘭氏陰性性無芽胞桿桿菌。衛(wèi)生學概念念，包括埃埃希氏菌屬屬，克雷伯伯氏菌屬、、腸桿菌屬屬和檸檬酸酸桿菌屬等等的細菌檢驗比較簡簡單，所以以被廣泛用用做水源的的衛(wèi)生指標標和食品加加工衛(wèi)生狀狀況的通用用指標大腸菌群計計數(shù)第一法MPN法法第二法平平板計數(shù)法法第三法Petrifilm測試片法第一法MPN法法與原原4789.3的的不不同同操作作步步驟驟不不同同原方方法法：：初初發(fā)發(fā)酵酵→EMB分分離離培培養(yǎng)養(yǎng)→→染染色色，，復復發(fā)發(fā)酵酵→→報報告告現(xiàn)方方法法：：LST初初發(fā)發(fā)酵酵→→BGLB驗驗證證→→報報告告初發(fā)發(fā)酵酵培培養(yǎng)養(yǎng)基基不不同同原方方法法：：乳糖糖膽膽鹽鹽肉肉湯湯現(xiàn)方方法法：：月桂桂基基硫硫酸酸鹽鹽胰胰蛋蛋白白胨胨（（LST））肉肉湯湯LST肉肉湯湯是是國國際際上上通通用用的的培培養(yǎng)養(yǎng)基基。。與與乳乳糖糖膽膽鹽鹽肉肉湯湯的的作作用用和和意意義義相相同同，，但但具具有有更更多多的的優(yōu)優(yōu)越越性性，，LST中中的的選選擇擇性性抑抑菌菌劑劑是是月月桂桂基基硫硫酸酸鹽鹽，，相相對對于于膽膽鹽鹽穩(wěn)穩(wěn)定定性性更更好好些些。。還還有有就就是是LST更更容容易易觀觀察察。。結果果報報告告單單位位不不同同原方方法法：：MPN/100g(mL)現(xiàn)方法：MPN/g(mL)大腸菌群PetrifilmTM測試片法PetrifilmTM大腸菌群測試試片是一種預先制制備好的培養(yǎng)養(yǎng)基系統(tǒng)，含含有VRB培培養(yǎng)基，冷冷水可溶性凝凝膠和TTC指示劑，可可增強菌落計計數(shù)效果。表表面覆蓋的膠膠膜，可截留留發(fā)酵乳糖的的大腸菌群產產生的氣體。。培養(yǎng)結束后后計數(shù)紅點周周圍有氣泡的的菌落為大腸腸菌群數(shù)。檢樣25g(ml)樣品＋225ml稀稀釋液,均質質↓稀釋↓接種PetrifilmTM大腸菌菌群測試片↓培養(yǎng)↓361C24h2h計數(shù)紅色帶氣氣泡的菌落↓計算菌落總數(shù)數(shù)↓報告樣品制備按大腸菌群MPN法的樣樣品制備方法法進行。樣品pH的的調節(jié)節(jié)同大大腸菌菌群MPN法中中樣品品pH的調調節(jié)。。即樣樣品勻勻液的的pH值應應在6.5～7.5之間，，pH值過過低或或過高高時分分別用用1MNaOH或或1MHCl予以以調節(jié)節(jié)。樣品的的接種種與培培養(yǎng)將待檢檢樣品品選取取適宜宜的2~3個連連續(xù)稀稀釋度度,每每個個稀釋釋度接接種2張測試片片。將將PetrifilmTM大大腸菌菌群測測試片片置于于平坦坦實驗驗臺面面，揭揭開上上層膜膜，用用吸管管吸取取1mL樣樣液垂垂直滴滴加在在測試試片的的中央央，將上層層膜緩緩慢蓋蓋下，，避免免氣泡泡產生生和上上層膜膜直接接落下下，把壓壓板（（平面面底朝朝下））放置置在上上層膜膜中央央，輕輕輕地地壓下下，使使樣液液均勻勻覆蓋蓋于圓圓形的的培養(yǎng)養(yǎng)面積積上，，切勿勿扭轉轉壓板板。拿拿起壓壓板，，靜置至至少1分鐘鐘以使使培養(yǎng)養(yǎng)基凝凝固。。將測試試片的的透明明面朝朝上置置于培培養(yǎng)箱箱內，，堆疊疊片數(shù)數(shù)不超過過20片，36C±±1C培養(yǎng)養(yǎng)24h2h。判讀培養(yǎng)24h2h后后應立立即計計數(shù)，，可目目測、、用標標準菌菌落計計數(shù)器器、顯顯微鏡鏡、或或PetrifilmTM自動動判讀讀儀來來計數(shù)數(shù)。紅色有有氣泡泡的菌菌落確認為為大腸腸菌群群數(shù)。。培養(yǎng)養(yǎng)圓形面面積邊邊緣上上及邊邊緣以以外的的菌落落不作作計數(shù)數(shù)。當培培養(yǎng)區(qū)區(qū)域出出現(xiàn)大大量氣氣泡，，大量量不明明顯小小菌落落或培培養(yǎng)區(qū)區(qū)呈暗暗紅色色三種種情況況，表表明大大腸菌菌群的的濃度度較高高，需需要進進一步步稀釋釋樣品品來獲獲得準準確的的讀數(shù)數(shù)。結果報報告1)選選取取菌落落數(shù)在在15~150之間間的測測試片片作為為計數(shù)數(shù)標準準;2)選擇擇菌落數(shù)在在15~150之間間的稀釋度度，平均菌菌落數(shù)乘以以稀釋倍數(shù)數(shù)報告之；；3)如果果所有稀釋釋度測試片片上的菌落落數(shù)都小于于15,則則計數(shù)稀稀釋度最低低的測試片片上的平均均菌落數(shù)乘乘以稀釋倍倍數(shù)報告之之；4)如果果所有稀釋釋度的測試試片上均無無菌落生長長，則以(<)1乘乘以最低稀稀釋倍數(shù)報報告之；5)如如果最高高稀釋度度的菌落落數(shù)大于于150個時，，計數(shù)最最高稀釋釋度的測測試片上上的平均均菌落數(shù)數(shù)乘以稀稀釋倍數(shù)數(shù)報告之之；6)計計數(shù)菌落落數(shù)大于于150個的測測試片時時，可計計數(shù)一個個或兩個個具有代代表性的的方格內內的菌落落數(shù)，換換算成單單個方格格內的菌菌落數(shù)后后乘以20即為為測試片片上估算算的菌落落數(shù)(圓形生生長面積積為20cm2)。。7)最最終菌落落濃度的的單位以以“cfu/g(mL)””表示。。沙門氏菌檢驗驗沙門氏菌腸道道傳染病人類沙門氏菌菌病分為兩大大類:1、傷寒與副傷傷寒:在世世界范圍內內顯著下降降,我國仍有散在在發(fā)生,時時有局部部暴發(fā)流行行.2、沙門氏菌急急性胃腸炎炎:在世界,在我國呈呈上升趨勢,通過動物物廣泛分布布,家禽和和豬是主要的儲存存宿主,在在食品和許許多動物制制品中發(fā)現(xiàn),是是傳播的主主要原因.沙門氏菌食食物中毒引起食物中中毒最常見見的沙門氏氏菌：鼠傷傷寒沙門氏氏菌、腸炎炎沙門氏菌菌、豬霍亂亂沙門氏菌菌易引起沙門門氏菌中毒毒的食品：：肉、蛋、、乳類食品品中毒原因：：1、食用病病畜禽的肉肉制品食品品2、病畜禽禽、帶菌人人和動物使使食品受污污染3、用不潔潔凈水外理理食品沙門氏菌檢檢驗流程前增菌：用用無選擇性性的培養(yǎng)基基使處于瀕瀕死狀態(tài)的的細菌恢復復活力;BPW選擇性增菌菌：使沙門門氏菌優(yōu)勢勢繁殖，其其它細菌受受到抑制;SC+TTB選擇擇性性平平板板分分離離培培養(yǎng)養(yǎng)：：BS+XLD/HE/顯顯色色培培基基生化化試試驗驗：：鑒鑒定定分分離離出出來來的的細細菌菌是是否否符符合合沙沙門門氏氏菌菌的的生生化化譜譜，，可可采采用用API20E等等成成套套生生化化試試劑劑血清學鑒鑒定：特特異性診診斷血清清鑒定到到種。沙門氏菌菌的分類類學地位位歸于腸桿桿菌科沙沙門氏菌菌屬下設6個個亞屬：：I、II、IV、V、VI及III（原原亞利桑桑那菌屬屬）常見的種種：雞沙沙門氏菌菌、鼠傷傷寒沙門門氏菌、、傷寒沙沙門氏菌菌形態(tài)與染染色：革革蘭氏染染色陰性性，無莢莢膜，無無芽胞，，多數(shù)有有鞭毛，，有動力力，短小小桿菌。。培養(yǎng)特性性：需氧氧或兼性性厭氧，，最適溫溫度37℃，，7.2-7.4營養(yǎng)要求求：不高高，普通通培養(yǎng)基基生長良良好。沙門氏菌菌檢驗方方法的步步驟沙門氏菌菌檢驗方方法的步步驟是：：增菌培養(yǎng)養(yǎng)接種鑒別別培養(yǎng)基基，分離離菌落生化試驗驗，鑒定定到屬和和種；也也可以用用噬菌體體試驗鑒鑒定到屬屬血清學分分型增菌培養(yǎng)養(yǎng)首先是增增菌培養(yǎng)養(yǎng)基的靈靈敏度。。關于食品品中是否否帶有沙沙門氏菌菌，各個個國家的的標準基基本上是是一樣的的，即：：25克克無。過去的理理解是25克食食品中不不能檢出出沙門氏氏菌，但但是沒有有提出要要測定增增菌液的的靈敏度度。自從PCR試驗驗技術推推廣應用用以后，，認為此此項技術術能夠在在·含有有5~10個細細菌的標標本內獲獲得陽性性結果。。才使我我們理解解到25克無是是應該在在25克克食品中中不能帶帶有1個個沙門氏氏菌。增菌培養(yǎng)養(yǎng)國際上常常用的沙沙門氏菌菌增菌培培養(yǎng)基有有3種，，即：(1)亞亞硒酸鹽鹽增菌液液或亞硒硒酸鹽胱胱氨酸增增菌液，，(2)四硫磺磺酸鹽增增菌液或或四硫磺磺酸鹽孔孔雀綠增增菌液，，(3)氯化鎂鎂孔雀綠綠增菌液液?，F(xiàn)行的國國家標準準采用了了(1)亞硒酸酸鹽胱氨氨酸增菌菌液，和和(2)四硫磺磺酸鹽孔孔雀綠增增菌液。。沙門氏氏菌屬屬和有有關細細菌的的鑒別別1沙門氏氏菌是是賴氨氨酸陽陽性、、氰化化鉀和和pH7.2尿尿素酶酶陰性性的；；而弗弗勞地地氏檸檸檬酸酸桿菌菌群則則是賴賴氨酸酸陰性性、氰氰化鉀鉀和pH7.2尿素素酶陽陽性的的。不過，，甲型型副傷傷寒血血清型型是賴賴氨酸酸陰性性的，，沙門門氏菌菌IV和V是氰氰化鉀鉀陽性性的。。在弗弗勞地地氏檸檸檬酸酸桿菌菌群里里，氰氰化鉀鉀和尿尿素酶酶也不不是100%陽陽性，，而且且也偶偶爾出出現(xiàn)賴賴氨酸酸陽性性的菌菌株。。沙門氏氏菌屬屬和有有關細細菌的的鑒別別2不過，沙門氏氏菌和大腸埃埃希氏菌的鑒鑒別有一點例例外，因為在在沙門氏菌屬屬內有硫化氫氫陰性的菌株株，偶爾也有有靛基質陽性性的菌株；在在大腸埃希氏氏菌種內，也也有少數(shù)靛基基質陰性的菌菌株，偶爾也也有硫化氫陽陽性的菌株。。生化鑒別試驗驗根據以上所述述，可將以上上五項生化試試驗編制成一一份腸桿菌科科常見屬、種種生化試驗簡簡化診斷表。。主要用于沙沙門氏菌的鑒鑒定，根據情情況再補充幾幾項試驗，可可以準確地鑒鑒定腸桿菌科科中最常見的的12個屬。。腸桿菌科常見見細菌簡化診診斷表序號硫化化氫靛基基質賴氨氨酸氰化化鉀尿素素酶判判定定結結果果(pH7.2)A1+-+--沙門氏菌屬A2++--+沙門氏菌屬，，緩慢愛德華華氏菌A3+-++97-94弗氏檸檬酸菌菌群，奇異變變形菌A4++++-普普通變形菌B1----+/-大腸腸埃希氏菌，，沙門氏菌屬屬，志賀氏菌屬B2-+--+/-大腸腸埃希氏菌，，志賀氏菌屬屬B3--+/-+-/+克雷伯氏菌族族(注)B4-++/-+-普普羅菲登斯菌菌屬，摩根氏氏菌屬注：包括克雷雷伯氏菌屬、、腸桿菌屬、、哈夫尼亞菌菌屬、沙雷氏氏菌屬，另做做補充試驗鑒鑒定。附表使用說明明A1尿素氰氰化鉀賴賴氨酸判判斷結結果---甲甲副副-++沙沙門氏菌ⅣⅣ和Ⅴ+-+沙沙門氏氏菌個別變體體A2甘甘露醇山山梨醇判判斷結果果++沙沙門氏菌靛靛+--緩緩慢愛德華氏氏菌B1ONPG-沙沙門氏菌屬ONPG+大大腸腸埃希氏菌屬屬腸桿菌科細菌菌生化特性近一百年以來來，有許多學學者，為積累累腸桿菌科細細菌的生化特特性資料，付付出了辛勤的的勞動。特別別是美國學者者法默（Farmer,III）于1986年提出出了包括腸桿桿菌科細菌近近100個種種的47項生生化特性?！丁恫苁舷到y(tǒng)統(tǒng)細菌學手冊冊第二版》于于2005年年出版，法默默應邀作為該該書中《腸桿桿菌科》的作作者。微生物分析儀儀微生物分析儀儀是細菌分類類鑒定的工具具。該儀器對對細菌作出的的分類鑒定應應該是按照權權威的細菌生生化特性表作作出的。按理理，商家應當當向雇主提供供《細菌鑒定定編碼表》，，該表的內容容應當與細菌菌的生化特性性表一致。使使用者應該對對該表進行審審查，認為編編碼表的數(shù)據據可信。不過，由于生生產工藝和試試驗條件的限限制，有幾項項重要的生化化試驗項目未未能列入微生生物分析儀中中。其中對腸腸桿菌科細菌菌鑒定重要的的試驗有：氰氰化鉀、pH7.2尿素素酶和靛基質質試驗。補充充生生化化試試驗驗試驗驗者者對對于于所所獲獲得得的的生生化化試試驗驗結結果果有有懷懷疑疑時時，，可可用用手手工工方方法法進進行行補補充充試試驗驗，，直直至至認認為為試試驗驗結結果果可可信信為為止止。。血清清學學分分型型沙門門氏氏菌菌具具有有O抗抗原原、、K抗抗原原和和H抗抗原原。。沙沙門門氏氏菌菌的的血血清清學學分分型型就就是是按按照照這這些些抗抗原原的的成成分分進進行行分分型型。。一般般先先按按照照O抗抗原原分分群群，，然然后后。。再再按按照照H抗抗原原分分型型。。如如果果這這個個血血清清型型具具有有K抗抗原原，，一一般般在在O抗抗原原分分群群以以后后再再檢檢查查。。血清清學學分分型型的的注注意意事事項項標準準菌菌株株和和實實驗驗室室保保存存的的菌菌株株做做血血清清型型鑒鑒定定的的時時候候，，往往往往比比較較順順利利，，新新分分離離的的菌菌株株做做血血清清分分型型往往往往不不順順利利。。一是是因因為為因因子子血血清清的的效效價價不不高高，，難難以以覆覆蓋蓋所所試試驗驗的的菌菌株株。。應應當當不不要要用用灼灼熱熱的的接接種種環(huán)環(huán)去去挑挑取取血血清清。。二是因因為菌菌株的的抗原原性發(fā)發(fā)育不不良，，特別別是H抗原原?？煽梢越咏臃N在在半固固體瓊瓊脂上上，促促使H抗抗原的的發(fā)育育。沙門氏氏菌抗抗原的的研究究已有有近一一百年年的歷歷史，，實驗驗者應應當熟熟悉抗抗原的的相關關理論論。驗證菌菌株鑒鑒定的的結果果沙門氏氏菌的的鑒定定結果果應當當具有有完整整的血血清學學分型型結果果。如如果只只鑒定定到O群，沒有有得出抗原原的分型結結果，往往往不是沙門門氏菌。只H有在屬屬和種的鑒鑒定結果是是完全可靠靠的情況下下，才能做做出沙門氏氏菌未定型型的鑒定結結論。大腸埃希氏氏菌O157:H7/NM檢檢驗一、常常規(guī)方法檢樣↓25g(mL)+改改良EC肉肉湯(mEC+n））225ml快速篩選陰陰性性36±1℃℃18～24h陽性報報告告CT-SMAC平板和和改良CHROMagarO157顯色色瓊脂平平板36±1℃↓↓18～24h挑取可疑疑菌落5～10個,氧化酶陰陰性,革革蘭氏陰陰性桿菌菌接種TSI↓MUG-LST36±1℃18～～24h陽性陰陰性性↓↓↓非O157菌血血清學試試驗↓生化試驗驗↓報告操作步驟驟1增菌菌以無菌操操作取檢檢樣25g(mL)加加入到含含有225mLmEC+n肉湯的的均質袋袋中，在在拍擊式式均質器器上連續(xù)續(xù)均質1～2min。于36±1℃培養(yǎng)養(yǎng)18～～24h。同時時做陽性性及陰性性對照。。2.分分離取增菌后后或篩選選試驗陽陽性的mEC+n肉湯湯，分別別劃線或或適當稀稀釋后取取0.1mL涂涂布接種種于CT-SMAC平平板和改改良CHROMagarO157顯色瓊瓊脂平板板上，于于36±±1℃培培養(yǎng)18～24h，觀觀察菌落落。必要要時將混混合菌落落分純。。在CT-SMAC平平板上，，發(fā)酵山梨梨醇的菌菌落為紅紅色；典型菌落落為不發(fā)發(fā)酵山梨梨醇的圓圓形、光光滑、較較小的無無色菌落落，中心心呈現(xiàn)較較暗的灰灰褐色，，用接種針針挑起時時無拉絲絲現(xiàn)象。在改良良CHROMagarO157顯顯色瓊脂脂平板上上為圓形形、較小小的菌落落，中心心呈淡紫紫色-紫紫紅色，，邊緣無無色或淺淺灰色。。增菌后的肉湯湯在取樣前，，應輕微搖晃晃混勻。劃線時應多次次往返，保證證分離效果。。涂布時應適當當稀釋。注意區(qū)分典型型菌落，必要要時分純。大大部分非O157E.coli發(fā)酵山梨醇，，仍有6%不不發(fā)酵山梨醇醇，它們與摩摩根氏菌和哈哈夫尼亞菌一一樣在TC-SMAC上上表現(xiàn)為與O157相同同的菌落特征征。3.初步生生化試驗在CT-SMAC和改良良CHROMagarO157顯顯色瓊脂平板板上挑取5～～10個典型型或可疑菌落落，分別接種種TSI瓊脂脂，同時接種種MUG-LST肉湯，，于36±1℃培養(yǎng)18～24h。。必要時進行氧氧化酶試驗和和革蘭氏染色色。在TSI瓊脂脂中，典型菌菌株為斜面與與底層均呈陽陽性反應呈黃黃色，產氣或或不產氣，不不產生H2S。置LST-MUG肉肉湯管于長波波紫外燈下觀觀察，陽性對對照應無熒光光產生，陰性性對照應有熒熒光；對分解解乳糖且無熒熒光的菌株，，在營養(yǎng)瓊脂脂平板上分純純，于36±±1℃培養(yǎng)18～24h，并進行下下列鑒定。4.鑒定4.1血清清學試驗在營養(yǎng)瓊脂平平板上挑取分分純的菌落，，用O157:H7標準準血清或O157乳膠凝凝集試劑作玻玻片凝集試驗驗。血清凝集集試驗應做生生理鹽水對照照。對于H7因子血清不不凝集者，應應穿刺接種半半固體瓊脂管管，檢查動力力，經連續(xù)傳傳代3次，動動力試驗陰性性，H7因子子血清凝集陰陰性者，確定定為無動力株株。CCP:先先做O157血血清凝凝集，，后做做H7因子子凝集集，注注意自自凝菌菌，用用生理理鹽水水做對對照。。4.2生生化試試驗用API20E或VITEK-GNI+或或其它它腸桿桿菌科科生化化鑒定定試劑劑盒，，按照照生產產商提提供的的使用用說明明進行行。進行生生化試試驗時時應是是用新新鮮培培養(yǎng)物物（24h）。。菌液的的稀釋釋應注注意無無菌操操作，，濁度度應達達到使使用說說明的的要求求。二、免免疫磁磁珠捕捕獲法法操作步步驟1.增增菌菌：同同常規(guī)規(guī)法。。2.磁磁珠珠分離離：2.1將將Eppendorff管按按樣品品和質質控菌菌株進進行編編號，，每個個樣品品使用用1只只Eppendorff管，，然后后插入入到磁磁板架架上。。在漩漩渦混混合器器上輕輕輕振振蕩E.coliO157免免疫磁磁珠溶溶液后后，用用開蓋蓋器打打開每每個Eppendorff管管的蓋蓋子，，每管管加入入20μLE.coliO157免免疫磁磁珠懸懸液。。磁珠在在加入入前在在混旋旋器上上短暫暫混勻勻，不不可劇劇烈震震蕩，，避免免產生生泡沫沫。2.2取取mEC+n肉湯湯增菌菌培養(yǎng)養(yǎng)物1mL，加加入到到Eppendorff管中中，蓋蓋上蓋蓋子，，然后后輕微微振蕩蕩10s。。每個個樣品品更換換1只只加樣樣吸頭頭，質質控菌菌株必必須與與樣品品分開開進行行，避避免交交叉污污染取樣樣前前混混勻勻，，避避開開脂脂肪肪層層與與雜雜質質，，必必要要時時使使用用濾濾網網。。加加樣樣后后立立即即混混勻勻。。對對照照同同時時做做。。2.3結結合合：：在在18～～30℃℃環(huán)環(huán)境境中中，，將將上上述述Eppendorff管管連連同同磁磁板板架架放放在在適適合合的的裝裝置置上上轉轉動動或或用用手手輕輕微微轉轉動動10min，，使使E.coliO157與與免疫疫磁珠珠充分分接觸觸。注意室室內溫溫度，，保保證結結合時時間。。結合時時不要要將磁磁鐵插插入到到磁板板架中中。用手轉轉動時時應輕輕輕顛顛倒Eppendorff管管架，，不可可劇烈烈搖動動。保保證磁磁珠與與O157的結結合。。2.4捕捕獲：：將磁磁板插插入到到磁板板架中中濃縮縮磁珠珠。在在3min內不不斷地地傾斜斜磁板板架，，確保保懸液液中和和蓋子子上的的免疫疫磁珠珠全部部被收收集起起來，，此時時，在在Eppendorff管壁壁中間間明顯顯可見見的圓圓形或或橢圓圓形棕棕色聚聚物。。2.5吸吸取上上清液液：取取1支支滅菌菌的加加長吸吸管，，從免免疫磁磁珠聚聚集物物對側側深入入液面面，輕輕輕吸吸走上上清液液。當當吸到到液面面通過過免疫疫磁珠珠積聚聚物時時，應應放慢慢速度度，以以確保保免疫疫磁珠珠不被被吸走走。如如吸取取的上上清液液內含含有磁磁珠，，則應應將其其放回回到Eppendorff管管中，，并重重復2.4步步驟。。每個個樣品品換用用1支支加長長吸管管。免疫磁磁珠的的滑落落：某某些樣樣品特特別是是那些些富含含脂肪肪的樣樣品，，其磁磁珠積積聚物物易于于滑落落到管管底。。在吸吸取上上清液液時，，很難難做到到不丟丟失磁磁珠，，在這這種情情況下下，可可保留留50～100μL上清清液于于Eppendorff管中中。如如果在在后續(xù)續(xù)的洗洗滌過過程中中也這這樣做做的話話，脂脂肪的的影響響將減減小，，也可可達到到充分分捕獲獲的目目的。。2.6洗滌滌：從從磁板板架上上移走走磁板板，在在每個個Eppendorff中加加入1mLPBS-Tween20洗液液，轉轉動磁磁板架架3次次以上上，洗洗滌免免疫磁磁珠混混合物物。重重復上上述步步驟2.4～2.6。2.7重重復上上述步步驟2.4～～2.5洗滌共共3次次，動動作要要輕柔柔。吸取上上清液液至磁磁珠聚聚集物物處時時，應應放慢慢速度度。上上清液液的吸吸取應應盡量量完全全。使用多塊磁磁珠分離裝裝置時，磁磁鐵與磁鐵鐵應遠離放放置。2.8免免疫磁珠珠懸浮：移移走磁板，，將免疫磁磁珠重新懸懸浮在100μLPBS-Tween20洗液中中。2.9涂布布平板用漩渦混合合器將免疫疫磁珠混勻勻，用加樣樣器各取50μL免免疫磁珠懸懸液分別轉轉移至CT-SMAC平板和和改良CHROMagarO157顯色瓊脂脂平板一側側，然后用用涂布棒將將免疫磁珠珠涂布平板板的一半，，再用接種種環(huán)劃線接接種平板的的另一半。。待瓊脂表表面水分完完全吸收后后，翻轉平平板，于36±1℃℃培養(yǎng)18～24h。注意，，若CT-SMAC平板和改改良CHROMagarO157顯顯色瓊脂平平板表面水水分過多時時，應在37℃下干干燥10～～20min，涂布布時避免將將免疫磁珠珠涂布到平平板的邊緣緣。2.10菌菌落識識別、初步步生化試驗驗、鑒定定同常常規(guī)法。不同培養(yǎng)基基分離效果果CT-SMAC：菌菌落較大，，存在較多多的山梨醇醇發(fā)酵陰性性的細菌菌菌落生長，，干擾O157的檢檢出。CHROMagarO157：較多多的非O157菌落落生長，菌菌落較大，，影響O157菌的的檢出改良CHROMagarO157：：非O157細菌生生長較少且且菌落相對對局限，O157菌菌落特征性性明顯。副溶血弧菌菌檢驗概況副溶血性弧弧菌于1950年從從日本一次暴暴發(fā)性食物物中毒中分離發(fā)現(xiàn)。。該菌存在在于近海的海水、海海底沉積物物和魚類、、貝殼等海產產品中。在在37℃、、pH7.7、含氯化化鈉3～4%的環(huán)境中生長最最好。主要要引起食物中毒，尤尤以日本、、東南亞、、美國及我國國臺北地區(qū)區(qū)多見，也是我國大大陸沿海地地區(qū)食物中毒中最常常見的一種種病原菌。。本菌嗜鹽畏畏酸，在無無鹽培養(yǎng)基基上，不能能生長，3%～6%食鹽水繁繁殖迅速，，每8～9分鐘為1周期，低于0.5%或或高于8%鹽水中停停止生長。。對酸敏感，在在2%醋酸酸中或50%的食醋醋中1分鐘鐘即可死亡。不不耐熱，56℃、5分鐘即可可殺死，90℃、1分鐘滅活活。對低溫溫及高濃度度氯代鈉抵抵抗力甚強。。主要修改將選擇性增增菌液由氯氯化鈉結晶晶紫增菌液液改為3％氯化鈉堿堿性蛋白胨胨水；將選擇性分分離培養(yǎng)基基由氯化鈉鈉蔗糖瓊脂脂和嗜鹽菌選擇性瓊瓊脂改為硫硫代硫酸鹽鹽－檸檬酸酸鹽－膽鹽－蔗糖瓊瓊脂和科瑪瑪嘉弧菌顯顯色培養(yǎng)基基；增加API20E診斷試劑劑條及全自自動細菌生生化鑒定儀VITEK；增加血清學學分型；將動物試驗驗改為神奈奈川試驗；；增加最可能能數(shù)檢索表表。樣品制備冷凍樣品應應在45℃℃以下不不超過15min或在在2℃～～5℃不不超過18h解凍凍，若不能能及及時時檢檢驗驗，，應應放放于于－－15℃℃左左右右保保存存；；非冷冷凍凍而而易易腐腐的的樣樣品品應應盡盡可可能能及及時時檢檢驗驗，，若不不能能及及時時檢檢驗驗，，應應置置2℃℃～～5℃℃冰冰箱箱保保存，，在在24h內內檢檢驗驗。。魚類和頭足類類動物取表面面組織、腸或或鰓。貝類取全部內內容物，包括括貝肉和體液液；甲殼類取整個個動物，或者者動物的中心心部分，包括腸和和鰓。如為帶殼貝類類或甲殼類，，則應先在符符合生活飲用用水衛(wèi)生標準準的流水中洗洗刷外殼并甩甩干表面水分分，然后以無無菌操作打開開外殼，按上上述要求取相相應部分。以無菌操作取取檢樣25g（mL）），加入3％％氯化鈉堿性性蛋白胨水225mL，用旋轉刀刀片式均質器器以8000r/min均質1min，，或拍擊式均均質器拍擊2min，，制備成1:10的均勻勻稀釋液。如如無均質器，，則將樣品放放入無菌乳缽缽中磨碎，然然后放在500mL的的滅菌容器內內，加225mL3％氯化鈉堿堿性蛋白胨水水，并充分振振蕩。增菌定性檢測將上述1:10稀釋液于于36℃±±1℃培養(yǎng)養(yǎng)8h～18h。定量檢測用滅菌吸管吸吸取1:10稀釋液1mL，注入入含有9mL3％氯氯化鈉堿性蛋蛋白胨水的試試管內，振搖搖試管混勻，，制備1:100的稀釋釋液。另取1mL滅菌吸管，，按上條操作作依次制備10倍遞增稀稀釋液，每遞遞增稀釋一次次，換用1支支1mL滅菌菌吸管。根據食品衛(wèi)生生標準要求或或對檢樣污染染情況的估計計，選擇三個個連續(xù)的適宜宜稀釋度，每每個稀釋度接接種3支含有有9mL3％氯化鈉鈉堿性蛋白胨胨水的試管，，每管接種1mL。置置36℃±±1℃恒溫溫箱內，培養(yǎng)養(yǎng)8h～18h。分離在所有顯示生生長的試管或或增菌液中用用接種環(huán)沾取取一環(huán)，于TCBS平板板或科瑪嘉弧弧菌顯色培養(yǎng)養(yǎng)基平板上劃劃線分離。一一支試管劃線線一塊平板。。于36℃℃±1℃培培養(yǎng)18h～24h。典型的副溶血血性弧菌在TCBS上呈呈現(xiàn)為圓的、、半透明的、、表面光滑的的綠色菌落，，用接種環(huán)輕輕觸，有類似似口香糖的質質感，直徑2mm～3mm。從從培養(yǎng)箱取TCBS平板板后，應盡快快（不超過1h）挑取取菌落或標記記要挑取的菌菌落。典型的的副溶血性弧弧菌在科瑪嘉嘉弧菌顯色培培養(yǎng)基上呈現(xiàn)為圓的、、半透明的、、表面光滑的的粉紫色菌落落，直徑2mm～3mm。TCBS瓊脂上面的副副溶血性弧菌菌TCBS瓊脂上面的副副溶血性弧菌菌可以直接計數(shù)的副溶血性弧菌顯色培養(yǎng)基純培養(yǎng)挑取3個或以上的可疑菌落，劃線3％氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂平板，，36℃±1℃培養(yǎng)18h～24h。初步鑒定氧化酶試驗：：挑選純培養(yǎng)養(yǎng)的單個菌落落進行氧化酶試驗驗，副溶血性性弧菌為氧化化酶陽性。涂片鏡檢：將將可疑菌落涂涂片，進行革革蘭氏染色，，鏡檢觀察形形態(tài)。副溶血血性弧菌為革革蘭氏陰性，，呈棒狀、弧弧狀、卵圓狀狀等多形態(tài)，，無芽胞，有有鞭毛。挑取純培養(yǎng)的的單個可疑菌菌落，轉種3％氯化鈉三三糖鐵瓊脂斜斜面并穿刺底底層，36℃℃±1℃℃培養(yǎng)24h觀察結果。。副溶血性弧弧菌在3％氯氯化鈉三糖鐵鐵瓊脂中的反反應為底層變變黃不變黑，，無氣泡，斜斜面顏色不變變或紅色加深深，有動力。。嗜鹽性試驗：：挑取純培養(yǎng)養(yǎng)的單個可疑疑菌落，分別別接種于不同同氯化鈉濃度度的胰胨水，，36℃±1℃培養(yǎng)24h，觀觀察液體混濁濁情況。副溶溶血性弧菌在在無氯化鈉和和10％氯化化鈉的胰胨水水中不生長或或微弱生長，，在7％氯化化鈉的胰胨水水中生長旺盛盛。確定鑒鑒定生化試試驗：：分別別接種種含3％氯氯化鈉鈉的甘甘露醇醇、賴賴氨酸酸、MR-VP培養(yǎng)養(yǎng)基，，36℃℃±1℃℃培養(yǎng)養(yǎng)24h～48h后后觀察察結果果。隔隔夜培培養(yǎng)物物進行行ONPG試驗驗。API20E生化化鑒定定試劑劑盒或或VITEK：：刮取取3％％氯化鈉鈉胰蛋蛋白胨胨大豆豆瓊脂脂平板板上的的單個個菌落落，用用生理理鹽水水制備備成濁濁度適適當?shù)牡募毎麘腋「∫海?，使用用API20E生生化鑒鑒定試試劑盒盒或VITEK鑒定定。生化特特性1、分分解葡葡萄糖糖產酸酸不產產氣，，不分分解乳乳糖、、、蔗糖糖。2、H２S（－－）、、V-P（（－））、動動力（（＋＋））3、甘甘露醇醇（＋＋）、、賴氨氨酸（（＋））、ONPG（（－－）報告當檢出出的可可疑菌菌落生生化學學性狀狀符合合表1要求時，，可以以報告告檢出出副溶溶血性性弧菌菌。如如果進行行定量量檢測測，根根據證證實為為副溶溶血性性弧菌陽陽性的的試管管管數(shù)數(shù)，查查MPN檢檢索表表，報告每每g（（mL）副副溶血血性弧弧菌的的MPN值值?？漳c彎彎曲菌菌檢驗驗空腸彎彎曲菌菌分類類地位位螺菌科彎曲菌屬空腸彎曲菌芬奈爾彎曲菌豬彎曲菌結腸彎曲菌同性戀彎曲菌短暫彎曲菌胎兒彎曲菌海鷗彎曲菌胎兒亞種口腔亞種等等13個種形態(tài)與與染色色革蘭陰陰性彎彎曲小小桿菌菌，多多種形形態(tài)，，有螺螺旋形形、彎彎曲桿桿狀、、S形形、逗逗點狀狀、飛飛翔的的海鷗鷗形，，陳舊舊培養(yǎng)養(yǎng)物中中可變變成球球形。。無芽芽孢、、無莢莢膜，，有鞭鞭毛，，運動動活潑潑，似似飛箭箭樣、、穿梭梭樣翻翻滾運運動。。培養(yǎng)特特性微需氧氧：5％氧氧氣、、10％二二氧化化碳、、85％氮氮氣；；最適生生長溫溫度：：42～43℃℃；營養(yǎng)要要求高高，含含血液液和血血清的的培養(yǎng)養(yǎng)基上上生長長良好好，液液體培培養(yǎng)基基混濁濁生長長。生化特特性不酵解解不氧氧化碳碳水化化合物物；氧化酶酶、觸觸酶陽陽性；；抗原結結構和和血清清分型型菌體抗抗原（（O））抗原原：可可分成成45個以以上血血清型型，第11、12和和18血清清型最最為常常見；鞭毛抗抗原（（H)抗原原；包膜抗抗原（（K））抗原原。抵抗力力不強，，直射射陽光光、干干燥可可殺滅滅；60℃5min滅滅活；；紫外線照射射5min可滅活；；一般消毒劑劑均可殺滅滅。實驗室需具具備的條件件冰箱恒溫培養(yǎng)箱箱：25℃℃、36℃、42℃恒溫振蕩培培養(yǎng)箱微需氧培養(yǎng)養(yǎng)裝置顯微鏡：有有相差功能能高速離心機機均質器電子天平空腸彎曲菌菌檢驗程序序24h～48h圖1空腸彎曲菌檢驗程序樣品處理預增菌接種Skirrow與mCCDA瓊脂平板增菌鏡檢動力試驗微需氧25℃±1℃生長試驗有氧42℃±1℃生長試驗氧化酶試驗彎曲菌屬過氧化氫酶試驗萘啶酮酸敏感試驗馬尿酸鈉水解試驗吲哚乙酸脂水解試驗空腸彎曲菌報告挑取可疑菌落，接種哥倫比亞瓊脂平板頭孢菌素敏感試驗36℃±1℃4h42℃±1℃42℃±1℃24h～48h42℃±1℃24h～48h樣品處理25g+100mlBolton，均質質1～2min，取取濾液進行行培養(yǎng)；空腸彎曲菌菌對下列因因素非常敏敏感在空氣中的的暴露；干燥；低pH；加熱；冷凍；鹽；長期的貯存存。預增菌、增增菌和分離離程序平板上雜菌菌較多微需氧42℃±1℃、24～48h平板上雜菌菌較少繼續(xù)培養(yǎng)100r/min微需氧振振蕩，42℃±1℃、24h100r/min微需氧振振蕩，36℃±1℃、4h接種mCCDA和Skirrow平板板或CFA顯色平板板100r/min振蕩微需需氧，42℃±1℃、24h微需氧42℃±1℃培養(yǎng)24h，，觀察菌落落生長情況況48h增菌菌液與1:50稀釋液液劃線接種種mCCDA和Skirrow平板或或CFA顯顯色平板48h增菌菌液劃線接接種mCCDA和Skirrow平板板或CFA顯色平板板轉種挑取mCCDA和Skirrow平平板或CFA顯色平平板上的可可疑菌落哥倫比亞血血平板或Skirrow無抗抗生素血平平板樣品處理培養(yǎng)條件培養(yǎng)溫度42±1℃℃；時間24,48h;如果振蕩培培養(yǎng)24小小時即可；；如果靜置培培養(yǎng)需48小時；振蕩幅度100rpm;微需氧條件件：5%O210%CO285N2彎曲菌在Bolton肉湯中中培養(yǎng)均勻混濁，，微紅，不不臭。預增菌起始培養(yǎng)溫溫度要低一一些對于一些細細菌細胞受受到損傷的的冷凍長期貯存(≥10天天)36±1℃℃4～5h分離mCCDA基礎培養(yǎng)基基營養(yǎng)成分；；中和代謝產產物，維持持生長環(huán)境境的成分；；木炭抗生素頭孢哌酮鈉鈉32mg3代頭孢孢，廣泛抗抗菌兩性霉素B10mg抑抑制霉菌菌、酵母菌菌利福平10mg廣廣譜抗抗菌藥主主要用用于抗結結核分離Skirrow基礎培養(yǎng)養(yǎng)基FBP溶溶液丙酮酸鈉鈉焦亞硫酸酸鈉硫酸鈉鐵鐵抗生素溶溶液頭孢哌酮酮兩性霉素素Ｂ利福平無菌脫纖纖維綿羊羊血分離培養(yǎng)養(yǎng)基CFA瓊脂為法國梅梅里埃產產品僅有成品品平板出出售購買周期期太長（（下訂單單現(xiàn)做，，然后發(fā)發(fā)貨，一一般要2個月））保質期短短，一般般收到平平板就快快過期了了。鑒定革蘭氏染染色形態(tài)態(tài)觀察直接相差差鏡檢有氧42℃±±1℃℃生長實驗驗氧化酶試驗結果相符符合者，，確定為為彎曲菌菌屬過氧化氫氫酶試驗驗萘啶酮酸酸敏感試驗驗頭孢菌素素敏感試驗驗馬尿酸鹽鹽水解試驗驗結果相符符者為空空腸彎曲曲菌報告可疑菌落落微需氧25℃℃±1℃℃生長實驗驗吲哚乙酸酸脂水解解試驗彎曲菌屬屬的鑒定定項目彎曲菌屬特征形態(tài)觀察陰性彎曲小桿菌，多種形態(tài)，有螺旋形、彎曲桿狀、S形、逗點狀、飛翔的海鷗形a。動力觀察螺旋狀運動b氧化酶試驗陽性微需氧25℃生長試驗不生長有氧42℃生長試驗不生長a有些菌株形態(tài)不典型；b有些菌株運動不明顯空腸彎曲曲菌的鑒鑒定特征空腸彎曲菌結腸彎曲菌紅嘴鷗彎曲菌烏普薩拉彎曲菌過氧化氫酶試驗＋＋＋－或微弱馬尿酸鈉水解試驗＋－－－吲哚乙酸酯水解試驗＋＋－+頭孢菌素敏感試驗RRRS萘啶酮酸敏感試驗SaSaR/SbS注：＋陽性；－陰性；R抗性；S敏感a空腸彎曲菌和結腸彎曲菌對萘啶酮酸的耐藥性呈現(xiàn)增長趨勢。b海鷗彎曲菌的不同菌株，分別表現(xiàn)為敏感或抗性?？諒澗曛甑谋４娲娣蛛x已經經鑒定的的菌株應應在血平平板上經經2次純純化，立立即保存存于20％甘油油的布氏肉湯湯菌種保存存管中，，置于－－80℃℃保存存；冷凍干燥燥保存。。結果報告告檢樣單位位中檢出或或未檢出出空腸彎彎曲菌。。阪崎腸桿桿菌檢驗驗程序阪崎腸桿桿菌檢驗驗阪崎腸桿桿菌檢驗驗程序報告生化鑒定挑取黃色菌落DFI瓊脂36℃±1℃，24h±2h挑取藍綠色菌落1mL+mLST-Vm10mL44℃±0.5℃，24h±2h檢樣100g/mL+稀釋液900mL36℃±1℃，18h±2h前增菌選擇性增菌選擇性分離生化鑒定TSA25℃±1℃，48h±4h阪崎腸桿桿菌檢驗驗程序前增菌和和增菌mLST-Vm，即在在大腸菌菌群增菌菌肉湯LST中中另加入入適量的的NaCl和Vm。。研究證明明與其他他腸桿菌菌科細菌菌（如沙沙門菌屬屬、大腸腸埃希氏氏菌等））相比，，ES具具有較高高的耐滲滲透壓能能力。加加入0.5M的NaCl在保證證ES良良好生長長的同時時，可以以有效地地抑制上上述其他他細菌的的生長。。Vm可有有效地抑抑制G+菌的生生長。而而較高的的生長溫溫度可以以進一步步抑制其其他細菌菌的生長長。分離顯色培養(yǎng)養(yǎng)基的基基本原理理相似，，二者都都是根據據ES能能產生αα-葡萄萄糖苷酶酶，分解解底物XaGlc產生生有色菌菌落。顯色培養(yǎng)養(yǎng)基對ES的選選擇性較較好，ES形成成的特征征性菌落落易于辨辨認，以以DFI為例：：硫化氫指指示劑可可以區(qū)分分ES和和產生少少量α-葡萄糖糖苷酶但但H2S陽性菌菌株（如如普通變變形桿菌菌）。ES都可可以在該該平板上上生長并并產生藍藍綠色菌菌落其他常見見菌在DFI平平板的菌菌落顏色色白色菌落落：肺炎炎克雷伯伯氏菌、、陰溝腸腸桿菌、、大腸埃埃希氏菌菌、泛菌菌屬的多多種菌等等黃色菌落落：赫氏氏埃希氏氏菌黑褐色、、粉色或或中心藍藍綠菌