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XIAOLIFEIDAO縣人民醫(yī)院同源性

分析標準操作預(yù)案方案及程序［鍵入文檔副標題］李生曉夢［選取日期］縣人民醫(yī)院同源性分析標準操作預(yù)案方案及程序制定本方案是指當(dāng)醫(yī)院發(fā)生各類突發(fā)意外事件或情況時,各科室能及時采取的行動措施，為了讓全體醫(yī)務(wù)人員不斷提高處置各種突發(fā)事件的水平和能力，熟悉和掌握應(yīng)急處置的工作程序，建立統(tǒng)一指揮，職責(zé)明確、運轉(zhuǎn)有序、反響迅速、處置有力的運行體系，結(jié)合我院實際，特制定本方案。一、同源性分析的應(yīng)用包括感染爆發(fā)的判斷，感染病原菌確實定及感染源的尋找。二、基本方法1、細菌的表型特征分型技術(shù)（如血清型、耐藥表型等）。2、基因分型技術(shù)（如、PFGE、Rep—PCR、AFLP等）。三、操作步驟（一）表型分型（血清型、耐藥表型）1、標本孵育：從患者感染部位采集標本，并接種于相應(yīng)培養(yǎng)基（培養(yǎng)瓶）中孵育。2、別離菌種：別離病原菌（細菌或真菌），并鑒定細菌（真菌）種類。3、血清分型：如可能那么對同種細菌進行血清分型，如軍團菌等。4、藥敏試驗：根據(jù)細菌（真菌）種類選擇藥敏卡（紙片），進行藥敏試驗。5、結(jié)果分析：分析血清型和藥敏譜，如結(jié)果相同或藥敏相差不大那么提示有同源性。（二）基因分型（PFGE）1、菌栓制備：將細菌懸液與2%低熔點瓊脂糖凝膠混合,制備菌栓。2、細菌消化：分別用含溶菌酶和（或）蛋白酶K的裂解液對菌栓進行消化。3、洗滌菌栓：可用無菌水反復(fù)清洗或PMSF中和多余的蛋白酶Ko4、酶切：按照各種不同限制性內(nèi)切酶的說明進行酶切。5、制膠：用PFG巨電泳凝膠模具制備：PF（逼級瓊脂糖凝膠。6、電泳：根據(jù)不同細菌酶切片段的大小選擇適當(dāng)?shù)拿}沖參數(shù)，進行電泳。7、凝膠成像：膠塊染色后在凝膠成像儀下成像。8、結(jié)果分析：根據(jù)Tenover等制定的標準對凝膠圖像進行分析，判斷菌株之間的同源性。四、考前須知1、不同的分型方法，在分型能力、重復(fù)性、分辨能力、操作和本錢等方面都不盡相同，可根據(jù)情況進行選擇。2、表型分型方法的分辨能力普遍比基因分型方法低，但簡便、快速，適用于對感染爆發(fā)的初篩。3、基因分型方法需要特殊實驗器材

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