基本染色方法染色準(zhǔn)備：染色的第一步是制作涂片。菌液涂片時(shí)，用接種環(huán)沾取菌液點(diǎn)在載玻片上，標(biāo)本可直接在玻片上涂布。菌落涂片時(shí)，先取生理鹽水1滴，置玻片上，用接種針挑取菌落，在鹽水中涂布。涂片時(shí)必須注意應(yīng)輕輕操作。猛烈的動(dòng)作會(huì)改變菌細(xì)胞原有的排列形式，或造成細(xì)菌鞭毛脫落，影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。制備的涂片應(yīng)自然干燥，并經(jīng)火焰固定，固定溫度不宜過高，以玻片背面接觸手背不燙為準(zhǔn)，否則可能使細(xì)胞形態(tài)改變。將固定后的涂片進(jìn)行染色幾種基本染色方法2.1革蘭染色本染色是最基本的染色法，可用于標(biāo)本涂片或菌落涂片。染色結(jié)果將細(xì)菌分為革蘭陽性（紫色）和革蘭陰性（紅色）兩類。2.1.1結(jié)晶紫溶液A液：結(jié)晶紫2g95％乙醇20mlB液：草酸銨0.8g蒸餾水80ml需在用前24h將A液、B液混合，過濾后裝入試劑瓶?jī)?nèi)備用。2.1.2碘液碘1g碘化鉀2g蒸餾水300ml碘與碘化鉀混合并研磨，加入幾毫升水，使其逐漸溶解，然后研磨，繼續(xù)加入少量蒸餾水至完全溶解。最后補(bǔ)足水量。也可用少量蒸餾水，先將碘化鉀完全溶解，再加入碘片，待完全溶解后，加水至300ml。2.1.3脫色液：95％乙醇。2.1.4復(fù)染液A.貯存液：沙黃2.5g95％乙醇100mlB.應(yīng)用液：A液10ml90ml蒸餾水90ml2.1.5染色方法：涂片經(jīng)火焰固定，加結(jié)晶紫液染30s，清水沖去染液。加碘液染30s，水洗。加脫色液，不時(shí)搖動(dòng)約5?10s，至無紫色脫落為止，水洗。加復(fù)染液，染30s，水洗。干后鏡檢。3、抗酸染色抗酸染色直接用于痰標(biāo)本時(shí)，可以適當(dāng)增加標(biāo)本涂片的厚度，以提高檢出率。染厚涂片時(shí)，須掌握復(fù)染色時(shí)間。如果背景過深，影響鏡檢。奴卡菌及放線菌可呈弱抗酸性，取培養(yǎng)菌落涂片染色時(shí)，呈現(xiàn)兩種現(xiàn)象，視野中有些菌細(xì)胞陽性，另外一些則陰性；有時(shí)同一個(gè)菌體上，紅色的深淺亦有不同，觀察時(shí)應(yīng)予注意抗酸染色有兩種常用方法:①堿性復(fù)紅法又稱萋納（Ziehl—Neelsen）法（我們使用的方法）。②熒光染料金胺0法（也稱金胺0-羅丹明B法）。堿性復(fù)紅染色法試劑萋納石炭酸復(fù)紅溶液TOC\o"1-5"\h\z堿性復(fù)紅乙醇飽和溶液10ml5％石炭酸溶液90ml3.1.2脫色劑*濃鹽酸3ml95％乙醇97ml3.1.3復(fù)染液（呂弗勒美藍(lán)液）美藍(lán)乙醇飽和溶液30ml10％氫氧化鉀0.1ml蒸餾水100ml3.2、染色方法3.2.1涂片經(jīng)火焰固定，加石炭酸復(fù)紅溶液，徐徐加熱至有蒸汽出現(xiàn)，切不可沸騰。染5min（若染色奴卡菌需要加長(zhǎng)時(shí)間），水洗。3.2.2加脫色劑，不時(shí)搖動(dòng)玻片至無紅色脫落為止，水洗。3.2.3加復(fù)染液，染0.5?lmin，水洗。3.2.4干后鏡檢。分枝桿菌呈紅色，背景為藍(lán)色。3.2.5奴卡菌、放線菌標(biāo)本染色時(shí)，脫色劑改用2％硫酸水溶液。4、墨汁莢膜染色用于觀察菌體有無莢膜結(jié)構(gòu)，借此鑒定某些菌，如新型隱球菌。傳統(tǒng)的方法是用印度墨汁，但目前國(guó)內(nèi)無售。常規(guī)工作可以用墨汁或墨水代替，但應(yīng)注意顆粒不能太粗，否則影響觀察結(jié)果。有人用5%黑色素(nigrosin)水溶液做染料，效果較好。4.1、試劑印度墨汁或5%黑色素水溶液。4.2、染