樣品前處理技巧大全總結(jié)樣品前處理對分析檢測實驗員來說是至關重要的一環(huán)，其占據(jù)整個分析過程的60%以上的時間，主要的分析誤差也是來自樣品前處理環(huán)節(jié)。首先必須講解的是微量樣品前處理技術，畢竟微量樣品前處理更需要技巧。(主要是固相萃取技術哦！)針頭過濾器、超速離心是除去固體顆粒的微量樣品前處理技術，而固相萃取(Solid-phaseextraction,SPE)和固相微萃取(Solid-phasemicroextraction,SPME)是兩種從各類復雜樣品中提取凈化微量待測組分的新技術,它們具有分離速度快、操作簡單、萃取效率高、無乳化等特點,在環(huán)境分析、藥物分析、形態(tài)分析等方面有廣泛應用,尤其適用色譜分析樣品前處理。分析樣品制備技術：將采集樣品轉(zhuǎn)化為適合(色譜)分析測定的形態(tài)固相萃取(張海霞、朱彭齡,分析化學2000,28(9)：1172)它的優(yōu)點是：節(jié)省時間,交叉污染機會小,重現(xiàn)性好,回收率高,特別適用于微量試液處理。固相萃取的關鍵是根據(jù)樣品的性質(zhì)正確選擇固相萃取小柱及洗脫條件。固相微萃取固相微萃取集“采樣、萃取、濃縮、進樣”于一體,能夠與氣相色譜或高效液相色譜儀聯(lián)用樣品前處理技術。※與SPE相比SPME具有以下優(yōu)點：不使用有機溶劑萃取,降低了成本,避免了二次污染；操作時間短,從萃取進樣到分析結(jié)束不足1h；樣品用量少，幾mL?幾十mL；操作簡便,可減少待測組分的揮發(fā)損失；檢測限達口g/L?ng/L水平；適于揮發(fā)性有機物、半揮發(fā)性有機物及不具揮發(fā)性的有機物。※固相微萃取的使用：關鍵在于“纖維頭的選擇”，這種情況類似于色譜柱的選擇,主要根據(jù)分析對象的分子量和極性。固相微處理技術適用于氣體、水樣、生物樣品(如，血、尿、體液等)的萃取提取?！滔辔⑤腿〖夹g條件的選擇：纖維表面固定相固相微萃取法在農(nóng)藥殘留分析中的應用蛋白質(zhì)的分離、純化對蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)功能研究具有重要意義，蛋白質(zhì)分離技術是利用蛋白質(zhì)的特性，如，溶解度、分子質(zhì)量大小、等電點、吸附特性和其它離子的生物親和力等的不同，選擇合適的分離模式并建立最佳的純化方法。常用的分離方法包括沉淀法、色譜法和電泳及毛細管電泳。幾種方法供你選擇：（1）沉淀法利用蛋白質(zhì)在溶液中的不同溶解度。蛋白質(zhì)的溶解度取決于分子中氨基酸的類型和電荷數(shù)，通過改變緩沖液pH值、離子強度、介電常數(shù)或溫度而改變蛋白質(zhì)的溶解度。主要使用的沉淀分離技術有鹽析、等電點沉淀、溶劑分級分離。（2）透析法利用半透膜只允許小分子透過而大分子不能透過的原理來分離溶液中的蛋白質(zhì)。通常至少需要12h。（3）超濾法采用半透膜在一定壓力下，按照分子質(zhì)量大小分離溶質(zhì)的一門技術。與透析相似，但速度快得多。蛋白質(zhì)的構(gòu)成成分：氨基酸前處理1.氨基酸的分離和檢測手段，以往用化學分析法、層析法、比色法、氣相色譜法、氨基酸自動分析儀。2?隨著高效液相色譜及填料的發(fā)展，HPLC在氨基酸檢測方面顯示了其特有的優(yōu)越性，但大多數(shù)氨基酸無紫外吸收和熒光發(fā)射特性，為提高分析檢測靈敏度和分離選擇特性，通常將氨基酸衍生，衍生方式有柱前衍生法與柱后衍生法。3.HPLC與各種衍生相結(jié)合的氨基酸分析技術，構(gòu)成了具有廣泛適用性的現(xiàn)代氨基酸分析技術。樣品處理測定蛋白質(zhì)中的總氨基酸，必須先把蛋白質(zhì)水解成游離氨基酸?？刹捎盟崴?、堿水解和酶水解方法，其中以酸水解法應用最廣泛。（1）酸水解條件：常用硫酸或鹽酸進行水解。一般用6mol/LHCl,4mol/LH2S04煮沸回流24小時左右。優(yōu)點：可蒸發(fā)除去鹽酸，水解徹底，終產(chǎn)物為L-a-氨基酸，產(chǎn)物單一，無消旋現(xiàn)象。缺點：色氨酸破壞，絲氨酸和蘇氨酸有一小部分被水解，同時天冬酰胺和谷氨酰胺的酰胺基被水解下來。（2）堿水解條件：分析色氨酸可采用堿水解法，一般與5mol/LNaOH煮沸10?20小時。優(yōu)點：水解徹底，色氨酸不被破壞，水解液清亮。缺點：產(chǎn)生消旋產(chǎn)物，破壞的氨基酸多。（3）酶水解某些氨基酸對酸或堿不穩(wěn)定，在酸或堿水解時易被破壞，某些蛋白質(zhì)樣品在酸或堿水解不完全，影響某些氨基酸的回收率。對這些樣品可采用酶水解法。酶水解法可定量測定天東氨酸、谷氨酸和色氨酸。條件：蛋白酶，如，胰蛋白酶、糜蛋白酶，常溫37?40°C,pH值5?8。優(yōu)點：氨基酸不被破壞，不發(fā)生消旋現(xiàn)象。缺點：水解不完全，中間產(chǎn)物多。生物樣品分析前處理技術為什么要進行前處理？存在形式多樣：游離型藥物、與蛋白質(zhì)結(jié)合型藥物、代謝物、葡萄糖醛酸苷、硫酸酯綴合物等。成分復雜：蛋白質(zhì)、糖、脂肪、尿素、Na+、K+、X-等。（1）去除蛋白質(zhì)釋放結(jié)合型藥物、減少提取過程中乳化、保護儀器、提高靈敏度。。。加入與水混溶的有機溶劑中性鹽強酸加入含鋅鹽、銅鹽的沉淀劑酶解法（2）綴合物的水解酸水解/酶水解（3）有機破壞測定生物樣品中的金屬離子，常用HN03-HC104作為消解劑，一般得到高價態(tài)金屬離子。（4）分離、純化和濃集使被測物在所用分析技術