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DNA多聚酶鏈式反應擴增DNA片斷課題2目錄上頁下頁習題參考書返回一、DNA分子復制的過程參與的組分在DNA復制中的左右解旋酶打開DNA雙鏈DNA母鏈提供DNA復制的模板4種脫氧核苷酸合成子鏈的原料DNA聚合酶催化合成DNA子鏈引物使DNA聚合酶能夠從引物的3’端開始連接脫氧核苷酸目錄上頁下頁習題參考書返回二、PCR原理PCR參與的組分在DNA復制中的作用高溫變性解旋酶打開DNA雙鏈DNA母鏈提供DNA復制的模板4種脫氧核苷酸合成子鏈的原料Taq酶(耐高溫)DNA聚合酶催化合成DNA子鏈15-30個核苷酸構(gòu)成DNA或RNA單鏈引物使DNA聚合酶能夠從引物的3’端開始連接脫氧核苷酸目錄上頁下頁習題參考書返回DNA雙鏈反向平行3’5’5’目錄上頁下頁習題參考書返回基本單位目錄上頁下頁習題參考書返回①②③④⑤目錄上頁下頁習題參考書返回實驗操作步驟:(準備)按配方將所需試劑擺放在實驗桌上(移液)用微量移液器按配方在微量離心管中依次加入各組分(混合)蓋嚴離心管口的蓋子,用手指輕輕彈擊管壁(離心)將微量離心管放在離心機上(反應)將離心管放入PCR儀上,設置好PCR儀的循環(huán)程序目錄上頁下頁習題參考書返回反應周期高溫變性低溫退火適溫延伸反應循環(huán)數(shù)擴增倍數(shù)106--10925--30目錄上頁下頁習題參考書返回目錄上頁下頁習題參考書返回目錄上頁下頁習題參考書返回950C變性550C復性720C延伸PCR過程第一輪實驗結(jié)果與分析DNA含量=50x(260nm的讀數(shù))x稀釋倍數(shù)目錄上頁下頁習題參考書返回移液器目錄上頁下頁習題參考書返回離心管離心
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