digeneHC2HPV檢測臨床應(yīng)用及其優(yōu)勢介紹WH市場部HybridCapture?2（HC2）--雜交捕獲二代利用基因雜交、化學(xué)發(fā)光、信號放大的原理在分子水平同時檢測被WHO確認(rèn)的13種高危型-HPV病毒DNA96test/kit(88病人標(biāo)本/盒）HC2HPV檢測流程：樣本收集：樣本類型及采樣注意事項樣本處理過程檢測步驟HC2HPV檢測

采樣器用于HPV檢測的最常見的樣本

是:

Thehc2DNACollectionDevice采樣器?采集的STM標(biāo)本TheThinPrep?樣本(Hologic)新鮮宮頸活檢標(biāo)本（截面為2-5mm的宮頸活檢組織）HC2HPV檢測宮頸取樣插入宮頸口1-1.5cm，直到刷子最外圈接觸到外宮頸逆時針方向,旋轉(zhuǎn)三圈,停留十秒將刷子底部放到轉(zhuǎn)移管中，在劃線處折斷桿子，將整個刷子留在轉(zhuǎn)移管中HC2HPV檢測宮頸取樣標(biāo)本保存HPV標(biāo)本的保存

1、室溫下：保存2周

2、2-8℃：再保存1周

3、-20℃：保存3個月或更長

標(biāo)本保存注意事項使用專用的DIGENEHPV采樣器（含試劑，可抑制細(xì)菌生長，保持DNA完整性）

注：切勿將小刷子扔掉，以保留足量標(biāo)本采樣前三天內(nèi)不要陰道內(nèi)用藥或沖洗，避免經(jīng)期采樣采樣前不要進行醋酸/碘液涂抹開蓋、折斷小刷子時勿大力震蕩試管，以免試劑濺出影響檢測或標(biāo)本濺出造成污染少量血液不影響檢測結(jié)果在試管壁上標(biāo)明患者名稱和年齡蓋緊瓶蓋HC2HPV檢測流程：樣本收集：樣本類型及采樣注意事項樣本處理過程檢測步驟不同類型的樣本

hc2DNACollectionDevice采樣器TheThinPrep細(xì)胞保存液細(xì)胞溶解:只保留DNA保留細(xì)胞不同類型的樣本處理Thinprep樣本在進行hc2檢測前進行轉(zhuǎn)換樣本轉(zhuǎn)換試劑盒CCUPreservCyt（即Thinprep樣本）的轉(zhuǎn)換流程Step1Step2Step3Step4Step5搖動/漩渦混合10sec.取出4mL加入400uL轉(zhuǎn)換緩沖液加蓋和漩渦混合離心15min取出上清液Step10Step9Step8Step7Step6取出殘余液態(tài)150uL變性液加蓋漩渦混合30sec65°水浴15min.漩渦混合15-30sec.在水浴30min.漩渦混合5sec.去蓋，取75uL加入微孔板用Digene自己的采樣標(biāo)本，可直接進行檢測!

Step1Step2Step3500uL混有指示劑的變性劑加入樣本加蓋和漩渦混合(MST)65°水浴45min.漩渦混合5secHC2HPV檢測流程：樣本收集：樣本類型及采樣注意事項樣本處理過程檢測步驟HC2技術(shù)的檢測步驟DenaturespecimenHybridizewithRNAprobeCapture

anddetecthybridsLuminescenceHc2檢測方法分為簡單的5部變性溶解細(xì)胞，釋放DNA單鏈雜交全長病毒RNA探針與病毒靶DNA結(jié)合捕獲DNA:RNA復(fù)合物被包被在微孔板上的抗體捕獲

一抗特異性結(jié)合DNA:RNA復(fù)合物

雜交檢測用二抗結(jié)合捕獲后的復(fù)合物二抗偶聯(lián)有堿性磷酸酶發(fā)光信號產(chǎn)生 加入堿性磷酸酶的底物

產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光信號HC2HPV檢測步驟-----簡單的5步

Step1:變性溶解細(xì)胞，解鏈和變性核酸,釋放HPVDNA單鏈Step2:雜交全長病毒RNA探針與HPV病毒靶DNA結(jié)合，形成RNA:DNA復(fù)合物Step3:捕獲RNA:DNA復(fù)合物被包被在微孔板上的抗體捕獲一抗特異性結(jié)RNA:DNA復(fù)合物