標(biāo)準(zhǔn)解讀

《GB/T 19495.5-2004轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)核酸定量PCR檢測(cè)方法》是中國(guó)關(guān)于轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)的一項(xiàng)國(guó)家推薦性標(biāo)準(zhǔn)，重點(diǎn)介紹了使用聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）技術(shù)對(duì)轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品中特定核酸序列進(jìn)行定量檢測(cè)的方法。以下是該標(biāo)準(zhǔn)的主要內(nèi)容概述：

標(biāo)準(zhǔn)范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品中目標(biāo)DNA或RNA片段的濃度或拷貝數(shù)的方法。適用于轉(zhuǎn)基因植物、微生物及其制品中轉(zhuǎn)基因成分的定性和定量分析。

術(shù)語(yǔ)和定義

  • 實(shí)時(shí)熒光定量PCR：通過在PCR擴(kuò)增過程中實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)熒光信號(hào)強(qiáng)度變化，實(shí)現(xiàn)對(duì)模板DNA初始量的定量分析。
  • 標(biāo)準(zhǔn)曲線法：利用已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品建立熒光信號(hào)與模板濃度之間的關(guān)系曲線，用于未知樣品的定量分析。

原理

該方法基于TaqMan探針或SYBR Green染料技術(shù)，在PCR擴(kuò)增時(shí)，隨著靶標(biāo)序列的增加，熒光信號(hào)強(qiáng)度隨之增強(qiáng)，通過監(jiān)測(cè)這一過程，可以計(jì)算出樣本中目標(biāo)核酸的初始含量。

試劑與材料

詳細(xì)列出了進(jìn)行PCR實(shí)驗(yàn)所需的各種試劑、引物、探針的選擇原則及質(zhì)量要求，以及標(biāo)準(zhǔn)品的制備方法。

儀器設(shè)備

包括實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀、離心機(jī)、超凈工作臺(tái)等實(shí)驗(yàn)設(shè)備的基本要求和操作規(guī)范。

檢測(cè)步驟

  1. 樣品處理：詳細(xì)說明了從轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品中提取DNA或RNA的步驟和注意事項(xiàng)。
  2. PCR反應(yīng)體系配制：介紹如何根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求準(zhǔn)備反應(yīng)混合液。
  3. PCR程序設(shè)置：包括預(yù)變性、循環(huán)變性、退火、延伸等各階段的溫度和時(shí)間設(shè)定。
  4. 數(shù)據(jù)分析：解釋如何根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行定量分析。

精密度與準(zhǔn)確度

提供了重復(fù)性限和再現(xiàn)性限的計(jì)算方法，以及評(píng)價(jià)檢測(cè)方法精密度和準(zhǔn)確度的準(zhǔn)則。

檢出限與定量限

定義了檢出限（LOD）和定量限（LOQ），明確了能可靠檢測(cè)和定量的最低核酸濃度。

試驗(yàn)報(bào)告

規(guī)定了檢測(cè)報(bào)告應(yīng)包含的信息，如樣品信息、檢測(cè)方法、結(jié)果數(shù)據(jù)、結(jié)論及必要的備注等。

該標(biāo)準(zhǔn)為轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品中特定核酸序列的定量檢測(cè)提供了統(tǒng)一的技術(shù)指導(dǎo)和操作流程，確保了檢測(cè)結(jié)果的可比性和準(zhǔn)確性，對(duì)于轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的安全性評(píng)估、市場(chǎng)監(jiān)管及貿(mào)易具有重要意義。


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  • 2004-04-13 頒布
  • 2004-04-13 實(shí)施
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文檔簡(jiǎn)介

ICS67.050B04中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T：19495.5-一2004轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)核酸定量PCR檢測(cè)方法Detectionofgeneticallymodifiedorganismsandderivedproducts-QuantitativePCRmethodsbasedonnucleicacid2004-04-13發(fā)布2004-04-13實(shí)施中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局發(fā)布中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

GB/T19495.5-2004三前言范圍2規(guī)范性引用文件3術(shù)語(yǔ)、定義和縮略語(yǔ)·防污染措施45原理6試劑7主要儀器設(shè)備8檢測(cè)…………結(jié)果分析與計(jì)算10結(jié)果表述…側(cè)試報(bào)告附錄A（規(guī)范性附錄）轉(zhuǎn)基因大豆GTS-40-3-2實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)方法附錄B（規(guī)范性附錄）轉(zhuǎn)基因玉米MON810實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)方法10附錄C（規(guī)范性附錄）轉(zhuǎn)基因玉米Br176實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)方法附錄D（規(guī)范性附錄）轉(zhuǎn)基因玉米Bul1實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)方法工7附錄E（規(guī)范性附錄）轉(zhuǎn)基因玉米GA21實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)方法10附錄F（規(guī)范性附錄)轉(zhuǎn)基因玉米T25實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)方法附錄G（規(guī)范性附錄)轉(zhuǎn)基因油菜RT73實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)方法參考文獻(xiàn)25

GB/T19495.5-2004GB/T19495《轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)》為系列標(biāo)準(zhǔn)：GB/T19495.1—2004轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)通用要求和定義：GB/T19495.2—2004轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)要求：GB/T19495.3—2004轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)核酸提取純化方法；-GB/T19495.4—2004轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)核酸定性PCR檢測(cè)方法：-GB/T19495.5—2004轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)核酸定量PCR檢測(cè)方法；-GB/T19495.6—2004轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)基因芯片檢測(cè)方法;GB/T19495.7—2004轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)抽樣和制樣方法；GGB/T19495.8—2004轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)蛋白質(zhì)檢測(cè)方法。本部分的附錄A、附錄B、附錄C、附錄D、附錄E、附錄F和附錄G為規(guī)范性附錄本部分由國(guó)家認(rèn)證認(rèn)可監(jiān)督委員會(huì)提出并歸口。本部分由中華人民共和國(guó)廣東出入境檢驗(yàn)檢疫局和國(guó)家質(zhì)檢總局動(dòng)植物檢疫實(shí)驗(yàn)所負(fù)責(zé)起草，中華人民共和國(guó)江寧出入境檢驗(yàn)檢疫局、中華人民共和國(guó)上海出人境檢驗(yàn)檢疫局、中華人民共和國(guó)深圳出人境檢驗(yàn)檢疫局和中國(guó)進(jìn)出口商品檢驗(yàn)技術(shù)研究所參加起草本部分主要起草人：草文、朱水芳、曹際娟、潘良文、陳紅運(yùn)、黃文勝、章桂明、徐寶梁、趙文軍、董潔本部分系首次發(fā)布的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。

GB/T19495.5—2004轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)核酸定量PCR檢測(cè)方法范圍GB/T19495的本部分規(guī)定了轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品中轉(zhuǎn)基因成分核酸定量檢測(cè)方法本部分的規(guī)范性附錄規(guī)定了不同轉(zhuǎn)基因品種和品系核酸定量檢測(cè)方法。本部分規(guī)定了轉(zhuǎn)基因成分絕對(duì)含量和相對(duì)含量的計(jì)算方法本部分適用于食品、飼料、種子及其環(huán)境材料中轉(zhuǎn)基因成分的實(shí)時(shí)熒光PCR定量檢測(cè)本部分也適用于轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品中轉(zhuǎn)基因成分定性PCR檢測(cè)陽(yáng)性結(jié)果的確證檢測(cè)。范性引用文件下列文件中的條款通過GB/T19495的本部分的引用而成為本部分的條款。凡是注日期的引用文件,其隨后所有的修改單(不包括勒誤的內(nèi)容)或修訂版均不適用于本部分,然而，鼓勵(lì)根據(jù)本部分達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本適用于本部分。GB/T19495.1—2004轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)通用要求和定義GB/T19495.2—2004轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)要求GB/T19495.3-2004轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)核酸提取純化方法GB/T19495.4—2004轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)核酸定性PCR檢測(cè)方法術(shù)語(yǔ)、定義和縮略語(yǔ)本部分采用下列術(shù)語(yǔ)、定義和縮略語(yǔ)3.1術(shù)語(yǔ)和定義GB/T19495.1確立的以及下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于GB/T19495的本部分3.1.1檢測(cè)低限Iimitofdetection.LOD在假陰性結(jié)果不超過5%的條件下，檢測(cè)方法所能檢測(cè)的最低濃度和含量3.1.2外源基因exogenousgene利用生物工程技術(shù)轉(zhuǎn)入的其他生物基因，使該生物品種表現(xiàn)新的生物學(xué)性狀3.1.3陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)positivereferencematerials由認(rèn)可機(jī)構(gòu)制備、有湖源性的并經(jīng)檢測(cè)證

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