第五章

自動生化分析技術(shù)目錄第一節(jié)概述第二節(jié)自動生化分析儀常用分析方法第三節(jié)自動生化分析儀的參數(shù)設(shè)置第四節(jié)檢測系統(tǒng)的校準(zhǔn)和性能評價第五節(jié)自動生化分析儀操作流程2第一節(jié)概述主要內(nèi)容：一、分立式自動生化分析儀的結(jié)構(gòu)與功能

二、干化學(xué)式生化分析儀的結(jié)構(gòu)和功能三、自動生化分析技術(shù)的發(fā)展思考題：1.分立式自動生化分析儀的主要結(jié)構(gòu)及各自的功能是什么？干式生化分析儀的檢測原理及特點是什么？

自動生化分析儀有哪些主要類型？其未來的發(fā)展趨勢是什么？6continuousstreaming

movementstyle或管道式：已很少用centrifugationstyle：已很少用discretestyle：應(yīng)用最廣泛dryingstyle：急診多用自動生化分析儀的主要類型一、分立式自動生化分析儀的結(jié)構(gòu)與功能

分立式自動生化分析儀（discreteautomaticbiochemicalanalyzer）是按人工操作的方式編排程序，并以有序的機(jī)械操作代替手工操作，按程序依次完成加樣、加試劑、攪拌、反應(yīng)杯保溫孵育、吸光度檢測等各項操作。一、分立式自動生化分析儀的結(jié)構(gòu)與功能分立式自動生化分析儀的基本結(jié)構(gòu)一、分立式自動生化分析儀的結(jié)構(gòu)與功能全自動生化分析儀全貌及其內(nèi)部結(jié)構(gòu)一、分立式自動生化分析儀的結(jié)構(gòu)與功能（一）樣本和試劑處理系統(tǒng)1.樣本盤或樣本架

樣本盤為圓盤狀，盤上有兩圈放置采血管或樣本杯的插孔，通過轉(zhuǎn)動控制不同樣本到特定位置取樣。而樣本架類似于試管架，放置樣本后經(jīng)傳送帶運送到特定位置進(jìn)樣。一、分立式自動生化分析儀的結(jié)構(gòu)與功能11樣品盤：放置待測樣品的轉(zhuǎn)盤，可放置一定數(shù)量的樣品杯或不同規(guī)格的采血試管，通過樣品盤的轉(zhuǎn)動來控制不同樣品的進(jìn)樣。一次性裝載樣本大。轉(zhuǎn)動恒定，故障率低。一、分立式自動生化分析儀的結(jié)構(gòu)與功能樣品架：每個樣品架可放數(shù)只樣品杯或采血試管（多為4只，5只或10只）。樣品架上的條形碼或編碼孔可識別樣品架號及樣品位置號。樣品架的移動通過樣品傳送帶來進(jìn)行。樣品架適合模塊組合式自動生化分析儀和全實驗室自動化系統(tǒng)。一、分立式自動生化分析儀的結(jié)構(gòu)與功能一、分立式自動生化分析儀的結(jié)構(gòu)與功能（一）樣本和試劑處理系統(tǒng)2.試劑盤和試劑瓶

安裝在具有冷藏功能的試劑倉內(nèi)。試劑盤可放置一定形狀的試劑瓶，不同分析儀試劑瓶的容量和形狀不同。二、分立式自動生化分析儀的結(jié)構(gòu)與功能

試劑盤二、分立式自動生化分析儀的結(jié)構(gòu)與功能試劑瓶：試劑瓶容量一般為10～100ml。通過試劑轉(zhuǎn)盤的轉(zhuǎn)動來選用不同試劑。傳統(tǒng)的生化試劑瓶手工處理，失誤浪費試劑可檢測量無法統(tǒng)計效期短，易揮發(fā)不穩(wěn)定，定標(biāo)頻率高儲存不便一、分立式自動生化分析儀的結(jié)構(gòu)與功能無需預(yù)處理-避免操作浪費具體測試數(shù)-便于統(tǒng)計成本上機(jī)更穩(wěn)定-更加節(jié)省試劑密封效果好-避免揮發(fā)污染儲存很便利-更加節(jié)省空間一、分立式自動生化分析儀的結(jié)構(gòu)與功能（一）樣本和試劑處理系統(tǒng)3.取液裝置樣本和試劑的吸取由帶定量吸液器和樣品針或試劑針的機(jī)械臂完成。樣品針和試劑針具有多種功能：液面感應(yīng)功能、防撞功能、阻塞報警功能。一、分立式自動生化分析儀的結(jié)構(gòu)與功能一、分立式自動生化分析儀的結(jié)構(gòu)與功能取樣裝置：由取樣針、取樣臂、取樣管路、取樣注射器和閥門組成，能定量吸取樣品并加入到反應(yīng)杯。不同分析儀的取樣容量有不同的范圍，一般為2～35μl，步進(jìn)0.1微升不等。試劑針一、分立式自動生化分析儀的結(jié)構(gòu)與功能（二）反應(yīng)系統(tǒng)1.反應(yīng)盤和反應(yīng)杯：反應(yīng)盤為擱置反應(yīng)杯的圓盤狀裝置。反應(yīng)杯由透光性好的石英玻璃、硬質(zhì)玻璃或丙烯酸塑料制成，容量為80μl～500μl不等，是樣本與試劑進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)的場所。一、分立式自動生化分析儀的結(jié)構(gòu)與功能反應(yīng)盤：100只或更多的反應(yīng)杯圍成一圈組成。在測定過程中反應(yīng)盤作恒速的圓周運動。在靜止時向反應(yīng)杯中加入樣品、試劑或進(jìn)行攪拌混勻。當(dāng)反應(yīng)盤恒速圓周運動經(jīng)過檢測窗口的比色杯可進(jìn)行吸光度檢測。一、分立式自動生化分析儀的結(jié)構(gòu)與功能反應(yīng)杯（比色杯）：是樣品與試劑進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)的場所，同時用作比色杯。由透光特性好的硬塑料或硬質(zhì)石英玻璃或丙烯酸塑料制成，自動沖洗備用。比色杯光徑：不同分析儀光徑0.5～1cm不等，大多數(shù)分析儀在計算時將其折算為1厘米光徑。現(xiàn)代生化儀多具備比色杯自動沖洗裝置和自動空白檢查功能。一、分立式自動生化分析儀的結(jié)構(gòu)與功能（二）反應(yīng)系統(tǒng)

2.混勻裝置：

混勻的方式有機(jī)械振動、攪拌和超聲混勻等，目前多采用攪拌方式，超聲混勻可杜絕攜帶污染，極大程度減少泡沫產(chǎn)生。一、分立式自動生化分析儀的結(jié)構(gòu)與功能混勻器：反應(yīng)杯里的樣品與試劑通過攪拌棒攪拌而充分混勻，攪拌棒的形狀為扁平棒狀或扁平螺旋狀，表面的疏水材料能防止反應(yīng)液被攪拌棒所攜帶。其工作方式大多為旋轉(zhuǎn)式攪拌，也有震動式攪拌方式。也設(shè)置了防止攪拌棒在不同反應(yīng)液之間攜帶交叉污染的清洗措施。一、分立式自動生化分析儀的結(jié)構(gòu)與功能（二）反應(yīng)系統(tǒng)

3.恒溫裝置：保持恒溫有3種方式：①水浴，優(yōu)點是溫度均勻穩(wěn)定，缺點是需加防腐劑來保持水的潔凈，并要定期更換和清洗；②空氣浴，即由加熱器加熱比色杯周圍的空氣，保養(yǎng)簡單，但升溫慢，溫度不太穩(wěn)定，易受環(huán)境溫度影響；③恒溫液循環(huán)間接加熱法，采用一種無污染、惰性的不蒸發(fā)液體，比色杯與恒溫液之間有極小的空氣狹縫，恒溫液將縫隙的空氣加熱，其優(yōu)點是升溫快，溫度穩(wěn)定、均勻，不需要特殊保養(yǎng)。一、分立式自動生化分析儀的結(jié)構(gòu)與功能一、分立式自動生化分析儀的結(jié)構(gòu)與功能（三）檢測系統(tǒng)1.光路系統(tǒng)：由光源、比色杯和分光元件（濾光片、棱鏡或光柵）等組成。主要以后分光光路系統(tǒng)為主：光源→反應(yīng)液→分光元件→單色光→信號檢測器。一、分立式自動生化分析儀的結(jié)構(gòu)與功能后分光：光源先透過比色杯中的反應(yīng)液再照射到光柵上，經(jīng)色散后所有固定單色光同時通過各自的光纖傳輸?shù)綄?yīng)的檢測器后分光光路示意圖一、分立式自動生化分析儀的結(jié)構(gòu)與功能（三）檢測系統(tǒng)2.信號檢測器：光信號由信號檢測器接收，轉(zhuǎn)換成電信號并加以放大，再通過模數(shù)轉(zhuǎn)換電路將模擬信號轉(zhuǎn)換成數(shù)字信號，傳送到微處理器，后者按各測定項目的分析參數(shù)選擇其中一個（單波長）或兩個波長（雙波長）的吸光度值，用于計算樣本結(jié)果。一、分立式自動生化分析儀的結(jié)構(gòu)與功能（四）計算機(jī)控制系統(tǒng)包括自動開關(guān)機(jī)、系統(tǒng)自檢、樣本和試劑識別、分析測定、結(jié)果計算、數(shù)據(jù)儲存和輸出、自動維護(hù)和保養(yǎng)等功能。一、分立式自動生化分析儀的結(jié)構(gòu)與功能計算機(jī)系統(tǒng)：自動生化分析儀的核心部件，可實現(xiàn)識別標(biāo)本、吸加樣本和試劑、混合恒溫、數(shù)據(jù)處理、結(jié)果打印。校準(zhǔn)方法和測定方法的選擇、質(zhì)量監(jiān)控等內(nèi)容也均由計算機(jī)控制完成。特點：多種數(shù)據(jù)處理功能，實現(xiàn)了檢測的自動化

計算測定結(jié)果判斷結(jié)果準(zhǔn)確性

保存各種數(shù)據(jù)

自我診斷功能1.鍵盤2.顯示器3.鼠標(biāo)4.計算機(jī)二、干化學(xué)式生化分析儀的結(jié)構(gòu)和功能

干化學(xué)式生化分析儀（drychemistryautomaticbiochemicalanalyzer）與配套干片試劑組成一個檢測系統(tǒng)，采用的是干化學(xué)分析技術(shù)，即將生化檢測所需的試劑固定在具有多層復(fù)合膜結(jié)構(gòu)的載體上，形成固相試劑，稱為干片試劑。多涂層薄膜干片技術(shù)擴(kuò)散層擴(kuò)散層試劑層試劑層指示劑層指示劑層支持層支持層標(biāo)本多涂層薄膜干片技術(shù)：將所需試劑預(yù)固相在多層薄膜和郵票大小的透明支持基墊之上。當(dāng)血漿，血清，尿液或腦脊液與這些已含化學(xué)物質(zhì)的干式薄膜接觸時發(fā)生反應(yīng)并對反應(yīng)信號進(jìn)行測量。干片分類CM/RTPMIR干片(MicroSlide)鈉鉀氯地高辛苯巴比妥卡馬西平苯妥因C反應(yīng)蛋白膽固醇 甘油三酯總蛋白 白蛋白高密度酯蛋白脂肪酶尿蛋白

腦脊液蛋白谷丙轉(zhuǎn)氨酶谷氨酸轉(zhuǎn)移酶堿性磷酸酶 r谷氨酰轉(zhuǎn)酞酶乳酸脫氫酶 肌酸激酶肌酸激酶同工酶尿素氮肌酐 尿酸

乳酸 鐵、總鐵結(jié)合力磷 鋰淀粉酶膽堿脂酶總膽紅素結(jié)合/非結(jié)合膽紅素血氨乙醇水楊酸茶堿醋氨酚鎂二氧化碳比色/速率法干片免疫速率法干片電極法干片

指示劑層支持層擴(kuò)散層試劑層比色/速率法干片通過測定干片顏色變化來確定化合物濃度

指示劑層支持層

多孔結(jié)構(gòu)，允許標(biāo)本通過均勻分布標(biāo)本過濾大分子（蛋白質(zhì)，脂肪等）去除干擾物質(zhì)（溶血，黃疸等）提供反射測定的背景擴(kuò)散層試劑層擴(kuò)散層比色/速率法干片結(jié)構(gòu)試劑層

擴(kuò)散層試劑層指示劑層支持層

包含檢測反應(yīng)所需的酶，緩沖液，催化劑等多層試劑，控制反應(yīng)順序比色/速率法干片結(jié)構(gòu)葡萄糖干片指示劑層

擴(kuò)散層試劑層

指示劑層支持層試劑層產(chǎn)物與指示劑層中的染料結(jié)合時，形成有色復(fù)合物，其與分析物濃度成正比。比色/速率法干片結(jié)構(gòu)支持層

擴(kuò)散層試劑層

指示劑層

支持層

提供反應(yīng)支持基墊允許光路自由通過比色/速率法干片結(jié)構(gòu)均勻分布標(biāo)本比色/速率法干片功能演示擴(kuò)散層試劑層指示劑層支持層均勻分布標(biāo)本標(biāo)本進(jìn)入擴(kuò)散層均勻分布標(biāo)本擴(kuò)散層試劑層指示劑層支持層比色/速率法干片功能演示標(biāo)本迅速向四周擴(kuò)散均勻分布標(biāo)本擴(kuò)散層試劑層指示劑層支持層比色/速率法干片功能演示標(biāo)本均勻向下層滲透擴(kuò)散層試劑層指示劑層支持層比色/速率法干片功能演示標(biāo)本與試劑反應(yīng)擴(kuò)散層試劑層指示劑層支持層比色/速率法干片功能演示反應(yīng)物在指示劑層被固定擴(kuò)散層試劑層指示劑層支持層比色/速率法干片功能演示反射光的測定干擾物質(zhì)反光背景成色層生成純凈的反射光光源濾光片接收器比色/速率法干片功能演示接收器接收器透射與反射光線經(jīng)過干擾物質(zhì)光線不經(jīng)過干擾物質(zhì)受影響不受影響二、干化學(xué)式生化分析儀的結(jié)構(gòu)和功能儀器優(yōu)點：完全脫離了傳統(tǒng)的采用試管和吸管的分析方法，儀器操作簡便，測定速度快，靈敏度和準(zhǔn)確度與典型的分立式儀器相近。儀器缺點：對環(huán)境要求比較高，尤其是空氣的溫度和濕度。成本較“濕化學(xué)”略高，多用于急診。VITROS350-干化學(xué)式生化分析儀12341、系統(tǒng)控制中心2、樣本處理中心3、干片處理中心4、廢物回收中心VITROS350－儀器內(nèi)部結(jié)構(gòu)VITROS350－系統(tǒng)控制中心VITROS350－樣本處理中心共計40個可調(diào)標(biāo)本位置，多種適配器可讓操作者選擇使用不同的標(biāo)本容器一個標(biāo)本一個吸樣頭-杜絕交叉污染一次性的稀釋杯-杜絕交叉污染提供多樣的稀釋液–使結(jié)果更加準(zhǔn)確VITROS350－樣本處理中心全方位標(biāo)本監(jiān)測系統(tǒng)，氣泡，凝塊探測－減少因標(biāo)本質(zhì)量引起的重復(fù)檢測自動機(jī)上預(yù)稀釋和后稀釋－減少手工操作的失誤精確的微量加樣系統(tǒng)，僅需5-11μl微量標(biāo)本－滿足兒童或老人等不易采血人群的需求各自獨立的輔助液體加樣系統(tǒng)－杜絕污染VITROS350－干片處理中心23個孵育位由計算機(jī)控制干片的分配精準(zhǔn)的溫度控制系統(tǒng)確保最佳反應(yīng)溫度－保證可靠的檢測結(jié)果全自動控制反射光系統(tǒng)提供穩(wěn)定的測定手段－保證可靠的檢測結(jié)果動態(tài)的參考白參比設(shè)計保證儀器的良好重復(fù)性VITROS350－干片盒裝載通道試劑干片可隨時裝載進(jìn)入儀器機(jī)內(nèi)兩個環(huán)狀儲藏器可存儲共60個干片盒機(jī)內(nèi)干片存儲環(huán)境受嚴(yán)格溫濕度控制–保證測試質(zhì)量全自動干片識別記憶系統(tǒng)VITROS350－廢物回收中心干燥劑、保濕劑吸頭回收干片回收彈夾回收VITROS350－日常保養(yǎng)無上下水系統(tǒng)，電源接通即可工作VITROS350－報警提示VITROS350－數(shù)據(jù)輸出VITROS?5,1FSChemistrySystemCommandCenter控制中心SamplingCenter樣品中心DisposableTip

ProcessingCenter一次性吸頭處理中心MicroTipSpecial

ChemistryCenter特殊生化項目處理中心VITROSMicroSlideTMCenter干片中心VITROS?5,1FS全自動生化分析系統(tǒng)BusinessConfidentialBusinessConfidentialBack（一）實驗室信息系統(tǒng)（二）生化檢驗自動化帶來的變革（三）發(fā)展趨勢三、自動生化分析技術(shù)的發(fā)展（一）實驗室信息系統(tǒng)（laboratoryinformationsystem，LIS）是借助計算機(jī)技術(shù)、網(wǎng)絡(luò)技術(shù)、數(shù)字化與智能化技術(shù)等現(xiàn)代技術(shù)手段，對臨床實驗室內(nèi)樣本信息和各種自動化儀器運行信息進(jìn)行收集、處理、存儲、輸送、分析、應(yīng)用的綜合管理系統(tǒng)。LIS往往與醫(yī)院信息系統(tǒng)（hospitalinformationsystem，HIS）連接，它能夠配合醫(yī)生、護(hù)士工作站，完成檢驗申請、樣本采集管理、樣本核收、檢驗報告?zhèn)鬏數(shù)裙δ?，使實驗室信息更好更快地服?wù)于臨床。三、自動生化分析技術(shù)的發(fā)展（二）生化檢驗自動化帶來的變革提高臨床實驗室技術(shù)和管理水平降低實驗室的生物安全風(fēng)險提升實驗室的服務(wù)水平三、自動生化分析技術(shù)的發(fā)展（三）發(fā)展趨勢

20世紀(jì)90年代中期，推出模塊式生化分析系統(tǒng)，將兩臺或兩臺以上的分析模塊組合在一起，這些分析模塊包含了分光光度法、離子選擇電極法的生化分析模塊和免疫比濁法、免疫化學(xué)發(fā)光法的免疫分析模塊，各分析模塊既有各自獨立的控制系統(tǒng)又有共用的控制系統(tǒng)，樣本通過傳送帶在各模塊之間進(jìn)行傳遞并完成所有項目的測定。三、自動生化分析技術(shù)的發(fā)展三、自動生化分析技術(shù)的發(fā)展電解質(zhì)模塊生化模塊免疫模塊生化模塊三、自動生化分析技術(shù)的發(fā)展主軌道回傳軌道運行軌道MSB智能樣本架穿梭控制站三、自動生化分析技術(shù)的發(fā)展模塊速度（T/H）試劑通道數(shù)ISE模塊900/1800K、Na、Cl

生化模塊12000

70（cpack）生化模塊2600

60（cpack）免疫模塊17025（epack）三、自動生化分析技術(shù)的發(fā)展年份樣本數(shù)(個/天)總測試數(shù)(t/d)速度（t/h）檢測時間2010年5005,0002,6002.0

小時2011年5755,7502,6002.2小時2012年6736,7302,6002.6

小時2013年7747,7402,6003.0小時2014年9069,0604,6002.0小時三、自動生化分析技術(shù)的發(fā)展

目前正向自動化程度更高的全實驗室自動化（totallaboratoryautomation，TLA）方向發(fā)展。TLA將樣本前處理系統(tǒng)、樣本運送系統(tǒng)、樣本分析系統(tǒng)（血細(xì)胞系統(tǒng)、凝血系統(tǒng)、生化系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)等）串聯(lián)起來，組成流水線，再加上LIS和計算機(jī)硬件，形成大規(guī)模的全檢驗過程的自動化。TLA系統(tǒng)的組成實驗室自動化流水線模式圖三、自動生化分析技術(shù)的發(fā)展TLA系統(tǒng)的組成實驗室自動化流水線模式圖三、自動生化分析技術(shù)的發(fā)展樣本前處理系統(tǒng)三、自動生化分析技術(shù)的發(fā)展BulkLoader離心機(jī)條碼識別照相系統(tǒng)開蓋分類，封蓋，歸檔三、自動生化分析技術(shù)的發(fā)展血清工作區(qū)血球工作區(qū)血凝工作區(qū)尿液等其他樣本前處理系統(tǒng)三、自動生化分析技術(shù)的發(fā)展黃疸溶血脂血檢測前發(fā)現(xiàn)問題血清樣本，及時干預(yù)處理樣本前處理系統(tǒng)三、自動生化分析技術(shù)的發(fā)展樣本后處理系統(tǒng)2°C4°C6°C8°C10°C溫度控制自動查找和取出過期樣本自動丟棄樣本自動保存第二節(jié)自動生化分析儀常用分析方法一、終點法當(dāng)反應(yīng)達(dá)到平衡時產(chǎn)物不再增加，吸光度不改變，根據(jù)平衡點吸光度的大小即能算出被測物濃度，這種方法稱為終點法（endassay）。分為：一點終點法（onepointendassay）兩點終點法（twopointendassay）一、終點法A單試劑一點終點法B雙試劑一點終點法（一）一點終點法（onepointendassay）一、終點法（二）兩點終點法（twopointendassay）常應(yīng)用于具有雙試劑的測定項目中。第二試劑（R2）加入前，選擇某個時間點作為第一個測光點，此時的吸光度相當(dāng)于樣本空白（Am）。加入第二試劑后待測物開始反應(yīng)，并經(jīng)過一定時間反應(yīng)達(dá)到平衡，此時選擇第二個測光點測定吸光度（An），兩個測光點吸光度之差用于計算待測物濃度，稱為兩點終點法。

一、終點法A單試劑二點終點法B雙試劑二點終點法（二）兩點終點法（twopointendassay）一、終點法（二）兩點終點法（twopointendassay）該法能有效地消除溶血、黃疸和脂濁等樣品本身光吸收造成的干擾。血紅蛋白、膽紅素和脂濁的光吸收曲線二、固定時間法

固定時間法（fixed-timeassay）

指在時間-吸光度曲線上選擇兩個計算點，此兩點既非反應(yīng)初始吸光度亦非終點吸光度，這兩點的吸光度差值用于結(jié)果計算。

二、固定時間法固定時間法（fixed-timeassay）固定時間法的時間-吸光度曲線二、固定時間法在自動生化分析儀上，苦味酸法測定肌酐、溴甲酚氯法測定血清白蛋白采用的即是固定時間法。

三、連續(xù)監(jiān)測法

連續(xù)監(jiān)測法（continuousmonitoringassay）又稱速率法（rateassay），是在測定酶活性或用酶法測定代謝產(chǎn)物時，連續(xù)選取時間-吸光度曲線的線性期內(nèi)4個以上測光點測定吸光度，計算單位時間吸光度變化值ΔA/min，此即為酶促反應(yīng)的初速度，其大小與被測酶活性成正比。三、連續(xù)監(jiān)測法A單試劑連續(xù)監(jiān)測法B雙試劑連續(xù)監(jiān)測法連續(xù)監(jiān)測法反應(yīng)曲線三、連續(xù)監(jiān)測法第一試劑與樣本混合第二試劑與樣本混合預(yù)孵育期延滯期線性期非線性期速率法終點法A1A2①②③④⑤⑥四、比濁法比濁法（turbidimetricAssay）是通過測定微粒性物質(zhì)對光的散射或透射強度來測定物質(zhì)的濃度，主要用于測定能形成懸浮體的顆粒物質(zhì)。比濁法也采用終點法尤其是兩點終點法進(jìn)行檢測。比濁法可分為化學(xué)比濁法和免疫比濁法。四、比濁法1．化學(xué)比濁法

基本原理：待測物在一定條件下反應(yīng)形成不可溶的微細(xì)沉淀（微粒），這些微粒的存在使透過的光減弱，通過檢測透光強度，計算出樣本中物質(zhì)的濃度。四、比濁法2．免疫比濁法

基本原理：抗原與抗體發(fā)生反應(yīng)形成的可溶性免疫復(fù)合物，通過某種方法使其自液相析出，形成微粒，這些微粒具有對光的反射和折射能力，通過檢測散射光或透射光的強度，計算樣本中待測物的濃度。四、比濁法

2．免疫比濁法根據(jù)測定的光線不同分為：免疫散射比濁法（Immunescatterturbidimeter）、免疫透射比濁法（immunitytransmissionturbidimeter），在自動生化分析儀上只能采用免疫透射比濁法。四、比濁法連續(xù)監(jiān)測法的時間-吸光度曲線第三節(jié)自動生化分析儀的參數(shù)設(shè)置自動生化分析儀在測定分析前，需要設(shè)置各項目的分析參數(shù)（analysisparameters），如樣本和試劑用量、溫度選擇、反應(yīng)時間、測定波長、檢測方法等。分為：基本分析參數(shù)（也稱通用分析參數(shù)）和特殊分析參數(shù)（或稱質(zhì)量保證參數(shù)）。一、基本分析參數(shù)

1．項目名稱：項目名稱是測定項目標(biāo)示符，常以項目的英文縮寫來表示。

2．樣本量與試劑量：樣本量、第一試劑和第二試劑量，需按照各種分析儀的可加樣／試劑體積范圍、反應(yīng)液總體積范圍以及試劑樣本體積比來確定。樣本量和試劑量由樣本體積分?jǐn)?shù)（SampleVolumeFraction，SVF）來決定。

一、基本分析參數(shù)3．試劑的選擇：反應(yīng)過程中一般加入一種或兩種試劑，分別稱為單試劑法和雙試劑法。（1）單試劑：把某種生化反應(yīng)所需要的全部試劑科學(xué)地混合在一起，組合成一種試劑。（2）雙試劑：將某些生化檢測項目所用到的試劑按照用途科學(xué)地分成兩類，分別配成兩種試劑（R1、R2）。一、基本分析參數(shù)

4．溫度的選擇：生化分析儀通常有37℃，部分還有30℃和25℃，一般將溫度設(shè)定在37℃。

5．分析方法選擇：根據(jù)試劑說明書選擇檢驗項目的分析方法為終點法或連續(xù)監(jiān)測法。

6．測定時間選擇：（1）終點法測定時間的選擇要充分考慮到干擾問題。（2）連續(xù)監(jiān)測法需要設(shè)置延遲時間和監(jiān)測時間。一、基本分析參數(shù)102

7.波長的選擇

（1）波長大小的選擇測定波長的選擇要兼顧待測物和干擾物，使待測物在該波長下光吸收最大，同時使常見的干擾物在該波長下光吸收最小。（2）單波長和雙波長的選擇分析儀可設(shè)置單波長法或雙波長法。雙波長法即采用兩個不同的波長即測量波長（又叫主波長，primarywavelength）和參比波長（又叫次波長，secondwavelength）同時測定。二、特殊分析參數(shù)設(shè)置1．試劑吸光度檢查（1）試劑空白吸光度：是檢查試劑質(zhì)量的指標(biāo)之一。每種試劑本身有一定吸光度（AB），需在分析儀上設(shè)定AB的范圍，超出時儀器會報警，提示試劑變質(zhì)。二、特殊分析參數(shù)設(shè)置（2）試劑空白速率（Rateofreagentblank）：在反應(yīng)溫度下，某些試劑于檢測過程的短時間內(nèi)可能發(fā)生較為明顯的自身分解等變化，使測定結(jié)果偏高或偏低，設(shè)置此參數(shù)便能在待測物反應(yīng)的吸光度變化速率中減去試劑空白速率，從而消除或減少這類誤差。二、特殊分析參數(shù)設(shè)置2．酶活性測定準(zhǔn)確度的監(jiān)測（1）線性檢查：用于連續(xù)監(jiān)測法，設(shè)定一個非線性度對監(jiān)測時間進(jìn)行線性判斷。通過將監(jiān)測時間內(nèi)的吸光度值進(jìn)行線性回歸，計算各點的方差，根據(jù)方差值的大小來判斷該監(jiān)測時間是否處于線性期。二、特殊分析參數(shù)設(shè)置（2）彈性速率設(shè)置：在酶活性測定中，當(dāng)酶活性太高，在監(jiān)測時間內(nèi)已不呈線性反應(yīng)時，有些儀器具有彈性速率功能可設(shè)置，即選擇監(jiān)測時間前的線性段吸光度值計算結(jié)果，使酶活性測定的線性范圍得以擴(kuò)大。二、特殊分析參數(shù)設(shè)置（3）底物消耗限值：在連續(xù)監(jiān)測法的測定項目中，可設(shè)置化學(xué)反應(yīng)后吸光度升高（正反應(yīng)）或下降（負(fù)反應(yīng)）的限值。超過此限值說明酶反應(yīng)的底物消耗過多，已不足以維持底物的零級反應(yīng)，則該檢測結(jié)果不準(zhǔn)確，儀器能自動提示。二、特殊分析參數(shù)設(shè)置3．樣本性狀監(jiān)測

樣本的溶血、脂濁、黃疸等會對測定結(jié)果產(chǎn)生干擾，根據(jù)各自的光譜吸收特性，用雙波長測定樣本在600nm/570nm、700nm/660nm和505nm/480nm吸光度比值來分別判斷樣本溶血、脂濁和黃疸程度，并可在檢驗報告單中顯示這些信息。二、特殊分析參數(shù)設(shè)置4．線性范圍的選擇

只有當(dāng)反應(yīng)吸光度處于線性區(qū)間時，檢測結(jié)果才與吸光度變化成正比，因此需設(shè)定恰當(dāng)?shù)木€性范圍。設(shè)置線性范圍后，檢測結(jié)果若超過此范圍，分析儀將提示，且多數(shù)會自動將樣本減量或增量重新測定。第四節(jié)檢測系統(tǒng)的校準(zhǔn)和性能評價

測定一個檢驗項目除了涉及自動生化分析儀，還涉及儀器所使用的試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品和檢測程序等，如有手工操作步驟，還應(yīng)包括操作人員，這些要素組成的分析測定系統(tǒng)稱為檢測系統(tǒng)（testingsystem）。一、檢測系統(tǒng)的校準(zhǔn)

1．校準(zhǔn)的定義

校準(zhǔn)（calibration）也稱定標(biāo)，是指在規(guī)定條件下，為確定測量儀器或測量系統(tǒng)所指示的值、實物量具或參考物質(zhì)所代表的值與相對應(yīng)的由標(biāo)準(zhǔn)所復(fù)現(xiàn)的量值之間關(guān)系的一組操作。一、檢測系統(tǒng)的校準(zhǔn)

2．校準(zhǔn)方法

如果實驗室采用的是標(biāo)準(zhǔn)檢測系統(tǒng)，其校準(zhǔn)品和校準(zhǔn)方法由廠商提供。如果是自建的檢測系統(tǒng)必須建立校準(zhǔn)方法，包括：①選擇合適的校準(zhǔn)品及校準(zhǔn)品的數(shù)量、類型和濃度。②確定校準(zhǔn)驗證的頻度。一、檢測系統(tǒng)的校準(zhǔn)

3．校準(zhǔn)品

校準(zhǔn)品（Calibration

materials）是含有已知量的待測物，用以校準(zhǔn)檢測系統(tǒng)的測定值。它與該方法及試劑、儀器相關(guān)聯(lián)。校準(zhǔn)品的作用是為了給檢測結(jié)果賦值，并減少或消除儀器、試劑等造成的系統(tǒng)誤差。一、檢測系統(tǒng)的校準(zhǔn)4．酶活性測定的校準(zhǔn)

以往臨床上血清酶的測定廣泛使用理論K值或?qū)崪yK值計算酶活性。但各實驗室采用的檢測系統(tǒng)不同，使酶活性的測定出現(xiàn)明顯室間變異。解決方案：①推薦統(tǒng)一的測定方法即標(biāo)準(zhǔn)檢測系統(tǒng)；②用校準(zhǔn)品對各檢測系統(tǒng)進(jìn)行統(tǒng)一校準(zhǔn)。二、檢測系統(tǒng)主要的性能指標(biāo)1．準(zhǔn)確度和精密度2．分析速度

指1小時內(nèi)完成的測試數(shù)（所有已測定樣本的項目數(shù)之和），用tests/h來表示。（1）加樣周期（samplingcycle）（2）測試循環(huán)3．實用性①檢測能力；②便捷性；③檢測成本。第五節(jié)自動生化分析儀的操作流程一、儀器準(zhǔn)備

保證穩(wěn)定的電壓，環(huán)境溫度在18～25℃，實驗用水一般要達(dá)到II級純水，酶活性測定和電解質(zhì)分析等應(yīng)選用I級純水。開機(jī)前：操作人員首先檢查實驗用水、清潔液、稀釋液等是否足量，盛廢液的容器是否騰空。一、儀器準(zhǔn)備

開機(jī)后：儀器進(jìn)行自檢，通過儀器自帶的多個傳感器檢測加樣針、試劑針、比色杯、攪拌棒、沖洗臺的位置和運動是否正常，加樣針、試劑針是否需要特別清潔處理。審查每種試劑的測試數(shù)是否足夠滿足當(dāng)天使用。二、室內(nèi)質(zhì)控分析室內(nèi)質(zhì)控（internalqualitycontrol，IQC）是各實驗室為了監(jiān)測和評價本室工作質(zhì)量，以決定常規(guī)檢驗報告能否發(fā)出所采取的一系列檢查、控制手段，主要目的是檢測和控制本實驗室常規(guī)工作的精密度，以提高本實驗室常規(guī)工作中批間和日間樣本檢測結(jié)果的一致性。二、室內(nèi)質(zhì)控分析1．設(shè)定均值（）和標(biāo)準(zhǔn)差（s）（1）質(zhì)控圖暫定均值和標(biāo)準(zhǔn)差的建立（2）常用均值和標(biāo)準(zhǔn)差的建立以最初計算暫定均值和標(biāo)準(zhǔn)差的質(zhì)控數(shù)據(jù)和3～5個月在控數(shù)據(jù)匯集的所有數(shù)據(jù)累積計算結(jié)果作為質(zhì)控品有效期內(nèi)的常用均值和標(biāo)準(zhǔn)差，并以此作為該批次質(zhì)控品的室內(nèi)質(zhì)控圖的均值和標(biāo)準(zhǔn)差。二、室內(nèi)質(zhì)控分析

2．失控的處理程序操作失誤，試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品失效，儀器性能不良，以及采用太小的質(zhì)控限范圍和不恰當(dāng)?shù)馁|(zhì)控規(guī)則等等，都將導(dǎo)致某批次質(zhì)控品失控。操作人員應(yīng)記錄失控結(jié)果和違背的質(zhì)控規(guī)則，然后分析和查找失控原因。二、室內(nèi)質(zhì)控分析分析失控原因及其處理的步驟為：①重新測定同一質(zhì)控品，能查出人為誤差和偶然誤差。認(rèn)真、規(guī)范操作后結(jié)果在控，說明為這一類誤差。②新開一瓶質(zhì)控品重測失控項目，如果正常，說明原來那瓶可能過期，或保存不當(dāng)變質(zhì)或被污染。二、室內(nèi)質(zhì)控分析③進(jìn)行儀器維護(hù)或更換試劑，重測失控項目，如果在控，說明是試劑質(zhì)量問題。要注意有時候僅僅是試劑位置放錯。④用新的校準(zhǔn)品分析儀，再測失控項目，排除校準(zhǔn)品的原因。⑤若所有的工作都做了，仍然失控，可能是更復(fù)雜的原因，只能聯(lián)系儀器廠商提供技術(shù)支援。

二、室內(nèi)質(zhì)控分析1253．特殊質(zhì)控項目的處理方法

某些不是每天開展的項目，20次測定完成之前有無失控難以發(fā)現(xiàn)，需要有一個能及時反映檢測過程是否在控的方法。

“即刻性”質(zhì)控法即Crubbs氏法：連續(xù)測定三次，計算均值和標(biāo)準(zhǔn)差，再計算上限值=（最大值－）/s和下限=（－最小值）/s，二者在規(guī)定的范圍內(nèi)即判斷在控，如果發(fā)現(xiàn)失控，應(yīng)去掉該數(shù)據(jù)，再重新測定。三、樣本檢測

1．項目錄入直接上機(jī)，生化分析儀安裝有讀碼器，通過條形碼所攜帶的患者信息自動識別臨床醫(yī)生申請的檢驗項目。

2．樣本上機(jī)及測定將樣本按編號順序依次插入樣本架，如果采用條形碼可隨意放置，但注意條形碼不能遮蔽和污染。三、樣本檢測

3．急診檢驗

實驗室工作人員對申請單或樣品管上標(biāo)記有“緊急”或“急”字樣的樣本應(yīng)在核收、登記、檢驗和報告的各個環(huán)節(jié)進(jìn)行優(yōu)先處理，盡可能縮短樣本周轉(zhuǎn)時間（turnaroundtime，TAT），盡快發(fā)出檢驗報告，并及時通知臨床醫(yī)護(hù)人員領(lǐng)取報告。三、樣本檢測

4．過程監(jiān)控

在分析儀運行過程中，隨時關(guān)注儀器狀態(tài)，注意有沒有出現(xiàn)報警、突然中斷檢測等情況。熟悉儀器各種警示符號的含義與作用，利用警示符提高發(fā)現(xiàn)問題和解決問題的效率。四、檢驗報告審核審核的內(nèi)容包括：1．內(nèi)容的完整性被檢者和申請者信息資料是否完整，有無漏項和錯檢。2．?dāng)?shù)據(jù)的有效性生化分析儀均以數(shù)據(jù)報告檢驗結(jié)果，但不是所有的數(shù)據(jù)都是合理有效的。四、檢驗報告審核3．結(jié)果的符合性審查檢驗結(jié)果與申請目的和臨床診斷是否相符，與被檢者以往的檢驗結(jié)果是否吻合，有協(xié)同性的指標(biāo)之間（如總膽紅素和直接膽紅素）、同類指標(biāo)之間（如LDL-C與ApoB100）結(jié)果是否一致。四、檢驗報告審核4．結(jié)果的正確性

系統(tǒng)一般設(shè)置有高于（↑）或低于（↓）參考區(qū)間的標(biāo)識，對明顯異常的結(jié)果，要查找本項目的歷史記錄，或與本項目相關(guān)的其他檢驗項目的檢測結(jié)果，判斷是否相符。5．報告的時效性

注意檢驗報告的時效性。五、檢驗危急值

危急值（criticalvalues）是指某項或某類檢驗結(jié)果異常升高或降低，一旦出現(xiàn)這樣的檢驗結(jié)果，表明患者可能正處于有生命危險的邊緣狀態(tài)，需要立刻報告給臨床醫(yī)生，以便其立刻采取相應(yīng)的治療措施，否則將會因為錯過最佳的治療時機(jī)而使患者的生命安全受到威脅。五、檢驗危急值1．危急值項目

由于