色譜分析綜合體一．選擇題1．在色譜分析中，用于定量的參數(shù)是(B)A保留時間 且調整保留值 C峰面積D半峰寬2．塔板理論不能用于 (D)A塔板數(shù)計算 B塔板高度計算C解釋色譜流出曲線的形狀-D解釋色譜流出曲線的寬度與哪些因素有關3．在氣-固色譜分析中,色譜柱內裝入的固定相為 (D)A一般固體物質 B載體C載體+固定液 工固體吸附劑4.當載氣線速越小，范式方程中，分子擴散項B越大，所以應選以下氣體中哪一種TOC\o"1-5"\h\z作載氣最有利？ (D)\o"CurrentDocument"AH2 BHeCAr DN25．試指出下述說法中,哪一種是錯誤的? (C)A根據(jù)色譜峰的保留時間可以進行定性分析B根據(jù)色譜峰的面積可以進行定量分析C色譜圖上峰的個數(shù)一定等于試樣中的組分數(shù)D色譜峰的區(qū)域寬度表達了組分在柱中的運動情況6．為測定某組分的保留指數(shù)，氣相色譜法一般采取的基準物是：(C)A苯 B正庚烷 C正構烷烴D正丁烷和丁二烯7．試指出以下說法中，哪一個不正確？氣相色譜法常用的載氣是〔C〕AN2 AN2 BH2CO2DHe8．試指出以下說法中，哪一個是錯誤的？ 〔A〕A固定液是氣相色譜法固定相 BN2、H2等是氣相色譜流動相C氣相色譜法主要用來別離沸點低，熱穩(wěn)定性好的物質D氣相色譜法是一個別離效能高，分析速度快的分析方法在氣-液色譜法中,首先流出色譜柱的組分是 (A)A溶解能力小B吸附能力小C溶解能力大 D吸附能力大10．根據(jù)范第姆特議程式，指出下面哪種說法是正確的？ 〔A〕A最正確流速時，塔板高度最小B最正確流速時，塔板高度最大C最正確塔板高度時，流速最小D最正確塔板高度時，流速最大二．填空題.按流動相的物態(tài)可將色譜法分為氣相色譜法和 液相色譜法前者的流動相的氣體—，后者的流動相為液體。.氣相色譜法多用高沸點的有機—化合物涂漬在惰性載體上作為固定相，一般只要在450_℃以下，有L5至"Kpa的蒸氣壓且穩(wěn)定性好的有機和無機_化合物都可用氣相色譜法進行別離。.氣相色譜儀由如下五個系統(tǒng)構成：氣路系統(tǒng)、進樣系統(tǒng)、別離系統(tǒng)、溫控系統(tǒng)和檢測記錄系統(tǒng)。.氣相色譜常用的檢測器有熱導檢測器,氫火焰檢測器,電子捕獲檢測器和火焰光度檢測器。三、簡答題1、組分A、B在某氣液色譜柱上的分配系數(shù)分別為495和467。試問在別離時哪個組分先流出色譜柱。答：根據(jù)分配系數(shù)的定義：分配系數(shù)小的組分先流出色譜柱，因此B先流出色譜柱。2、為什么說別離度R可以作為色譜柱的總別離效能指標?答：由R=tR(2)tR(1) =2(tR(2)tr(i))1(w +w) ?(1)+Wb(2)2 b(1) b(2)及丁 t, _t、 「r _1可知R值越大，相鄰兩組分別離R=eff~? R(2)R(1) =eff~? ~~TA4 t 4r越好。而R值的大小則與兩組分保留值和峰的寬度有關。對于某一色譜柱來說，兩組分保留值差異的大小主要取決于固定液的熱力學性質，反映了柱選擇性的好

壞；而色譜峰的寬窄則主要由色譜過程的動力學因素決定，反映了柱效能的高低。因此R實際上綜合考慮了色譜過程的熱力學和動力學性質，故可將其作為色譜柱的總別離效能指標。3、氣相色譜定性的依據(jù)是什么？主要有哪些定性方法？答：不同組分由于其結構不同，與固定相的作用同，因而流出柱的時間不相同。4、如何選擇氣液色譜固定液？答：依據(jù)相似相溶原則選擇固定液。5、氣相色譜定量的依據(jù)是什么？為么要引入定量校正因子？有哪些主要的定量方法？各適于什么情況？答：色譜定量的依據(jù)是：在一定的色譜條件下，進入檢測器的被測組分的質量山1與檢測器產生的響應信號〔峰面積々或峰高4〕成正比，即：mifiAi引入定量校正因子的原因：因為\的大小和組分的性質有關，因此，同一檢測器對不同組分具有不同的響應值，故相同質量的不同物質通過檢測器時，產生的峰面積不等，因而不能直接應用峰面積計算組分的含量。為此，引入“定量校正因子”以校正峰面積，使之能真實反映組分含量。歸一化法：應用該方法的前提條件是試樣中各組分必須全部流出色譜柱，并在色譜圖上都出現(xiàn)色譜峰。外標法：即所謂校準曲線法〔A-c曲線〕。外標法簡便，不需要校正因子，但進樣量要求十分準確，操作條件也需嚴格控制。適用于日?？刂品治龊痛罅客悩悠返姆治觥葮朔▽⒁欢康募兾镔|作為內標物，加入到準確稱取的試樣中，根據(jù)被測物和內標物的質量及其在色譜圖上相應的峰面積比，求出某組分的含量。內標法準確，操作條件要求不嚴。四、計算題1、在一根長3m的色譜柱上，分析某試樣時，得兩個組分的調整保留時間分別為13min及16min,后者的峰底寬度為1min,計算：1〕該色譜柱的有效塔板數(shù)；2〕兩組分的相對保留值；3〕如欲使兩組分的別離度R=L5,

解：n度R=L5,

解：neff需要有效塔板數(shù)為多少？此時應使用多長的色譜柱？r2,1Lt—5.54(J^)2Heff W1,2t 16R(2) 1.23t 1316(W^r-)2 16 (4)2 4096b假設使R=1.假設使R=1.R5（；柱效能為rn16R2L^）161.52eff r1此時對應的柱2,1長為：1.231102940963.0102940963.0 0.75(m)2、丙烯和丁烯的混合物進入氣相色譜柱后測得：空氣、丙烯、丁烯保留時間分別為0.5,3.5,4.8min,其相應的峰寬分別為0.2,0.8,1.0min。計算〔1〕丁烯在這個柱上的分配比是多少？〔2〕丙烯和丁烯的別離度是多少？解：?mt' 解：?mt' 4.8-0.5k二一「二—二 二8.6m t0 0.52(t —t) 2(4.8—3.5)R(2) R(TTW+Wb(2) b(1)1.0+0.8=1.443、化合物A與正二十四烷及正二十五烷相混合注入色譜柱試驗，測得的調整保留時間為：A；n—C24H50；n—C25H52。計算化合物A的保留指數(shù)〔IA〕。lgt' —lgt'I:100X(n+sR(i)―^^nr)i lgt, -lgt'R(n+1) R(n)=100X[24+=2445.7lg10.2=100X[24+=2445.74、對只含有乙醇、正庚烷、苯和乙酸乙酯的某化合物進行色譜分析,其測定數(shù)計算各組分的質量分數(shù)。解：用歸一化法m ~ m ?w=ix100%= i x100%im m+m+?一+m+?一+m A^f A A^f A1-f1+A2-f2+，：?+A-―…+A-f'x100%A,-f.'￡'A；fix100%i=1彳A-f'=5.0x0.64+9.0X0.7+4.0x0.78+7.0x0.79=1815ii1w乙醇Ajw乙醇AjfEa-fiiX100%=5.0X0.64X100%=17.6%18.15同理正庚烷、苯和乙酸乙酯的質量分i=1數(shù)分別為34.7%、17.2%、30.5%。0g環(huán)氧丙烷試樣，混合后進行色譜分析，測得甲醇和水的峰面積分別為164mm2和186mm2,校正因子分別為0.59和0.56。計算環(huán)氧丙烷中水的質量分數(shù)。解：m=

解：m=

水f'?A―水 水f勺?AXm甲甲f.A… 0.56x186 ,水入水xm x0.0573m f,-A甲_0.59x164 inn1小w（％）

水—―x100=— ^X100=xw（％）

水水 甲 甲m m 5.8690試試1、液相色譜有幾種類型?它們的保留機理是什么?在這些類型的應用中,最適宜別離的物質是什么?解:液相色譜有以下幾種類型:液-液分配色譜;液-固吸附色譜;化學鍵合色譜;離子交換色譜;離子對色譜;空間排阻色譜等.液-固吸附色譜是通過組分在兩相間的多次吸附與解吸平衡實現(xiàn)別離的.最適宜別離的物質為中等相對分子質量的油溶性試樣，但凡能夠用薄層色譜別離的物質均可用此法別離。其中;液-液分配色譜的保留機理是通過組分在固定相和流動相間的多次分配進行別離的。可以別離各種無機、有機化合物。2、在ODS固定相上，以甲醇為流動相，某組分的分配容量，如以乙腈為流動

相，其k增加還是減少？為什么？解：據(jù)題意為反相色譜體系。k值增加，在反相色譜體系中，流動相由甲醇變?yōu)橐译?，溶劑極性參數(shù)由變?yōu)椋黾恿耍M分在流動相中的溶解度反而減小，所以k值增大。由增大為。3、在反相色譜中，流動相從40%〔V/V〕甲醇一水改變?yōu)?0%〔V/V〕甲醇一

水，問組分的調整保留值將改變多少？為什么？〔P'甲醇，P’水〕提示：對于由溶劑A和B組成的二元混合溶劑，其極性可表示為

Pab'=aPa'bPb'式中a和b分別為溶劑A和B在混合溶劑中的分數(shù)。解：在40%配比時，混合溶劑的極性為PI'XX10.2=8.16在60%配比時，混合溶劑的極性為P2'XX10.2=7.14P2’=P2'-P2'=7.14-8.16=-1.02根據(jù)反相色譜體系???在反相色譜中，流動相的極性變弱〔P'由變?yōu)椤常軇姸仍黾?，洗脫能力增加，因而使組分的調整保留時間減少到原來的。4、某色譜體系采用25%三氯甲烷/正己烷為流動相，發(fā)現(xiàn)組分別離不十分理想，想通過改變流動相的選擇性來改善別離選擇性，選用乙醚/正己烷為流動相，問乙醚/正己烷的比例為多少？[P',P’乙醚〕提示：流動相選擇性的改變是通過保持溶劑強度不變時改變流動相組成來實現(xiàn)的，改變前流動相A/B和改變后的流動相A/C的組成有以下關系：解：25%的CHCl3/正己烷與37%乙醚/正己烷的溶劑強度相等，但對樣品的別離選鋒性不同。填空：.氫火焰離子化檢測器和熱導池檢測器分別屬于_質量型__和___濃度__型檢測器。氣相色譜儀的心臟是_色譜柱___。.固定液一般是按照__相似相溶___原理選擇；在用極性固定液別離極性組分時，分子間作用力主要是__誘導力 ，極性愈大，保留時間就愈___長__。3.固定液通常是高沸點的有機化合物，這主要是為了保證固定液在使用溫度下有 較好的熱穩(wěn)定性 ，防止___發(fā)生不可逆的化學反應 。.用于氣液色譜的擔體主要分為 白色擔體___、___紅色擔體___兩類。.與填充柱相比，毛細管色譜柱的相比B較大，有利于實現(xiàn)快速分析。但其柱容量_較小_。.在HPLC儀中，為了克服流動相流經色譜柱時受到的阻力，要安裝.耐高壓的六通閥___。.氣相色譜分析中，載氣僅起輸送作用；而液相色譜分析中，流動相還要直接參加__實際的分配過程__，要想提高高效液相色譜的柱效，最有效的途徑是__使用小粒徑填料_。.欲別離位置異構體化合物，宜采用的高效液相色譜的別離模式是__梯度洗脫___。9、、色譜法中，將填入玻璃管內靜止不動的一相稱為固定相，自上而下運動的一相稱為流動相，裝有固定相 的柱子稱為色譜柱。10、液相色譜檢測器一般可用紫外可見分光光度檢測器 ，熒光檢測器；氣相色譜檢測器可用熱導檢測器 ，氫火焰離子檢測器，電子俘獲檢測器等。色譜學分析基礎：1、色譜定性的方法都有哪些？答、(1)用保留時間定性(2)用相對值保留定性(3)用保留指數(shù)定性(4)用化學反應配合色譜定性(5)用不同類型的檢測器定性⑹色譜和各種光譜或波譜聯(lián)用2、內標法定量分析時，內標物選擇應滿足那些條件？答：①試樣中不含有該物質②與被測組分性質比較接近③不與試樣發(fā)生化學反應④出峰位置應位于被測組分接近，且無組分峰影響氣相色譜6.對載體和固定液的要求分別是什么?答：載體要求:①具有化學惰性②好的熱穩(wěn)定性③有一定的機械強度④有適當?shù)谋韧獗恚獗頍o深溝，以便是固定液成為均勻的薄膜，要有較大的空隙率，以便減小柱壓降。對固定液的要求：應對被別離試樣中的各組分具有不同的溶解能力，較好的熱穩(wěn)定性，并且不與被別離組分發(fā)生不可逆的化學反應。固定液的選擇原則：①“相似相容”原則，②固定液和被別離物分子之間的特殊作用力，③利用混合物固定液④利用協(xié)同效應選擇固定液10．假設一個未知油劑樣品，請設計一種氣象色譜分析方法，并概述分析過程。液相色譜：11、正相HPLC與反相HPLC的主要不同之處什么？各適合別離什么物質？答：正相HPLC是指以親水性的填料做固定相，以疏水性溶劑或混合物做流動相的液相色譜，主要用于別離醇類，類脂代化合物、磷脂類化合物，脂肪酸以及其他化合物。反相HPLC是指以強疏水性的填料作固定相，以可以和水混合的有機溶劑做流動相的液相色譜，主要用于別離生物大分子、鹵化物和肽及蛋白質，含盧芳烴，小分子的核酸、核苷酸、多環(huán)芳烴等；12、何為梯度洗脫？什么情況下采用梯度洗脫？

答：梯度洗脫就是有兩種〔或兩種以上〕不同極性的溶劑，在別離過程中按一定程度連續(xù)的改變，以改變流動相的配比和極性。適合:①具有較寬K范圍的樣品，及所有的組分的色譜峰的K值不能在0.5-20之間②大分子樣品，相對分子質量大于1000的，尤其是生物樣品③樣品中含有高保留時間的干擾成分，在一次分析中如不把他洗脫出去，就會污染色譜柱，并影響下一次分析。④即使在使用等度時也可以使用梯度洗脫選擇流動相的比例。3、液相色譜中最常用的檢測器是什么檢測器，它適合那些物質的檢測？答：最常用的是紫外可見分光光度檢測器，適合在可見或紫外光區(qū)有吸收物質的檢測；4、某組分在ODS柱上，以80%甲醇作流動相時的保留時間為10min,如果用60％甲醇作流動相，組分的保留時間是增加，還是減?。咳绻麑?0％甲醇換成80%異丙醇后，又會怎樣變化呢？并請作出解釋。5、高效液相色譜法的特點答:特點在于高別離性能、高靈敏度、高分析速度、可以自動化運行6、在一定條件下，兩個組分的保留時間分別為和，計算別離度。要到達完全別離，即，W所需要的柱長4能已知x(12.8x(12.8—12.2)0.8533+0.8133A、改變固定相種類 B、改變流動相流速 C、改變流動相配比 D、改變流動相種類14.不是高液相色譜儀中的檢測器是〔〕A、紫外吸收檢測器 B、紅外檢測器 C、差示折光檢測 D、電導檢測器15.高效液相色譜儀與氣相色譜儀比較增加了〔〕A、恒溫箱 B、進樣裝置 C、程序升溫 D、梯度淋洗裝4年12 一8136000.8533R別離度：4年12 一8136000.8533R別離度：0.722xL=1(0.72)x1=4.34m7、在一定條件下，兩個組分的調整保留時間分別為85秒和100秒，要到達完全別離，即R=1.5。計算需要多少塊有效塔板。假設填充柱的塔板高度為0.1cm,柱長是多少？解：rn有效=16R2[r21/(r21—1)]2=16X1.52X(1.18/0.18)2=1547〔塊〕L有效=n有效,H有效=1547X0.1=155cm即柱長為米時，兩組分可以得到完全別離。色譜法是一種別離技術，試樣混合物的別離過程也就是試樣中各組分在稱之為色譜別離柱中的兩相間不斷進行著的分配過程。其中的一相固定不動，稱為固定相；另一相是攜帶試樣混合物流過此固定相的流體〔氣體或液體〕，稱為流動相。色譜法：當流動相中攜帶的混合物流經固定相時，其與固定相發(fā)生相互作用。由于混合物中各組分在性質和結構上的差異，與固定相之間產生的作用力的大小、強弱不同，隨著流動相的移動，混合物在兩相間經過反復多次的分配平衡，使得各組分被固定相保留的時間不同，從而按一定次序由固定相中流出。一、單項選擇題.在液相色譜法中，按別離原理分類，液固色譜法屬于〔〕。A、分配色譜法 B、排阻色譜法C、離子交換色譜法 D、吸附色譜法.在高效液相色譜流程中，試樣混合物在〔〕中被別離。A、檢測器 B、記錄器C、色譜柱 D、進樣器.液相色譜流動相過濾必須使用何種粒徑的過濾膜？A、0.5um.在液相色譜中，為了改變色譜柱的選擇性，可以進行如下哪些操作？A、改變流動相的種類或柱子B、改變固定相的種類或柱長C、改變固定相的種類和流動相的種類 D、改變填料的粒度和柱長.一般評價烷基鍵合相色譜柱時所用的流動相為〔〕A、甲醇/水〔83/17〕B、甲醇/水〔57/43〕C、正庚烷/異丙醇〔93/7〕D、乙腈/水〔〕.以下用于高效液相色譜的檢測器，〔〕檢測器不能使用梯度洗脫。A、紫外檢測器 B、熒光檢測器C、蒸發(fā)光散射檢測器D、示差折光檢測器.在高效液相色譜中，色譜柱的長度一般在〔〕范圍內。A、10?30cm B、20?50mC、1?2m D、2?5m.在液相色譜中，某組分的保留值大小實際反映了哪些部分的分子間作用力〔 〕A、組分與流動相B、組分與固定相C、組分與流動相和固定相D、組分與組分.在液相色譜中，為了改變柱子的選擇性，可以進行〔〕的操作A、改變柱長 B、改變填料粒度 C、改變流動相或固定相種類D、改變流動相的流速.液相色譜中通用型檢測器是〔〕A、紫外吸收檢測器 B、示差折光檢測器C、熱導池檢測器 D、氫焰檢測器.在環(huán)保分析中，常常要監(jiān)測水中多環(huán)芳烴，如用高效液相色譜分析，應選用下述哪種檢波器A、熒光檢測器 B、示差折光檢測器C、電導檢測器 D、吸收檢測器.在液相色譜法中，提高柱效最有效的途徑是〔〕A、提高柱溫 B、降低板高 C、降低流動相流速 D、減小填料粒度.在液相色譜中，不會顯著影響別離效果的是〔b〕.在高效液相色譜儀中保證流動相以穩(wěn)定的速度流過色譜柱的部件是〔〕A、貯液器 B、輸液泵C、檢測器 口、溫控裝置.高效液相色譜、原子吸收分析用標準溶液的配制一般使用〔〕水A.國標規(guī)定的一級、二級去離子水B.國標規(guī)定的三級水C.不含有機物的蒸餾水 D.無鉛（無重金屬）水.高效液相色譜儀與普通紫外一可見分光光度計完全不同的部件是］a〕A、流通池B、光源C、分光系統(tǒng) D、檢測系統(tǒng).以下哪種是高效液相色譜儀的通用檢測器A、紫外檢測器B、熒光檢測器C、安培檢測器 D、蒸發(fā)光散射檢測器.高效液相色譜儀中高壓輸液系統(tǒng)不包括A、貯液器 B、高壓輸液泵C、過濾器 D、梯度洗脫裝置E、進樣器二、判斷題：.液相色譜分析時，增大流動相流速有利于提高柱效能。x.高效液相色譜流動相過濾效果不好，可引起色譜柱堵塞。v3.高效液相色譜分析的應用范圍比氣相色譜分析的大。v4.反相鍵合相色譜柱長期不用時必須保證柱內充滿甲醇流動相。5.高效液相色譜分析中，使用示差折光檢測器時，可以進行梯度洗脫。6.在液相色譜法中，提高柱效最有效的途徑是減小填料粒度。7.在液相色譜中，范第姆特方程中的渦流擴散項對柱效的影響可以忽略。8.由于高效液相色譜流動相系統(tǒng)的壓力非常高，因此只能采取閥進樣。9.高效液相色譜儀的色譜柱可以不用恒溫箱，一般可在室溫下操作。高效液相色譜中，色譜柱前面的預置柱會降低柱效。液相色譜中，化學鍵合固定相的別離機理是典型的液－液分配過程。高效液相色譜分析中，固定相極性大于流動相極性稱為正相色譜法。高效液相色譜分析不能分析沸點高，熱穩(wěn)定性差，相對分子量大于400的有機物。在液相色譜法中，約70－80％的分析任務是由反相鍵合相色譜法來完成的。在高效液相色譜儀使用過程中，所有溶劑在使用前必須脫氣。填充好的色譜柱在安裝到儀器上時是沒有前后方向差異的。保護柱是在安裝在進樣環(huán)與分析柱之間的，對分析柱起保護作用，內裝有與分析柱不同固定相。檢測器、泵和色譜柱是組成高效液相色譜儀的三大關鍵部件。紫外－可見光檢測器是利用某些溶質在受紫外光激發(fā)后，能發(fā)射可見光的性質來進行檢測的。應用光電二極管陣列檢測器可以獲得具有三維空間的立體色譜光譜圖。三、簡答題1.為什么作為高效液相色譜儀的流動相在使用前必須過濾、脫氣？2.高效液相色譜有哪幾種定量方法，其中哪種是比較精確的定量方法，并簡述之。參考答案二、判斷題