標準解讀

《GB/T 27521-2011 豬流感病毒核酸RT-PCR檢測方法》是一項國家標準，該標準規(guī)定了采用逆轉錄聚合酶鏈反應（RT-PCR）技術對豬流感病毒進行核酸檢測的方法。其主要內(nèi)容包括樣品采集、保存與運輸；RNA提??；逆轉錄合成cDNA；以及通過特異性引物和探針對目標片段進行擴增等步驟。

在樣品處理方面，要求采集的樣本應盡快送檢，并且在整個過程中保持低溫環(huán)境以保證病毒核酸的穩(wěn)定性。對于RNA提取過程，則推薦使用商業(yè)化試劑盒按照說明書操作或參照文獻報道的方法執(zhí)行，確保獲得高質量的RNA用于后續(xù)實驗。

關于RT-PCR的具體實施，本標準提供了詳細的指南，包括但不限于選擇合適的逆轉錄酶、優(yōu)化PCR反應條件（如退火溫度、循環(huán)次數(shù)等）、設計具有高度特異性的引物序列等關鍵要素。此外，還強調了陽性對照品的選擇及陰性對照設置的重要性，以確保實驗結果準確可靠。


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....

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  • 2011-11-21 頒布
  • 2012-03-01 實施
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文檔簡介

ICS11220

B41.

中華人民共和國國家標準

GB/T27521—2011

豬流感病毒核酸RT-PCR檢測方法

RT-PCRassayforswineinfluenzavirusnucleicacid

2011-11-21發(fā)布2012-03-01實施

中華人民共和國國家質量監(jiān)督檢驗檢疫總局發(fā)布

中國國家標準化管理委員會

GB/T27521—2011

前言

本標準按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標準由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部提出

。

本標準由全國動物防疫標準化技術委員會歸口

(SAC/TC181)。

本標準起草單位中國農(nóng)業(yè)科學院哈爾濱獸醫(yī)研究所中國檢驗檢疫科學研究院中國獸醫(yī)藥品監(jiān)

:,,

察所

。

本標準主要起草人喬傳玲韓雪清楊煥良劉業(yè)兵陳艷吳紹強陳化蘭林祥梅辛曉光朱中武

:、、、、、、、、、、

王慧煜劉建李建梅琳王伊琴徐彪阮周曦寧宜寶薄清如秦智鋒林志雄

、、、、、、、、、、。

Ⅰ

GB/T27521—2011

豬流感病毒核酸RT-PCR檢測方法

1范圍

本標準規(guī)定了豬流感病毒核酸檢測方法的技術要求

RT-PCR。

本標準規(guī)定的檢測方法適用于檢測豬肺臟組織鼻腔及氣管分泌物和這些采集樣品培養(yǎng)

RT-PCR、

物中的豬流感病毒核酸

。

2縮略語

下列縮略語適用于本文件

。

焦碳酸二乙酯

DEPC:(diethypyrocarbonate)

脫氧核苷酸三磷酸

dNTP:(deoxy-ribonucleosidetriphosphate)

溴化乙錠

EB:(ethidiumbromide)

莫洛尼氏鼠白血病病毒反轉錄酶

M-MLVRT:(moloneymurineleukemiavirusreversetran-

scriptase)

聚合酶鏈式反應

PCR:(polymerasechainreaction)

核糖核酸

RNA:(ribonucleicacid)

酶抑制劑

RNAaseinhibitor:RNA

反轉錄聚合酶鏈式反應

RT-PCR:-(reverse-transcriptionpolymerasechainreaction)

無特定病原體

SPF:(specificpathogenfree)

TaqTaq聚合酶

DNApolymerase:DNA

3儀器

31儀

.PCR。

32臺式低溫高速離心機

.。

33電泳儀

.。

34電泳槽

.。

35冰箱

.。

36凝膠成像系統(tǒng)

.。

37微量移液器

.。

38水浴鍋

.。

4試劑

41提取試劑或其他商品化的提取試劑

.LSTRIzolRNARNA。

42氯仿異丙醇無水乙醇

.、、。

43瓊脂糖凝膠見附錄中

.1.2%,A

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