ICS11220

B41.

中華人民共和國國家標準

GB/T27639—2011

結核病病原菌實時熒光PCR檢測方法

Real-timePCRmethodforthedetectionoftuberculosispathogenicorganisms

2011-12-30發(fā)布2012-04-01實施

中華人民共和國國家質量監(jiān)督檢驗檢疫總局發(fā)布

中國國家標準化管理委員會

GB/T27639—2011

前言

本標準按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標準由全國動物防疫標準化技術委員會歸口

(SAC/TC181)。

本標準起草單位中華人民共和國廣東出入境檢驗檢疫局華中農業(yè)大學中國檢驗檢疫科學研究

:、、

院北京盈九思科技發(fā)展有限公司

、。

本標準主要起草人陳茹劉中勇楊國海郭愛珍曾碧健韓雪清高小博林祥梅吳曉薇

:、、、、、、、、。

Ⅰ

GB/T27639—2011

結核病病原菌實時熒光PCR檢測方法

1范圍

本標準規(guī)定了結核分枝桿菌復合群結核分枝桿菌牛分枝桿菌實時熒光檢測方法的技術要

、、PCR

求和操作規(guī)范

。

本標準適用于快速檢測細菌培養(yǎng)物血樣奶樣痰液組織器官糞便等臨床樣品中結核分枝桿菌

、、、、、

復合群結核分枝桿菌牛分枝桿菌

、、。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件

。,()。

分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法

GB/T6682—2008

實驗室生物安全通用要求

GB19489—2008

3縮略語

下列縮略語適用于本文件

。

值熒光信號量達到設定的閾值時所經歷的循環(huán)數(shù)

Ct:。

脫氧核苷三磷酸

dNTP:deoxyribonucleosidetriphosphate,。

二甲基亞砜

DMSO:dimethylsulfoxide,。

乙二胺四乙酸

EDTA:ethylenediaminetetraaceticacid,。

磷酸鹽緩沖液

PBS:phosphatebuffersolution,。

聚合酶鏈式反應

PCR:polymerasechainreaction,。

酶聚合酶

Taq:TaqDNA。

酶尿嘧啶糖基化酶

UDG:uracilDNAglycosylase,DNA。

4原理

本標準方法采用了探針實時熒光技術原理反應體系中包括一對用于擴增

TaqManPCR。DNA

的引物和一條能與產物特異雜交的熒光標記探針探針的端標記了被稱為報告基團的熒光

,PCR。5’

素端標記了淬滅基團在進行延伸反應時酶的外切酶活性將端熒光基團從探針上

,3’。PCR,Taq5’5’

切割下來使其與淬滅基團分離從而儀器能檢測到端熒光基團所發(fā)出的熒光信號一分子擴

,,5’,PCR

增產物的生成伴隨一分子熒光信號的產生隨著擴增循環(huán)次數(shù)的增加儀器檢測到的熒光信號的累積

。,

反應了擴增產物量的變化

。

本標準提供特異檢測結核分枝桿菌復合群結核分枝桿菌和牛分枝桿菌共四套實時熒光檢測

、PCR

方法見表其中結核分枝桿菌復合群特異的實時熒光方法分別以插入基因

(1)。,PCRIS6110、IS1081

序列為模板設計特異擴增引物與探針結核分枝桿菌牛分枝桿菌特異的實時熒光方法分別以菌