ICS6502001

B16..

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T28982—2012

番茄斑萎病毒PCR檢測(cè)方法

DetectionoftomatospottedwiltvirusbyPCR

2012-12-31發(fā)布2013-06-01實(shí)施

中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局發(fā)布

中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

GB/T28982—2012

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國(guó)植物檢疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)提出并歸口

(SAC/TC271)。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位中華人民共和國(guó)上海出入境檢驗(yàn)檢疫局中華人民共和國(guó)廈門出入境檢驗(yàn)檢疫

:、

局中華人民共和國(guó)北京出入境檢驗(yàn)檢疫局

、。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人于翠楊翠云廖富榮易建平鄧叢良戚龍君

:、、、、、。

Ⅰ

GB/T28982—2012

番茄斑萎病毒PCR檢測(cè)方法

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了番茄斑萎病毒的免疫磁珠和實(shí)時(shí)熒光檢測(cè)方法

RT-PCR、RT-PCRRT-PCR。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于包括種子苗木和無(wú)性繁殖材料的活體植物材料及傳毒介體中攜帶的番茄斑萎病毒

、

的檢測(cè)

。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件

。,()。

進(jìn)出境植物及植物產(chǎn)品檢疫抽樣

SN/T2122

3番茄斑萎病毒基本信息

中文名番茄斑萎病毒

:

英文名

:tomatospottedwiltvirus

縮寫

:TSWV

分類地位布尼亞病毒科番茄斑萎病毒屬Tospovirus

:(Bunyaviridae),()

番茄斑萎病毒其他信息參見附錄

A。

4方法原理

用特異性抗體修飾的磁株吸附待測(cè)樣品中的病毒粒子后經(jīng)高溫裂解釋放出病毒或直接從待

RNA,

測(cè)樣品材料中提取植物總?cè)缓笤谀孓D(zhuǎn)錄酶的作用下合成以為模板再通過(guò)普通

RNA,cDNA,cDNA

或?qū)崟r(shí)熒光進(jìn)行檢測(cè)分析結(jié)果即可明確材料中是否含有病毒核酸成分

RT-PCRRT-PCR。PCR。

5儀器用具及試劑

、

51儀器設(shè)備

.

儀實(shí)時(shí)熒光儀旋轉(zhuǎn)孵育器電泳儀凝膠分析成像系統(tǒng)水浴鍋高速冷凍離心機(jī)高

PCR,PCR,,,,,,

壓滅菌鍋微波爐渦旋振蕩器電子天平感量超低溫冰箱等

,,,(0.001g),(-80℃)。

52用具

.

磁力架可調(diào)式微量移液器無(wú)吸頭無(wú)離心管管研缽等

,,RNase,RNase,PCR,。

53試劑

.

除有特殊說(shuō)明外所有實(shí)驗(yàn)用試劑均為分析純或生化試劑試劑配制見附錄

,。B。

番茄斑萎病毒抗體磁珠具有超順磁性的聚苯乙烯珠子直徑表面標(biāo)記有甲