Chapter4微生物的生長繁殖與遺傳變異第一節(jié)微生物的生長生長：微生物在適宜的環(huán)境條件下，不斷吸收營養(yǎng)物質(zhì)、按照自己的特點代謝。如果同化超過異化作用則表現(xiàn)為原生質(zhì)增加，體積增大，細胞生長。繁殖：任何微生物細胞生長增大是有限度的，生長到一定階段，發(fā)生分裂。對于單細胞生物來說，分裂表現(xiàn)為個體數(shù)目增多，則是繁殖；對多細胞微生物，如果細胞增多而個體數(shù)不增多則仍是生長，只有增加個體數(shù)目才是繁殖。一般講，生長是指個體的生長，包括繁殖。微生物從生長到繁殖的過程稱為發(fā)育。一、細菌的生長曲線：一般來說，細菌的生長速度隨著時間和環(huán)境的改變而迅速改變，在適宜的條件下，細菌大量繁殖，使營養(yǎng)物質(zhì)迅速消耗，而代謝產(chǎn)物、排泄物等有毒物質(zhì)增加、或PH通氣等條件改變、生長速度則隨之下降，然后大量死亡。當少量的單細胞微生物（細菌）不能培養(yǎng)接種于新鮮的培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)時，由于每一個體所處的環(huán)境條件相同，都能充分迅速的生長繁殖、在培養(yǎng)條件不變的情況下，定時取樣計算細胞數(shù)目，以時間為橫坐標，以菌數(shù)對數(shù)為縱坐標制成曲線，稱為細菌的生長曲線。從這以曲線可以看出明顯分為幾個時期。延遲期、對數(shù)生長期、穩(wěn)定生長期和衰亡期（一）、延遲期當細菌被轉(zhuǎn)入一新鮮的液體培養(yǎng)基中后并不立即繁殖，而是需要一段時間來適應新的環(huán)境，最初菌數(shù)并不增加或減少，但它們?nèi)匀徽Ｎ諣I養(yǎng)物質(zhì)，細胞體積隨之增大，原生質(zhì)變得均勻，貯藏物質(zhì)逐漸消失，然后開始繁殖，由慢到快。延遲期在初期階段細胞對外界環(huán)境不敏感，但處于延遲期后期階段，則極為敏感，如對高溫、低溫、高濃度鹽溶液等都是如此。這是因為接種新環(huán)境的細胞經(jīng)短暫的適應后要合成大量的核酸蛋白質(zhì)等以備迅速繁殖之用的結(jié)果。應用：誘變育種延遲期的長短受很多因素限制：1.細菌種類；2.接種量；3.前后培養(yǎng)基成分；4.培養(yǎng)條件。（二）對數(shù)生長期：延遲期末，細菌細胞開始分裂，基質(zhì)中細胞迅速增加，進入對數(shù)生長期。在這一時期，細菌細胞數(shù)量呈幾何級數(shù)增加。細胞生長旺盛、細胞數(shù)量的增加與原生質(zhì)量的增加及菌液混濁度的增加呈正相關。如果以時間為橫坐標，以菌數(shù)為縱坐標作圖，得一直線。因為細胞為一分為二的繁殖，所以菌體的增加也呈幾何倍數(shù)。即：1，21，22，23，24……2n。這里指數(shù)n表示細菌分裂的次數(shù)，單個細胞完成一次分裂所需的時間稱為世代時間（G）各種不同的細菌在不同的條件下的世代時間是不同的。但一種細菌在同一條件下則世代時間相對穩(wěn)定，如果在一定時間t內(nèi)細菌共繁殖了n次，則世代時間G表示為：因此：或t＝nG如果在一對數(shù)生長階段現(xiàn)測得細胞數(shù)為B，t時間后又測得細胞數(shù)為b則有：b＝B?2n取對數(shù)得：lgb=lgB+nlg2得：n=lgb-lbB/lg2∴.n=3.3lgb/B∵G＝t/n∴例：某細菌培養(yǎng)體第一次測得菌數(shù)104/ml，4小時后又測得菌數(shù)為108/ml，求此菌的世代時間及在此世代時間內(nèi)的繁殖代數(shù)。解：因世代時間

T＝4小時＝240分鐘，b＝108/ml，B＝104/ml∴

＝＝18.2分鐘又：n＝t/GG＝18.2∴n＝240/18.2＝13.2代一般細菌細胞世代時間為20～30分鐘，有些短，有些長。由于這一時間代謝旺盛，生長速率快，菌體中細胞形態(tài)化學組成生理特征較為一致，在微生物生產(chǎn)中常用這一時期的細胞作為種子，試驗及研究這也常以這一時期細胞做材料。（三）、最高穩(wěn)定生長期：在一定體積的培養(yǎng)基中，由于營養(yǎng)的限制，細胞不可能按對數(shù)期無限生長，當大量繁殖后，營養(yǎng)被消耗及各種不良環(huán)境開始出現(xiàn)，因此細胞的死亡速率開始增加，繁殖速度開始下降，當繁殖與死亡速率相等時，細胞總數(shù)不再增加，培養(yǎng)液中單位體積的菌數(shù)達到最大值，并維持一定時間，這一時期就是最高穩(wěn)定生長階段。這時培養(yǎng)基中的菌數(shù)為這一條件下所能養(yǎng)活的細菌的最高數(shù)額。特點：1、分裂速度降低；2、細胞內(nèi)貯存物質(zhì)大量積累；3、出現(xiàn)顆粒異集粒、脂肪粒等；4、芽孢細菌在這一階段形成芽孢5、細胞呈現(xiàn)衰亡。（四）、衰亡期最高穩(wěn)定期后，由于營養(yǎng)物質(zhì)缺乏、代謝產(chǎn)物及有毒物質(zhì)大量積累，造成不良環(huán)境條件，細胞生長速率被限制，死亡速率迅速上升，這時時間與菌數(shù)的對數(shù)成反比。即：菌數(shù)呈幾何級數(shù)下降。特點：1、菌體出現(xiàn)多形態(tài)；2、生長曲線急劇下降；3、菌體顆粒更明顯；4、原生質(zhì)中出現(xiàn)液泡；5、細胞常常自溶消亡。但這一時期少數(shù)細菌仍可存活相當常的時間，細胞處于休眠狀態(tài)。應用：

1、延遲期滅菌，選育優(yōu)良品種（因為遺傳保守性差，易發(fā)生變異）

2、作為生產(chǎn)中的菌種種子，以提高產(chǎn)量

3、穩(wěn)定期因積累大量產(chǎn)物、以產(chǎn)物為產(chǎn)品的生產(chǎn)，此時收獲產(chǎn)量高。

4、衰亡期菌體成熟、形成芽孢、孢子、便于保存菌種。二、微生物生長的測量方法：微生物，特別時單細胞微生物個體生長實際上很難測定、實際應用中靠測定整體的生長量。（一）、單細胞微生物數(shù)量的測定1、細胞總數(shù)的測定：1）、涂片染色法：將定量的菌液在玻片上涂布成一定面積、干燥、固定、染色后在顯微鏡下直接計數(shù)，觀察10個以上視野，然后計算出每視野平均個數(shù)，再根據(jù)視野面積計算出總面積中的總菌數(shù)，乃至計算出原始菌液中的菌數(shù)。2）、細菌計數(shù)器顯微鏡觀察法：在特制的細菌計數(shù)器或血球計數(shù)板上進行計數(shù)，取一定量的菌液、置于計數(shù)器載玻片與蓋玻片之間的計數(shù)室內(nèi)。這一計數(shù)室的體積室規(guī)定好的，在顯微鏡下計算一定面積的菌數(shù)，換算成計數(shù)室內(nèi)的細菌數(shù)，再算出原始菌液之菌數(shù)。3）、過濾膜濃縮計算法：對于含菌較少的含菌液，把菌液通過膜的過濾，然后進行染色、計數(shù)，根據(jù)每視野的菌數(shù)及視野面積計算出原液中的含菌數(shù)。4）、比濁法：對于較濃的菌液，由于微生物的生長量與濁度之間又一定關系，利用光電比色計或濁度計迅速測定菌液的濁度，然后在標準曲線上查找出此濁度下的菌數(shù)值。2、活菌數(shù)的測定：1）、稀釋平板培養(yǎng)法：先將菌液做10倍系列稀釋、將最后三個稀釋度的菌液各取一定量與適當?shù)墓腆w培養(yǎng)基混勻后制成固體平板（或在固體平板上涂布），待培養(yǎng)、生長出菌落后，計算菌落數(shù)，求出平均值，然后乘以所稀釋的倍數(shù)，即得到原始菌液的菌數(shù)。2）、最可能計數(shù)（MPN）法：將菌液做10倍系列稀釋，菌數(shù)可以少到無菌、取3～5個，重復將各稀釋度在固體或液體培養(yǎng)基上培養(yǎng)后選取最后3個稀釋度中均生長的管或皿作為數(shù)量指數(shù)，由？？分配表中查出近似值。再乘以水朗指數(shù)的第一個指數(shù)對應的稀釋倍數(shù)即為菌數(shù)。3）、濾膜培養(yǎng)法：將菌種樣品通過帶有許多小孔又不讓細菌流出的微孔濾膜，借助膜的作用將細菌截留和濃縮，再將膜放于固體培養(yǎng)基表面培養(yǎng)，然后類似平板計數(shù)。（二）、生長量的測定：1、直接測定——干重法：測定單位體積培養(yǎng)物中細胞的干重，表示生長量。將菌體離心、洗滌、烘干，稱干重。2、間接測定：

1）、細胞含N量的測定，一般細菌含N量為原生質(zhì)干重的14％，通過獲得純菌體，以凱氏定N法測定。

2）、生理指標法：以代謝作用消耗或產(chǎn)生的物質(zhì)量表示微生物的生長量，如對蛋白質(zhì)沉卵、糖發(fā)酵產(chǎn)酸的產(chǎn)量、對O2的吸收量表示生長量。第二節(jié)微生物的遺傳和變異遺傳：子代生物對其親代性狀的保持或生命在世代間的連續(xù)。變異：凡在遺傳物質(zhì)水平上發(fā)生了改變，從而引起某些相應性狀發(fā)生變化。微生物靠遺傳保持特性的相對穩(wěn)定，靠變異產(chǎn)生新種以適應新環(huán)境。一、微生物遺傳變異的特點：個體小、可直接與環(huán)境中的各種誘變因子作用，易于發(fā)生突變。由于繁殖快、生活周期短，因而發(fā)生的突變性狀見效快、有利與遺傳。由于微生物大多物性繁殖，因而變異后的個體易于保持并持續(xù)其新的特性。二、遺傳的物質(zhì)基礎——DNA性狀的決定：

1、酶、生理性狀即形態(tài)結(jié)構的表現(xiàn)。

2、mRNA：酶及蛋白質(zhì)結(jié)構及性質(zhì)特征的決定。

3、DNA(RNA)：決定mRNA的結(jié)構遺傳密碼。（一）、DNA的分子結(jié)構：

1、基本分子組成：脫氧核糖

2、DNA單鏈：由各種核苷酸、磷酸及堿基連接而成多核苷酸

DNA雙螺旋結(jié)構：兩個方向相反的單鏈分子嚴格地按堿基互補配對原則形成雙鏈。G＝C，A＝T，每個堿基對間的距離為3.4埃，直徑為20埃，但在單鏈分子中個核苷酸的位置是自由決定的。（二）基因：生物體內(nèi)具有自我復制能力的一串功能單位叫基因。是指由特定核苷酸順序的核酸區(qū)段。一個基因一般為1000個左右的核苷酸?；蚩刂聘鞣N蛋白質(zhì)的合成，因而控制遺傳性質(zhì)，而遺傳則并不是傳遞性狀，而是傳遞基因。為DNA的半保留復制。（三）DNA的功能：1、自體催化（自我復制）2、異體催化（控制Pr合成）三：遺傳信息的傳遞DNA序列的多樣性決定了蛋白質(zhì)的多樣性，從而決定了遺傳性狀的多樣性。將DNA的遺傳信息傳遞給蛋白質(zhì)的物質(zhì)是RNA。（一）RNA：○1nRNA○2dRNA○3rRNA結(jié)構A、G、C、U結(jié)構，單鏈結(jié)構（二）遺傳密碼：指mRNA上特定的核苷酸順序，由三個核苷酸構成。一個密碼決定了一種特定的氨基酸，是運載信息的最基本單位。（三）遺傳信息的傳遞過程：轉(zhuǎn)錄和翻譯1、轉(zhuǎn)錄：以DNA為模板，按堿基互補原則在RNA合成酶的催化下，合成mRNA的過程稱為轉(zhuǎn)錄。通過轉(zhuǎn)錄DNA上的遺傳信息轉(zhuǎn)給mRNA，合成后帶遺傳信息的mRNA與蛋白體結(jié)合、構成蛋白質(zhì)合成場所。2、翻譯：以mRNA為模板，在核蛋白體、基蛋白質(zhì)合成酶作用下，按照遺傳密碼確定的（控制的）氨基酸順序指導蛋白質(zhì)的合成。四、遺傳工程遺傳工程又稱基因工程，是通過人工手段，獲得一種生物的遺傳物質(zhì)（DNA）的第一片段，在體外進行切割、重組、形成新的遺傳物質(zhì)后再引入生物細胞中去，使這一遺傳性狀得到表達，從而得到新的生物品種的遺傳學技術。1、基因的分離：1).直接分離：