12121220237214一、試驗?zāi)康模簩W(xué)會運用環(huán)境微生物學(xué)、環(huán)境監(jiān)測和環(huán)境評價等課程的相關(guān)學(xué)問點和試驗技能，結(jié)合環(huán)境評價學(xué)問對所檢測的水樣〔水體〕作綜合分析和評述。通過對相關(guān)學(xué)問點的綜合學(xué)習(xí)和應(yīng)用，進(jìn)一步加深對根底學(xué)問的理解，并強化根本功的訓(xùn)練。二、試驗原理：浮游生物泛指生活于水中而缺乏有效移動力量的漂流生物，其中分有浮游植物及浮游動環(huán)境的變化格外敏感，故在環(huán)境監(jiān)測中，也有重要作用。水中細(xì)菌總數(shù)往往同水體受有機物污染的程度呈正相關(guān)。因此，它是評價水質(zhì)污染程度菌數(shù)少的水樣中并不能排解這些物質(zhì)的污染。本試驗承受標(biāo)準(zhǔn)平皿法對水樣中細(xì)菌作計數(shù)，這是測定水中好氧和兼性厭氧異養(yǎng)細(xì)菌密度的方法1mL水樣在養(yǎng)分瓊脂培育基中，37℃24h培育后所生長的菌落數(shù)。一般規(guī)定，1mL100個。大腸菌群是一群需氧或兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌3724~28h能發(fā)酵中查出大腸菌群的近似值。我國規(guī)定：每升自來水中大腸菌群數(shù)不得超過3個。三、儀器與試劑：6副10支〔10個〔2mlx2個；+蓋玻片；玻璃棒；舊報紙；麻繩；pH試紙；酒精燈；托盤天平；顯微鏡；浮游生物網(wǎng)；采水器；塞氏圓盤；電熱枯燥箱；手提式滅菌鍋3C培育箱等。液；革蘭氏碘液；95％乙醇；番紅(沙黃)染色液四、試驗內(nèi)容及步驟：玻璃器皿的預(yù)備：取62支移液管〔一支1m，一支10m。將培育皿洗凈晾干，挨次排列，1cm，將其分別包裝好。將包裝好的培育皿和移液管進(jìn)展干熱滅菌160~172。取一個錐形瓶，1059ml250ml100ml2g5支試管，分別取5ml3倍濃縮初發(fā)酵培育基，先將小試管加滿，并將剩余培育基參加試管中，再將小試管倒置劃入試管底部，蓋上試管蓋，重復(fù)操作于剩余4支試管。將1010支試管扎緊；用報紙已同樣方法將錐形瓶頂部包裝，以細(xì)繩扎緊。將10支試管與錐形瓶一同進(jìn)展?jié)駸釡缇?21.℃，20mi。培育基的配置：原理：培育異養(yǎng)細(xì)菌最常用的培育基是牛肉膏蛋白胨培育基〔一般培育基。培育基的種類很多，依據(jù)養(yǎng)分物質(zhì)的來源不同，可分為自然培育基、合成培育基和半合成培育基等。鹽。配制格外便利，能充分滿足微生物的養(yǎng)分需要，大多數(shù)微生物都能在此培育基上生長。本試驗配制的培育基就屬此。510mL9mL自來水，蓋上試管塞。用燒杯從冰箱里取一局部乳糖蛋白胨培育基單倍濃縮液和三倍濃縮液1010mL移液管移取10mL單倍濃縮液，先將小支管裝滿后，再將剩余的液體放入試管中，小支管液一并放到試管中，55mL5mL三倍濃縮液，有氣泡，蓋上試管塞。用100mL100mL固體培育基放入三角瓶中，用天平測出2g的瓊脂，放到三角瓶中，用電爐加熱，同時，用玻璃棒不停攪拌，使瓊脂溶解。水樣采集：采水器：使用時留意先夾住出水口橡皮管,再將兩個半圓形上蓋翻開。讓采水器沉入水中,底部入水口則自動開啟。下沉深度應(yīng)在系繩上有所標(biāo)記,當(dāng)沉入所需深度時,即上提系繩,上蓋和下入水口自動關(guān)閉,提出水面后,不要碰及下底,杯口,松開鐵夾,水樣即注入燒杯。浮游生物網(wǎng)：先將開關(guān)關(guān)閉，在水面下至少10cm的位置，來回?fù)u擺幾次，取離水面，翻開開關(guān)，將取出的水樣倒入小燒杯中。面平行。始終留意觀看沉入水中的透亮度盤，當(dāng)它剛好看不見時，登記圓盤在水中的深度，這就是河水的透亮度。pH：用玻璃棒蘸取少量水樣于試紙上，半分鐘后與標(biāo)準(zhǔn)比色卡比照，讀出pH值。浮游生物的鏡檢：物臺上，用物鏡的低倍、中倍、高倍依次檢查。認(rèn)真觀看并比照書本上的圖片，記錄所看到的浮游生物種類和數(shù)量，遇到書上沒有的浮游生物，則將它畫下來。細(xì)菌總數(shù)：菌種分別方法〔連續(xù)稀釋分別法：取出一支2mL的無菌移液管；保持在離火焰1mL9mL1中，移液1吹吸三次，進(jìn)一步將水樣分散、混勻。再11mL9mL自來水23410—4，試管,5中水樣10—5。1537°C24h。稀釋平板計數(shù)法：1ml10-3、10-410-51ml，對號放入編好號的無菌平板中，每個平板放0.2ml1ml0.2ml稀釋菌液放入平板中，這樣簡潔加大同一稀釋度幾個重復(fù)平板間的操作誤差。倒平板：盡快向上述盛有不同稀釋度菌液的平板中倒人溶化后冷卻至45℃左右的培育基約15毫升／平板，置水平位置快速旋動平板，使培育基與菌液混合均勻，而又不使培育基蕩出平板或濺到平板蓋上。待培育基凝固后，將平板倒置于37℃恒溫培育箱中培育。大腸菌落：1〕5mL三倍濃縮乳糖蛋白胨培育液的5〔內(nèi)有倒管，分別參加10mL水樣；于各裝有10mL乳糖蛋白胨培育液的5個試管中〔內(nèi)有倒管，分別參加1mL水樣；再于各裝有10mL乳糖蛋白胨培育液的5個試管中〔內(nèi)有倒管0.1mL15管，三個稀釋度。將各管充分混勻，置于3724h。革蘭氏染色法：1片水滴中，混和均勻后涂成薄片，面積不宜過大。固定在空氣中自然枯燥，使菌體的位置不再移動(也可將玻片置酒精燈火焰高處稍稍加熱以枯燥之，涂抹面應(yīng)向上)。于酒精燈火焰中通過3～4次(以玻片與手接觸面感到略微燙手為度)，使菌體固定于玻片上而不易脫落。固定也可使標(biāo)本簡潔著色。初染放標(biāo)本于水平位置，在上面滴加草酸銨結(jié)晶紫染色液。染色時間1min.染色到達(dá)需要的時間后，傾去染色液，并以水沖洗，至沖下的水無色時為止。1~2min，水洗。脫色滴加95％酒精脫色，將酒精滴至涂片上，靜置約45s后水洗。鏡檢油鏡鏡檢3〕顯微鏡油鏡鏡檢：將聚光鏡提升至最高點，轉(zhuǎn)動轉(zhuǎn)換器，移開高倍鏡，使高倍鏡和油鏡成“八”字形，在標(biāo)本中心滴一小滴香柏油，使油鏡鏡頭浸入香柏油中，微微轉(zhuǎn)動細(xì)調(diào)整器，可見清楚物像，假設(shè)油鏡上升已離開油面還未看清物像的話。需重調(diào)整。此時可從側(cè)面注視，用粗調(diào)整器將鏡筒留神地降下，使油鏡浸在香柏油中，其鏡頭幾乎與標(biāo)本相接。應(yīng)特別留意不能壓在標(biāo)本上，更不能用力過猛否則不僅壓碎玻片，也會損壞鏡頭。用左手向上轉(zhuǎn)動粗調(diào)整器，當(dāng)視野中有模糊的標(biāo)本物像時改用細(xì)調(diào)整器，直到看清物象為止。五．試驗結(jié)果與分析：浮游生物藻類++ 未知浮游生物纖毛蟲++線蟲+水蚤++盤星藻+++絲藻++++不同稀釋度的平均菌落數(shù)不同稀釋度的平均菌落數(shù)次數(shù)兩個稀釋度菌落數(shù)之比細(xì)菌總數(shù)〔CFU/ml〕報告方式〔CFU/ml〕1 2 310-415181710-51410121.43550003.55*10^5比照566大腸菌群結(jié)論依據(jù)實測結(jié)果：校園河水pH=6.5,透亮度=85.20cm=0.852m《地表水環(huán)境質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》ⅠⅠⅡⅢ Ⅳ6～9ⅤpH透亮度/m 15 42.5 1.5 0.5水質(zhì)評價細(xì)菌總數(shù)水質(zhì)評價細(xì)菌總數(shù)/ml極清潔水10-100個清潔水100-1000個不太清潔水1000-10000個不清潔水不清潔水10000-100000個極不清潔水由以上數(shù)據(jù)可得出結(jié)論：依據(jù)地表水標(biāo)準(zhǔn)，蘇州科技學(xué)院石湖校區(qū)河水屬Ⅳ類～Ⅴ類地表水。依據(jù)細(xì)菌總數(shù)測定值以及水質(zhì)評價標(biāo)