實(shí)驗(yàn)2特殊顯微鏡及其使用暗視野顯微鏡相差顯微鏡一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.學(xué)習(xí)暗視野顯微鏡的原理、了解其構(gòu)造2.練習(xí)暗視野顯微鏡的使用二暗視野顯微鏡的原理及構(gòu)造根據(jù)丁達(dá)爾效應(yīng)原理設(shè)計(jì)的一種在黑色背景條件下觀察被檢物體的顯微鏡觀察到明場(chǎng)看不到的極其微小的物體最高分辨率可達(dá)0.004微米暗視野顯微鏡原理2.3成像特點(diǎn)及優(yōu)缺點(diǎn)在暗視野中所觀察到的是被檢物體的衍射光圖像，并非物體本身，所以只能看到物體的存在和運(yùn)動(dòng)，不能辨清物體的細(xì)微結(jié)構(gòu)。但被檢物體為非均質(zhì)時(shí)，并大于1／2波長(zhǎng)，則各級(jí)衍射光線同時(shí)進(jìn)入物鏡，在某種程度上可觀察物體的構(gòu)造。一般暗視野顯微鏡雖看不清物體的細(xì)微結(jié)構(gòu)，但卻可分辨0.004um以上的微粒的存在和運(yùn)動(dòng)，這是普通顯微鏡(最大的分辨力為0.2um)所不具有的特性，可用以觀察活細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和細(xì)胞內(nèi)微粒的運(yùn)動(dòng)等。2.4應(yīng)用：微小粒子、細(xì)菌形態(tài)、細(xì)菌記數(shù)，透明標(biāo)本觀察等。2.5暗場(chǎng)顯微鏡的要求要求載玻片和蓋玻片必須無(wú)疵痕和灰塵物鏡前透鏡必須清潔無(wú)塵載玻片和蓋玻片厚度必須絕對(duì)符合要求自己動(dòng)手制作暗視野顯微鏡

暗視野光擋(左：金屬片或厚卡紙制成;右：透明濾色鏡貼黑紙制成)三、實(shí)驗(yàn)用品1.材料：口腔黏膜上皮細(xì)胞、洋蔥內(nèi)表皮細(xì)胞2.試劑：生理鹽水、蒸餾水3.器材和儀器：載玻片、蓋玻片、顯微鏡、擦鏡紙等四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1、口腔黏膜上皮細(xì)胞和洋蔥內(nèi)表皮細(xì)胞裝片制作2、用暗視野顯微鏡觀察樣品（二）相差顯微鏡

相差顯微鏡（phasecontrastmicroscope）由荷蘭物理學(xué)家澤爾尼克(FritsZernike,1898-1966),于1932年發(fā)明，并因此獲1953年諾貝爾物理獎(jiǎng)。

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.學(xué)習(xí)相差顯微鏡的原理、了解其構(gòu)造2.練習(xí)相差顯微鏡的使用二實(shí)驗(yàn)原理

光波有振幅（亮度）、波長(zhǎng)（顏色）及相位(指在某一時(shí)間上光的波動(dòng)所能達(dá)到的位置)的不同。當(dāng)光通過(guò)物體時(shí)，如波長(zhǎng)和振幅發(fā)生變化，人們的眼睛才能觀察到，這就是普通顯微鏡下能夠觀察到染色標(biāo)本的道理。而活細(xì)胞和未經(jīng)染色的生物標(biāo)本，因細(xì)胞各部微細(xì)結(jié)構(gòu)的折射率和厚度略有不同，光波通過(guò)時(shí)，波長(zhǎng)和振幅并不發(fā)生變化，僅相位有變化(相應(yīng)發(fā)生的差異即相位差)，而這種微小的變化，人眼是無(wú)法加以鑒別的，故在普通顯微鏡下難以觀察到。相差顯微鏡的特殊構(gòu)造與光路相差顯微鏡的特殊構(gòu)造與光路相差顯微鏡的光路相位板安裝在物鏡的后焦面處，相板裝有吸收光線的吸收膜和推遲相位的相位膜。它除能推遲直射光線或衍射光的相位以外，還有吸收光使亮度發(fā)生變化的作用。調(diào)軸望遠(yuǎn)鏡是用來(lái)進(jìn)行合鈾調(diào)節(jié)的。相差顯微鏡在使用時(shí)，聚光鏡下面環(huán)狀光闌的中心與物鏡光軸要完全在一直線上，必需調(diào)節(jié)光闌的亮環(huán)和相板的環(huán)狀圈重合（共軛重合），才能發(fā)揮相差顯微鏡的效能。否則直射光或衍射光的光路紊亂，應(yīng)被吸收的光不能吸收，該推遲相位的光波不能推遲，就失去了相差顯微鏡的作用。（3）合鈾調(diào)整拔出目鏡，插入合鈾望遠(yuǎn)鏡，一邊從望遠(yuǎn)鏡向內(nèi)觀察，并用左手固定其外筒；一邊用右手轉(zhuǎn)動(dòng)望遠(yuǎn)鏡內(nèi)筒使其上升，當(dāng)對(duì)準(zhǔn)焦點(diǎn)就能看到環(huán)狀光闌的亮環(huán)和相板的暗環(huán)，此時(shí)可將望遠(yuǎn)鏡固定住。再升降集光器并調(diào)節(jié)其下的螺旋使亮環(huán)的大小與暗環(huán)一致，然后左右前后調(diào)節(jié)環(huán)狀光闌聚光器上的調(diào)節(jié)鈕，使兩環(huán)完全重合。（4）觀察換回目鏡，按常規(guī)要領(lǐng)進(jìn)行觀察。在更換不同倍率的相差物鏡時(shí)，每一次都要使用相匹配的環(huán)狀光闌。用途用于觀察組織培養(yǎng)中活細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)?；罴?xì)胞無(wú)色透明，一般光鏡下不易分辨細(xì)胞輪廓及其結(jié)構(gòu)，組織培養(yǎng)研究常用的是倒置相差顯微鏡。三、實(shí)驗(yàn)用品1.材料：口腔黏膜上皮細(xì)胞、洋蔥內(nèi)表皮細(xì)胞2.試劑：生理鹽水、蒸餾