專題(zhuāntí)二微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用課題(kètí)3分解纖維素的微生物的分離**第一頁，共38頁。一.基礎(chǔ)知識㈠.纖維素與纖維素酶1.纖維素纖維素是一種(yīzhǒnɡ)由葡萄糖首尾相連而成的高分子化合物，是含量最豐富的多糖類物質(zhì)。第二頁，共38頁。思考：纖維素是地球上含量最豐富的多糖類物質(zhì)(wùzhì)，植物每年產(chǎn)生的纖維素超過70億噸，但卻不會在地球上大量的積累，為什么？纖維素能被土壤中某些微生物分解利用，這是因為它們(tāmen)能夠產(chǎn)生纖維素酶。棉花是自然界中纖維素含量最高的天然(tiānrán)產(chǎn)物。第三頁，共38頁。2.纖維素酶

纖維素酶是一種(yīzhǒnɡ)復(fù)合酶，一般認為它至少包括三種組分，即C1酶(外切酶)、CX酶(內(nèi)切酶)和葡萄糖苷酶，前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖，第三種酶將纖維二糖分解成葡萄糖。纖維二糖C1酶、Cx酶葡萄糖苷酶葡萄糖纖維素一.基礎(chǔ)知識㈠.纖維素與纖維素酶第四頁，共38頁。能分解纖維素的微生物，有各種(ɡèzhǒnɡ)細菌、真菌和少數(shù)放線菌。一.基礎(chǔ)知識㈠.纖維素與纖維素酶3.纖維素的分解(fēnjiě)：第五頁，共38頁。一.基礎(chǔ)知識㈡.纖維素分解(fēnjiě)細菌的篩選：1.方法(fāngfǎ)：剛果紅染色法。第六頁，共38頁。剛果紅可以與纖維素形成紅色復(fù)合物，當纖維素被纖維素酶分解后，紅色復(fù)合物無法形成，出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈，我們可以通過是否產(chǎn)生(chǎnshēng)透明圈來篩選纖維素分解菌。2.原理(yuánlǐ)：一.基礎(chǔ)知識㈡.纖維素分解細菌(xìjūn)的篩選：第七頁，共38頁。該方法可以通過(tōngguò)顏色反應(yīng)直接篩選。一.基礎(chǔ)知識㈡.纖維素分解細菌(xìjūn)的篩選：3.優(yōu)點(yōudiǎn)：第八頁，共38頁。第九頁，共38頁。二.實驗設(shè)計與操作(cāozuò)㈠.實驗設(shè)計：土壤(tǔrǎng)取樣選擇(xuǎnzé)培養(yǎng)梯度稀釋將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上挑選產(chǎn)生透明圈的菌落第十頁，共38頁。①分布(fēnbù)環(huán)境1、土壤(tǔrǎng)取樣：富含纖維素的環(huán)境(huánjìng)中操作步驟由于生物適應(yīng)一定的環(huán)境，環(huán)境對生物有選擇作用，在富含纖維素的環(huán)境中，纖維素分解菌的含量相對提高，因此從這種土樣中獲得目的微生物的幾率要高于普通環(huán)境。②原因第十一頁，共38頁。③實例：樹林中多年落葉形成的腐殖土，多年積累(jīlěi)的枯枝敗葉等。④討論:如果找不到(bùdào)合適的環(huán)境，可以將濾紙埋在土壤中，將濾紙埋在土壤中有什么作用？你認為濾紙應(yīng)該埋在土壤中多深？答：將濾紙埋在土壤中能使纖維素分解菌相對集中，實際上是人工設(shè)置纖維素分解菌生存(shēngcún)的適宜環(huán)境。一般應(yīng)將濾紙埋于深約10cm左右的土壤中。第十二頁，共38頁。2、選擇(xuǎnzé)培養(yǎng)增加纖維素分解菌的濃度(nóngdù)，以確保能夠從樣品中分離所需要的微生物。①目的(mùdì)：閱讀書本P29纖維素分解菌的選擇培養(yǎng)基配方，回答問題。第十三頁，共38頁。答：用牛肉膏蛋白(dànbái)胨培養(yǎng)基與之對照?；蛘邔⒗w維素改為葡萄糖。2、選擇(xuǎnzé)培養(yǎng)②制備(zhìbèi)選擇培養(yǎng)基：A、旁欄中的配方是液體培養(yǎng)基還是固體培養(yǎng)基？為什么？答：是液體培養(yǎng)基，原因是配方中無凝固劑（瓊脂）B、這個培養(yǎng)基對微生物是否具有選擇作用？如果具有，是如何進行選擇的？答：有選擇作用，本配方中以纖維素作為唯一碳源，只有能分解纖維素的微生物可以大量繁殖。C、你能否設(shè)計一個對照實驗，說明選擇培養(yǎng)基的作用第十四頁，共38頁。稱取土樣20g，在無菌條件下加入裝有30mL培養(yǎng)基的搖瓶中。將搖瓶置于搖床上，在30℃下振蕩培養(yǎng)1～2d，至培養(yǎng)基變混濁。吸取一定的培養(yǎng)液（約5mL），轉(zhuǎn)移至另一瓶新鮮(xīnxiān)的選擇培養(yǎng)基中，以同樣的方法培養(yǎng)到培養(yǎng)液變渾濁。③操作(cāozuò)：2、選擇(xuǎnzé)培養(yǎng)第十五頁，共38頁。提示：在選擇培養(yǎng)的條件(tiáojiàn)下，可以使那些能夠適應(yīng)這種營養(yǎng)條件(tiáojiàn)的微生物得到迅速繁殖，而那些不適應(yīng)這種營養(yǎng)條件(tiáojiàn)的微生物的繁殖被抑制，因此可以起到“濃縮”的作用?！寂詸谒伎碱}〗為什么選擇(xuǎnzé)培養(yǎng)能夠“濃縮”所需的微生物？第十六頁，共38頁。按照課題1的稀釋(xīshì)操作方法，將選擇培養(yǎng)后的培養(yǎng)基進行等比稀釋(xīshì)101～107倍。3.梯度(tīdù)稀釋第十七頁，共38頁。4.將樣品涂布到鑒別(jiànbié)纖維素分解菌的培養(yǎng)基上⑴制備(zhìbèi)鑒別培養(yǎng)基:配方見書本(shūběn)29頁。操作過程見課題1（2）涂布平板：將稀釋度為104～106的菌懸液各取0.1ml涂布到平板培養(yǎng)基上，30℃倒置培養(yǎng)。第十八頁，共38頁。5.剛果紅染色法方法一：先，再加入剛果紅進行(jìnxíng)顏色反應(yīng)。方法二：在時就加入剛果紅。培養(yǎng)(péiyǎng)微生物倒平板(píngbǎn)第十九頁，共38頁?！寂詸谒伎碱}〗這兩種方法各有哪些優(yōu)點(yōudiǎn)與不足？染色法優(yōu)點缺點方法一方法二顏色(yánsè)反應(yīng)基本上是纖維素分解菌的作用操作繁瑣剛果紅會使菌落之間發(fā)生(fāshēng)混雜操作簡便不存在菌落混雜問題1.產(chǎn)生淀粉酶的微生物也產(chǎn)生模糊透明圈2.有些微生物能降解色素，形成明顯的透明圈。第二十頁，共38頁。在產(chǎn)生明顯的透明圈的菌落，挑取并接種到纖維素分解菌的選擇培養(yǎng)基上，在300C－370C培養(yǎng)，可獲得(huòdé)純化培養(yǎng)。6、純化(chúnhuà)培養(yǎng)第二十一頁，共38頁。提示：課題2是將土樣制成的菌懸液直接(zhíjiē)涂布在以尿素為惟一氮源的選擇性培養(yǎng)基上，直接(zhíjiē)分離得到菌落。本課題先通過選擇培養(yǎng)，使纖維素分解菌得到增殖后，再將菌液涂布在鑒別培養(yǎng)基上。其他步驟基本一致。〖旁欄思考題〗本實驗的流程與課題2中的實驗流程有哪些(nǎxiē)異同？第二十二頁，共38頁。第二十三頁，共38頁。㈡.操作過程：1.土壤取樣：采集土樣時，應(yīng)選擇富含纖維素的環(huán)境。若找不到合適環(huán)境，可將濾紙埋在土壤中一個月左右，也會有能分解纖維素的微生物生長。〖旁欄思考題〗為什么要在富含纖維素的環(huán)境中尋找纖維素分解菌？答：生物適應(yīng)一定環(huán)境，環(huán)境對生物具有選擇作用，只有在纖維素含量豐富的環(huán)境中纖維素分解菌的含量才會高于其它普通環(huán)境，從而提高獲得(huòdé)目的微生物的幾率。〖旁欄思考題〗將濾紙埋在土壤中有什么作用？你認為濾紙應(yīng)該埋進土壤多深？答：人工設(shè)置適宜環(huán)境，使纖維素分解菌相對聚集。將紙埋于深約10cm的腐殖土壤中。第二十四頁，共38頁。2.選擇培養(yǎng)⑴.選擇培養(yǎng)的目的：增加纖維素分解菌的濃度，以確保(quèbǎo)能夠從樣品中分離到所需要的微生物。第二十五頁，共38頁。⑶選擇培養(yǎng)：將土樣加入裝有30ml選擇培養(yǎng)基的錐形瓶中，將錐形瓶固定在搖床上，在一定溫度下震蕩培養(yǎng)1～2天，直至(zhízhì)培養(yǎng)液變渾濁。也可重復(fù)選擇培養(yǎng)。第二十六頁，共38頁。課題(kètí)成果評價（一）培養(yǎng)基的制作是否合格以及選擇培養(yǎng)基是否篩選出菌落(jūnluò)：對照的培養(yǎng)基在培養(yǎng)過程中沒有菌落(jūnluò)生長則說明培養(yǎng)基制作合格。如果觀察到產(chǎn)生透明圈的菌落(jūnluò)，則說明可能獲得了分解纖維素的微生物（二）分離的結(jié)果是否一致：由于在土壤中細菌的數(shù)量遠遠高于真菌和放線菌的數(shù)量，因此最容易分離得到的是細菌。但由于所取土樣的環(huán)境不同，學(xué)生也可能得到真菌和放線菌等不同的分離結(jié)果。第二十七頁，共38頁。1.培養(yǎng)流感病毒時，應(yīng)選用()A．固體培養(yǎng)基

B．含有多種無機鹽的培養(yǎng)液C．活的雞胚

D．無菌的牛肉湯2．微生物（除病毒外）需要從外界(wàijiè)吸收營養(yǎng)物質(zhì)并通過代謝來維持正常的生長和繁殖。下列有關(guān)微生物營養(yǎng)的說法正確的是()A．乳酸菌與硝化細菌所利用的碳源物質(zhì)是相同的

B．微生物生長中不可缺少的一些微量的無機物稱為生長因子

C．培養(yǎng)基中的營養(yǎng)物質(zhì)濃度越高對微生物的增殖越有利D．生長因子一般是酶或核酸的組成成分，微生物本身合成這些生長因子的能力往往不足CD第二十八頁，共38頁。3．在接種操作的過程(guòchéng)中，不正確的是()A．要將接種環(huán)灼燒滅菌

B．取下棉塞后要將試管口灼燒滅菌C．將接種環(huán)伸入試管內(nèi)，先接觸長菌多的部位

D．接種后還要將管口滅菌加塞4．高壓蒸氣滅菌的原理是()A．高壓使細菌DNA變性

B．高壓使細菌蛋白質(zhì)凝固變性C．高溫燙死細菌

D．高溫使細菌DNA變性CB第二十九頁，共38頁。5．在105稀釋度下，平板(píngbǎn)上生長的平均菌落數(shù)為50則每克樣品中的菌落數(shù)是………()A．5×107B．50C．5×108D．50×36．下列屬于菌落特征的是…………()①菌落的形狀②菌落的大小③菌落的多少④隆起程度⑤顏色⑥有無莢膜A．①②③④B．①②④⑤C．②③④⑥D(zhuǎn)．①②③④⑤⑥7．能排除培養(yǎng)基是否有雜菌污染的方法是……()A．將未接種的培養(yǎng)基放在實驗桌上培養(yǎng)B．將未接種的培養(yǎng)基放在窗臺上培養(yǎng)C．將未接種的培養(yǎng)基放在恒溫箱中培養(yǎng)D．將已接種的培養(yǎng)基放在恒溫箱中培養(yǎng)ABC第三十頁，共38頁。8、(20分)某化工廠的污水池中，含有一種有害的、難于降解的有機化合物A。研究人員用化合物A、磷酸鹽、鎂鹽以及微量元素配制的培養(yǎng)基，成功地篩選到能高效降解化合物A的細菌(xìjūn)(目的菌)。實驗的主要步驟如圖所示。請分析回答問題：(1)培養(yǎng)基中加入化合物A的目的(mùdì)是篩選，這種培養(yǎng)基屬于培養(yǎng)基。目的(mùdì)菌

選擇性

第三十一頁，共38頁。某化工廠的污水池中，含有一種有害的、難于降解的有機化合物A。研究人員用化合物A、磷酸鹽、鎂鹽以及微量元素配制的培養(yǎng)基，成功地篩選到能高效降解化合物A的細菌(目的菌)。實驗的主要步驟如圖所示。請分析回答問題(wèntí)：（北京卷）(2)“目的菌”生長所需的氮源和碳源是來自培養(yǎng)基中的，實驗(shíyàn)需要振蕩培養(yǎng)，由此推測“目的菌”的代謝類型是?；衔顰異養(yǎng)需氧第三十二頁，共38頁。某化工廠的污水池中，含有一種有害的、難于降解的有機化合物A。研究人員(rényuán)用化合物A、磷酸鹽、鎂鹽以及微量元素配制的培養(yǎng)基，成功地篩選到能高效降解化合物A的細菌(目的菌)。實驗的主要步驟如圖所示。請分析回答問題：(3)培養(yǎng)若干天后，應(yīng)選擇(xuǎnzé)培養(yǎng)瓶中化合物A含量的培養(yǎng)液，接入新的培養(yǎng)液中連續(xù)培養(yǎng)，使“目的菌”的數(shù)量。減少(jiǎnshǎo)

增加

第三十三頁，共38頁。某化工廠的污水池中，含有一種有害的、難于降解(jiànɡjiě)的有機化合物A。研究人員用化合物A、磷酸鹽、鎂鹽以及微量元素配制的培養(yǎng)基，成功地篩選到能高效降解(jiànɡjiě)化合物A的細菌(目的菌)。實驗的主要步驟如圖所示。請分析回答問題：(4)轉(zhuǎn)為固體培養(yǎng)(péiyǎng)時，常采用方法接種，獲得單菌落后繼續(xù)篩選。劃線(huáxiàn)第三十四頁，共38頁。某化工廠的污水池中，含有一種有害的、難于降解的有機化合物A。研究人員用化合物A、磷酸鹽、鎂鹽以及微量元素配制的培養(yǎng)基，成功地篩選到能高效降解化合物A的細菌(目的(mùdì)菌)。實驗的主要步驟如圖所示。請分析回答問題：(5)若研究“目的菌”的生長(shēngzhǎng)規(guī)律，將單個菌落進行液體培養(yǎng)，可采用的方法進行計數(shù)，以時間為橫坐標，以為縱坐標，繪制生長(shēngzhǎng)曲線。細菌(xìjūn)數(shù)目的對數(shù)第三十五頁，共38頁。某化工廠的污水池中，含有一種有害的、難于降解的有機(yǒujī)化合物A。研究人員用化合物A、磷酸鹽、鎂鹽以及微量元素配制的培養(yǎng)基，成功地篩選到能高效降解化合物A的細菌(目的菌)。實驗的主要步驟如圖所示。請分析回答問題：(6)實驗(shíyàn)結(jié)束后，使用過的培養(yǎng)基應(yīng)該進行處理后，才能倒掉。滅菌(mièjūn)第三十六頁，共38頁。根據(jù)用途分選擇培養(yǎng)基——在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì),以抑制不需要的微生物的生長,促進(cùjìn)所需要的微生物的生長鑒別培養(yǎng)基——在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品,用以鑒別不同種類的微生物。例如：伊紅和美藍,和大腸桿菌的代謝產(chǎn)物結(jié)合,使菌落呈黑色（老教材說法：深紫色,帶有金屬光澤）,鑒別大腸桿菌第三十七頁，共38頁。85.每一年，我都更加相信生命的浪費是在于：我們沒有獻出愛，我們沒有使用力量，我們表現(xiàn)出自私的謹慎，不去冒險，避開痛苦，也失去了快樂。――[約翰·B·塔布]86.微笑，昂首闊步，作深呼吸，嘴里哼著歌兒。倘使你不會唱歌，吹吹口哨或用鼻子哼一哼也可。如此一來，你想讓自己煩惱都不可能。――[戴爾·卡內(nèi)基]87.當一切毫無希望時，我看著切石工人在他的石頭上，敲擊了上百次，而不見任何裂痕出現(xiàn)。但在第一百零一次時，石頭被劈成兩半。我體會到，并非那一擊，而是前面的敲打使它裂開。――[賈柯·瑞斯]88.每個意念都是一場祈禱。――[詹姆士·雷德非]89.虛榮心很難說是一種惡行，然而一切惡行都圍繞虛榮心而生，都不過是滿足虛榮心的手段。――[柏格森]90.習慣正一天天地把我們的生命變成某種定型的化石，我們的心靈正在失去自由，成為平靜而沒有激情的時間之流的奴隸。――[托爾斯泰]91.要及時把握夢想，因為夢想一死，生命就如一只羽翼受創(chuàng)的小鳥，無法飛翔。――[蘭斯頓·休斯]92.生活的藝術(shù)較像角力的藝術(shù)，而較不像跳舞的藝術(shù)；最重要的是：站穩(wěn)腳步，為無法預(yù)見的攻擊做準備。――[瑪科斯·奧雷利阿斯]93.在安詳靜謐的大自然里，確實還有些使人煩惱.懷疑.感到壓迫的事。請你看看蔚藍的天空和閃爍的星星吧!你的心將會平靜下來。[約翰·納森·愛德瓦茲]94.對一個適度工作的人而言，快樂來自于工作，有如花朵結(jié)果前擁有彩色的花瓣。――[約翰·拉斯金]95.沒有比時間更容易浪費的,同時沒有比時間更珍貴的了，因為沒有時間我們幾乎無法做任何事。――[威廉·班]96.人生真正的歡欣，就是在于你自認正在為一個偉大目標運用自己；而不是源于獨自發(fā)光.自私渺小的憂煩軀殼，只知抱怨世界無法帶給你快樂。――[蕭伯納]97.有三個人是我的朋友愛我的人.恨我的人.以及對我冷漠的人。愛我的人教我溫柔；恨我的人教我謹慎；對我冷漠的人教我自立。――[J·E·丁格]98.過去的事已經(jīng)一去不復(fù)返。聰明的人是考慮現(xiàn)在和未來，根本無暇去想過去的事。――[英國哲學(xué)家培根]99.真正的發(fā)現(xiàn)之旅不只是為了尋找全新的景色，也為了擁有全新的眼光。――[馬塞爾·普勞斯特]100.這個世界總是充滿美好的事物，然而能看到這些美好事物的人，事實上是少之又少。――[羅丹]101.稱贊不但對人的感情，而且對人的理智也發(fā)生巨大的作用，在這種令人愉快的影響之下，我覺得更加聰明了，各種想法，以異常的速度接連涌入我的腦際。――[托爾斯泰]102.人生過程的景觀一直在變化，向前跨進，就看到與初始不同的景觀，再上前去，又是另一番新的氣候――。[叔本華]103.為何我們?nèi)绱思臣秤诿?，如果一個人和他的同伴保持不一樣的速度，或許他耳中聽到的是不同的旋律，讓他隨他所聽到的旋律走，無論快慢或遠近。――[梭羅]104.我們最容易不吝惜的是時間，而我們應(yīng)該最擔心的也是時間；因為沒有時間的話，我們在世界上什么也不能做。――[威廉·彭]105.人類的悲劇，就是想延長自己的壽命。我們往往只憧憬地平線那端的神奇【違禁詞，被屏蔽】，而忘了去欣賞今天窗外正在盛開的玫瑰花。――[戴爾·卡內(nèi)基]106.休息并非無所事事，夏日炎炎時躺在樹底下的草地，聽著潺潺的水聲，看著飄過的白云，亦非浪費時間。――[約翰·羅伯克]107.沒有人會只因年齡而衰老，我們是因放棄我們的理想而衰老。年齡會使皮膚老化，而放棄熱情卻會使靈魂老化。――[撒母耳·厄爾曼]108.快樂和智能的區(qū)別(qūbié)在于：自認最快樂的人實際上就是最快樂的，但自認為最明智的人一般而言卻是最愚蠢的。――[卡雷貝·C·科爾頓]109.每個人皆有連自己都不清楚的潛在能力。無論是誰，在千鈞一發(fā)之際，往往能輕易解決從前認為極不可能解決的事。――[戴爾·卡內(nèi)基]110.每天安靜地坐十五分鐘·傾聽你的氣息，感覺它，感覺你自己，并且試著什么都不想。――[艾瑞克·佛洛姆]111.你知道何謂沮喪---就是你用一輩子工夫，在公司或任何領(lǐng)域里往上攀爬，卻在抵達最高處的同時，發(fā)現(xiàn)自己爬錯了墻頭。－－[坎伯]112.「偉大」這個名詞未必非出現(xiàn)在規(guī)模很大的事情不可；生活中微小之處，照樣可以偉大。――[布魯克斯]113.人生的目的有二：先是獲得你想要的；然后是享受你所獲得的。只有最明智的人類做到第二點。――[羅根·皮沙爾·史密斯]114.要經(jīng)常聽.時常想.時時學(xué)習，才是真正的生活方式。對任何事既不抱希望，也不肯學(xué)習的人，沒有生存的資格。――[阿薩·赫爾帕斯爵士]115.旅行的精神在于其自由，完全能夠隨心所欲地去思考.去感覺.去行動的自由。――[威廉·海茲利特]116.昨天是張退票的支票，明天是張信用卡，只有今天才是現(xiàn)金；要善加利用。――[凱·里昂]