微生物的遺傳和育種第一頁，共一百四十頁，2022年，8月28日遺傳學的一些概念遺傳(heredity)：上一代生物如何將自身的一整套遺傳基因穩(wěn)定地傳遞給下一代的行為或功能。特點：具穩(wěn)定性。

四個基本概念：1.遺傳型（genotype）：又稱基因型，指某一生物個體所含有的全部遺傳因子即基因組所帶的遺傳信息。第二頁，共一百四十頁，2022年，8月28日2.表型（phenotype）：指生物體所具有的一切外表特征和內(nèi)在特性的總和，是其遺傳型在合適環(huán)境下通過代謝和發(fā)育而得到的具體體現(xiàn)。

遺傳型+環(huán)境條件======表型第三頁，共一百四十頁，2022年，8月28日3.變異(variation):生物體在外因或內(nèi)因的作用下，遺傳物質(zhì)的結構或數(shù)量發(fā)生改變，亦即遺傳型的改變。變異的特點：

a.群體一般為10-5～10-10；

b.性狀變化的幅度大；

c.變化后形成的新性狀是穩(wěn)定的、可遺傳的。第四頁，共一百四十頁，2022年，8月28日4.飾變（modification）：指外表的修飾性改變，是一種不涉及遺傳物質(zhì)結構改變而只發(fā)生在轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)譯水平上的表型變化。特點：

a.幾乎整個群體中的每一個體都發(fā)生同樣的變化；

b.性狀變化的幅度??；

c.因遺傳物質(zhì)不變，故飾變是不遺傳的。引起飾變的因素消失后，表型即可恢復。第五頁，共一百四十頁，2022年，8月28日4.飾變（modification）：例子：粘質(zhì)沙雷氏菌（神靈色桿菌）粘質(zhì)沙雷氏菌在25℃下培養(yǎng)時，會產(chǎn)生深紅色的靈桿菌素,把菌落染成鮮血狀，可是,當培養(yǎng)在37℃下時,群體中的所有個體都不產(chǎn)色素。如果重新降溫至25℃,所有細胞產(chǎn)色素能力又可以恢復。宗教中稱它為“神靈色桿菌”或“靈桿菌”飾變是與變異有著本質(zhì)區(qū)別第六頁，共一百四十頁，2022年，8月28日第一節(jié)遺傳變異的物質(zhì)基礎第七頁，共一百四十頁，2022年，8月28日一、3個經(jīng)典實驗證明核酸是遺傳物質(zhì)的實驗。（一）轉(zhuǎn)化實驗研究材料：肺炎鏈球菌，小白鼠肺炎鏈球菌特點：S型——有莢膜，菌落表面光滑，屬致病菌。致病性，人患肺炎，小白鼠患敗血癥而死亡。R型——無莢膜，菌落表面粗糙，屬非致病菌第八頁，共一百四十頁，2022年，8月28日

1928年，英國微生物學家Griffith(格里費斯）做了肺炎鏈球菌的轉(zhuǎn)化實驗。實驗說明了加熱殺死的S型菌，在細胞內(nèi)有一種具有遺傳轉(zhuǎn)化能力的物質(zhì)，可進入R型菌細胞內(nèi)，使R型菌獲得表達莢膜的遺傳特性。體內(nèi)轉(zhuǎn)化實驗－DNA是遺傳物質(zhì)的證明第九頁，共一百四十頁，2022年，8月28日1944年Avery（艾費里）揭開了轉(zhuǎn)化因子的化學本質(zhì)。體外轉(zhuǎn)化實驗－DNA是遺傳物質(zhì)的證明超速離心脂類除去進入顯示出DNA的優(yōu)勢第十頁，共一百四十頁，2022年，8月28日（二）噬菌體的侵染標記實驗

1952年Hersey（侯喜）和Chase（蔡斯）的同位素標記大腸桿菌T2噬菌體進行侵染實驗。實驗方法材料：大腸桿菌，T2噬菌體培養(yǎng)基：32PO43-

和35SO42-的組合培養(yǎng)基。結果：制備出含32P-DNA核心的噬菌體制備出含35S-蛋白質(zhì)外殼的噬菌體

第十一頁，共一百四十頁，2022年，8月28日離心32p85%35s75%離心第十二頁，共一百四十頁，2022年，8月28日（三）植物病毒的重建實驗

煙草花葉病毒的感染和繁殖過程，證實RNA也是重要的遺傳物質(zhì)。1956年，法郎克-康勒特（H.Fraenkel-Conrat）分離RNA和protein，進行重組實驗。實驗材料：煙草花葉病毒（TMVA)與霍氏車前花葉病毒（HRV，TMVB）。5%RNA,95%Protein。

第十三頁，共一百四十頁，2022年，8月28日RNA雜合病毒實驗苯酚苯酚HRVB煙草花葉病毒經(jīng)弱堿、尿素、去垢劑等處理，可以將其蛋白外殼與RNA分開，重新將蛋白外殼與RNA混合，病毒粒子又會重建。第十四頁，共一百四十頁，2022年，8月28日二、遺傳物質(zhì)在細胞內(nèi)的

存在部位和方式（一）核酸存在的七個水平細胞水平：存在于細胞核或核質(zhì)體，單核或多核細胞核水平:原核與真核生物的細胞核結構不同，核基因組和核外染色體。染色體水平:染色體數(shù)和倍數(shù)(真核)，單倍體和雙倍體核酸水平：核酸種類、核酸結構和DNA長度（單位bp、kb、Mb）?；蛩剑壕咦灾鲝椭颇芰Φ淖钚∵z傳功能單位，核酸片斷。長度與信息量，轉(zhuǎn)錄——翻譯密碼子水平： 信息單位,起始和終止,核苷酸水平： 突變或交換單位，四種堿基第十五頁，共一百四十頁，2022年，8月28日1.細胞水平細胞核或核區(qū)單核或多核第十六頁，共一百四十頁，2022年，8月28日2.細胞核水平核染色體=核基因組=核染色體組=基因組核外染色體=核外遺傳因子第十七頁，共一百四十頁，2022年，8月28日3.染色體水平（1）染色體數(shù)不同生物的染色體數(shù)差別很大。書P193表7-1（2）染色體倍數(shù)定義：指同一細胞中相同染色體的套數(shù)。單倍體：一套染色體雙倍體：兩套功能相同的染色體第十八頁，共一百四十頁，2022年，8月28日

染色體的一般形態(tài)結構第十九頁，共一百四十頁，2022年，8月28日染色體組型第二十頁，共一百四十頁，2022年，8月28日4.核酸水平核酸種類

DNA或RNA核酸結構雙鏈或單鏈雙鏈DNA：環(huán)狀、線狀、超螺旋狀（麻花狀）DNA長度基因組的大小單位：bp（堿基對）、Kb（千堿基對）、Mb（兆堿基對）例如：p194表7-2第二十一頁，共一百四十頁，2022年，8月28日DNASupercoilingTopackagetheDNAintothecellrequiresthattheDNAbesupercoiled.Thereareover50supercoileddomainsintheE.colichromosome,theyarestabilizedbyassociationwiththestructuralproteins.第二十二頁，共一百四十頁，2022年，8月28日DNA分子形成環(huán)狀，這種環(huán)呈超螺旋狀它從致密的含蛋白質(zhì)的結構中伸出（支架）E.coli：2.4×109Da，42000Kb（1300微米），閉合環(huán)狀，約編碼2000個基因。類核（nucleoid）。支架(scafford）50-100個DNA環(huán)組成，每200bp就有一個負超螺旋DNA這種高度折疊的結構使DNA分子長度壓縮了千余倍。第二十三頁，共一百四十頁，2022年，8月28日5.基因水平基因：是生物體內(nèi)一切具有自主復制能力的最小遺傳功能單位，其物質(zhì)基礎是一條以直線排列、具有特定核苷酸序列的核酸片段。有眾多基因構成了染色體?；虼笮。?000-1500bp，分子質(zhì)量6.7×105基因調(diào)控系統(tǒng)第二十四頁，共一百四十頁，2022年，8月28日（二）原核生物的質(zhì)?；虿粌H存在在染色體上，還存在于細胞中的染色體外的遺傳因子上核外染色體真核生物的“質(zhì)?！痹松锏馁|(zhì)粒

線粒體細胞質(zhì)基因 葉綠體（質(zhì)體） 中心體 動體共生生物： 卡巴顆粒酵母菌的2m質(zhì)粒F因子R因子Col質(zhì)粒Ti質(zhì)粒巨大質(zhì)粒降解性質(zhì)粒第二十五頁，共一百四十頁，2022年，8月28日1.質(zhì)粒（plasmid）定義：一種獨立于染色體外，能進行自主復制的細胞質(zhì)遺傳因子，主要存在于各種微生物細胞中。(1)質(zhì)粒的分子結構通常以共價閉合環(huán)狀(covalentlyclosedcircle，簡稱CCC)的超螺旋雙鏈DNA分子存在于細胞中；也發(fā)現(xiàn)有線型雙鏈DNA質(zhì)粒和RNA質(zhì)粒；質(zhì)粒分子的大小范圍從1kb左右到1000kb；（細菌質(zhì)粒多在10kb以內(nèi)）第二十六頁，共一百四十頁，2022年，8月28日質(zhì)粒的檢測

提取所有胞內(nèi)DNA后電鏡觀察；第二十七頁，共一百四十頁，2022年，8月28日第二節(jié)基因突變和誘變育種第二十八頁，共一百四十頁，2022年，8月28日一、基因突變突變：指細胞內(nèi)（或病毒粒內(nèi)）遺傳物質(zhì)的分子結構或數(shù)量突然發(fā)生的可遺傳的變化，可自發(fā)或誘導產(chǎn)生。

狹義突變：基因突變—點突變廣義突變：基因突變和染色體畸變自發(fā)突變的幾率：10-6---10-9

野生菌株→突變→突變株第二十九頁，共一百四十頁，2022年，8月28日(一）基因突變類型選擇性突變株：能用選擇性培養(yǎng)基快速選擇出來的突變株。非選擇型突變：反之為---。營養(yǎng)缺陷型（株）抗性突變型（株）選擇性突變株條件致死突變（株）形態(tài)突變型（株）抗原突變型（株）非選擇型突變株產(chǎn)量突變型（株）第三十頁，共一百四十頁，2022年，8月28日營養(yǎng)缺陷型——某一野生型菌株因基因突變而喪失合成一種或幾種生長因子、堿基或氨基酸的能力，因而無法再在基本培養(yǎng)基上生長繁殖的變異類型。必須在培養(yǎng)基中添加某種物質(zhì)才能生長?？剐酝蛔冃汀骋灰吧途暌蛲蛔兌a(chǎn)生了對某種化學藥物或致死物理因子的抗性的突變株。在加有相應藥物或相應物理因子處理的培養(yǎng)基平板上選出。第三十一頁，共一百四十頁，2022年，8月28日3.條件致死突變型——突變后在某種條件下可正常生長、繁殖，而在另一條件下卻無法生長、繁殖的突變型。大腸桿菌Ts突變株，37℃正常生長，42℃死亡；

T4噬菌體，在25℃可感染大腸桿菌，37℃不能感染。4.抗原突變型——因突變而引起的抗原結構發(fā)生改變。細胞壁缺陷變異（L型細菌），莢膜或鞭毛成分變異，病毒蛋白變異。第三十二頁，共一百四十頁，2022年，8月28日5.產(chǎn)量突變型：通過基因突變而產(chǎn)生的在代謝產(chǎn)物產(chǎn)量上明顯有別于原始菌株的突變株。

正突變：產(chǎn)量顯著高于原始菌株

負突變：反之6.形態(tài)突變株：指由突變引起的細胞形態(tài)的變異。第三十三頁，共一百四十頁，2022年，8月28日（二）突變率定義：每一細胞在每一世代中發(fā)生某一性狀突變的幾率。突變率為10–8是指該細胞在一億次細胞分裂中，會發(fā)生一次突變。突變率也可以用每一單位群體在每一世代中產(chǎn)生突變株（mutant，即突變型）的數(shù)目來表示。突變率=突變細胞數(shù)/分裂前群體細胞數(shù)第三十四頁，共一百四十頁，2022年，8月28日（三）基因突變的特點7個共同特點以細菌的抗藥性為例:自發(fā)性：突變可以在沒有人為誘變因素處理下自發(fā)地產(chǎn)生。不對應性：突變的性狀與突變原因之間無直接的對應關系。稀有性：突變率低且穩(wěn)定。第三十五頁，共一百四十頁，2022年，8月28日（三）基因突變的特點獨立性：各種突變獨立發(fā)生，不會互相影響?？烧T發(fā)性：誘變劑可提高突變率。穩(wěn)定性：變異性狀穩(wěn)定可遺傳可逆性：正向突變====回復突變從突變株回到野生型的過程則稱為回復突變。第三十六頁，共一百四十頁，2022年，8月28日（四）基因突變的自發(fā)性和不對應性的實驗證明1.變量試驗又稱波動試驗或彷徨試驗。

1943年，S.E.Luria和M.Delbrück根據(jù)統(tǒng)計學原理，設計了實驗。材料：大腸桿菌、T1噬菌體（烈性噬菌體）方法：觀察統(tǒng)計抗噬菌體的抗性菌株數(shù)量第三十七頁，共一百四十頁，2022年，8月28日結果：在50皿中，抗性菌落數(shù)相差較大，而另50皿中，抗性菌落數(shù)基本相同。結論：抗性的產(chǎn)生與環(huán)境無關?？剐栽诮佑|T1前的某次細胞分裂過程中就自發(fā)產(chǎn)生了。第三十八頁，共一百四十頁，2022年，8月28日2、涂布實驗原理與變量試驗相同，方法更為簡便，且可計算突變率。第三十九頁，共一百四十頁，2022年，8月28日3、影印平板培養(yǎng)法1952年，J.Lederberg夫婦的論文《平板影印培養(yǎng)法和細菌突變株的間接選擇》，更好地證明了微生物的抗藥性是在未接觸藥物前自發(fā)地產(chǎn)生的，這一突變與相應藥物環(huán)境毫不相干。

Lederberg（萊德伯格，美國生物學家、遺傳學家，獲1958年諾貝爾生理學-醫(yī)學獎），1952年的實驗。

第四十頁，共一百四十頁，2022年，8月28日S=青霉素敏感菌株R=青霉素抗性菌株第四十一頁，共一百四十頁，2022年，8月28日第四十二頁，共一百四十頁，2022年，8月28日實驗分析在根本未接觸過任何一點鏈霉素的情況下，就可以篩選到大量抗鏈霉素的突變株，充分說明了突變是自發(fā)產(chǎn)生的，鏈霉素只是起到了一種檢出作用。平板影印培養(yǎng)不僅在微生物遺傳理論的研究中有重要應用，而且在育種實踐和其它研究中均有應用。第四十三頁，共一百四十頁，2022年，8月28日（五）基因突變及其機制自發(fā)突變誘發(fā)突變第四十四頁，共一百四十頁，2022年，8月28日第四十五頁，共一百四十頁，2022年，8月28日1.誘發(fā)突變堿基置換移碼突變?nèi)旧w畸變第四十六頁，共一百四十頁，2022年，8月28日基因突變（點突變）的誘變機制誘變劑（mutagen）：凡能提高突變率的任何理化因子，就稱為誘變劑種類：誘變劑的種類很多

1.化學誘變劑

2.物理誘變劑下面介紹代表性的誘變劑的作用機制。第四十七頁，共一百四十頁，2022年，8月28日（1）堿基置換（substitution）一對堿基被另一對堿基所置換。轉(zhuǎn)換（transition），即DNA鏈中的一個嘌呤被另一個嘌呤或是一個嘧啶被另一個嘧啶所置換；顛換（transversion），即一個嘌呤被一個嘧啶,或是一個嘧啶被一個嘌呤所置換。……GGT…………CCA…………GAT…………CTA…………GTT…………CAA…………GAT…………CTA……轉(zhuǎn)換置換第四十八頁，共一百四十頁，2022年，8月28日堿基置換后會出現(xiàn)下列幾種情況(1)

錯義突變一種氨基酸，變成另一種氨基酸；(2)

無義突變氨基酸的堿基置換后變成

UAG、UAA、UGA等終止密碼子；第四十九頁，共一百四十頁，2022年，8月28日堿基置換后會出現(xiàn)下列幾種情況(3)同義突變，堿基發(fā)生了置換，但由于遺傳密碼子的簡并性，氨基酸不變。如密碼子GCU置換成GCC后，它們都是丙氨酸的密碼子；(4)

沉默突變，堿基置換造成多肽鏈中一個氨基酸的改變，但該氨基酸對蛋白質(zhì)的結構和功能沒有多大的影響，并沒引起細胞表型變化。第五十頁，共一百四十頁，2022年，8月28日酪氨酸的密碼子UAC

CACUAGUAUUCC（組氨酸）（終止密碼子）（酪氨酸）絲氨酸）錯誤蛋白質(zhì)不完整蛋白質(zhì)相同蛋白質(zhì)基本相同蛋白質(zhì)

錯義突變無義突變同義突變沉默突變第五十一頁，共一百四十頁，2022年，8月28日A直接引起置換的誘變劑

一類可直接與核酸的堿基發(fā)生化學反應的誘變劑，不論在機體內(nèi)或是在離體條件下均有作用。例如：亞硝酸、羥胺和各種烷化劑作用：它們可與一個或幾個核苷酸發(fā)生化學反應，從而引起DNA復制時堿基配對的轉(zhuǎn)換，并進一步使微生物發(fā)生變異。第五十二頁，共一百四十頁，2022年，8月28日配對原則:6位上是氨基的嘌呤------4位上是酮基的嘧啶6位上是酮基的嘌呤------4位上是氨基的嘧啶第五十三頁，共一百四十頁，2022年，8月28日第五十四頁，共一百四十頁，2022年，8月28日由亞硝酸引起的AT→GC的轉(zhuǎn)換①腺嘌呤氧化脫氨后形成烯醇式次黃嘌呤（He）②He通過互變異構效應形成酮式次黃嘌呤（HK）③DNA復制時，HK與胞嘧啶（C）配對

④DNA第二次復制時，C與G正常配對，實現(xiàn)了轉(zhuǎn)換。第五十五頁，共一百四十頁，2022年，8月28日AATTTHHHCCCG亞硝酸的作用AH第五十六頁，共一百四十頁，2022年，8月28日B間接引起置換的誘變劑這類誘變劑主要是一些堿基類似物這些化合物有5-溴尿嘧啶（5-BU），5-氟尿嘧啶(5-FU)、8-氮鳥嘌呤(8-NG)和2-氨基嘌呤（2-AP）等。它們與正常堿基的結構類似，在DNA復制時，它們可以被錯誤地摻入DNA，引起誘變效應，所以說它們引起堿基置換的作用是間接的。第五十七頁，共一百四十頁，2022年，8月28日5-溴尿嘧啶（5-BU）酮式的5-BU結構與胸腺嘧啶相似，烯醇式5-BU結構與胞嘧啶相似，

當把某一微生物在含5-BU的培養(yǎng)液中培養(yǎng)，DNA復制時，它可取代T。5-BU以酮式狀態(tài)存在于DNA中，因而與A配對。

5-BU很容易進行酮式與烯醇式結構的互變異構，當DNA復制時，烯醇式5-BU不與A而與G配對，從而造成A：TG：C的轉(zhuǎn)換，第五十八頁，共一百四十頁，2022年，8月28日第五十九頁，共一百四十頁，2022年，8月28日（2）移碼突變移碼突變是指由一種誘變劑引起DNA分子中的一個或少數(shù)幾個核苷酸的插入或缺失，從而使該部位后面的全部遺傳密碼發(fā)生轉(zhuǎn)錄和翻譯錯誤的一類突變。第六十頁，共一百四十頁，2022年，8月28日第六十一頁，共一百四十頁，2022年，8月28日移碼突變誘變劑吖啶類染料（原黃素、吖啶黃、吖啶橙等）和一系列稱為ICR類的化合物（美國的腫瘤研究所合成而得名），都是移碼突變的有效誘變劑第六十二頁，共一百四十頁，2022年，8月28日吖啶類化合物的誘變機制是一種平面型的三環(huán)分子，與嘌呤-嘧啶堿基對的結構十分相似，故能嵌入兩個相鄰的DNA堿基對之間，造成雙螺旋的部分解開（0.34nm--，變成0.68nm），從而在DNA復制過程中，會使鏈中增添或缺失一個堿基，結果引起移碼突變第六十三頁，共一百四十頁，2022年，8月28日第六十四頁，共一百四十頁，2022年，8月28日

(3)染色體畸變?nèi)旧w畸變包括：缺失、重復、倒位、易位、轉(zhuǎn)座。一般認為這是由于染色體單體發(fā)生斷裂后，錯誤性愈合而造成的。第六十五頁，共一百四十頁，2022年，8月28日轉(zhuǎn)座（易位）現(xiàn)象轉(zhuǎn)座：DNA序列通過非同源重組的方式，從染色體某一部位轉(zhuǎn)移到同一染色體上另一部位或其他染色體上某一部位的現(xiàn)象。凡具有轉(zhuǎn)座作用的一段DNA序列，稱為轉(zhuǎn)座因子。

轉(zhuǎn)座因子包括：插入序列IS轉(zhuǎn)座子Tn轉(zhuǎn)座噬菌體Mu轉(zhuǎn)座頻率：10-5—10-7特點：轉(zhuǎn)座因子---復制---非同源重組正向重復序列-----轉(zhuǎn)座酶基因-----反向重復序列第六十六頁，共一百四十頁，2022年，8月28日轉(zhuǎn)座因子的插入引起受體DNA上靶序列的復制轉(zhuǎn)座酶切開轉(zhuǎn)座因子靶序列插入第六十七頁，共一百四十頁，2022年，8月28日突變的DNA變化（置換）（缺失）（插入）（倒位）（相互易位）（置換）（缺失）（插入）第六十八頁，共一百四十頁，2022年，8月28日2、自發(fā)突變的機理大多數(shù)自發(fā)突變本質(zhì)上也是誘發(fā)的，只不過它不是人為的，而是自然環(huán)境或細胞內(nèi)環(huán)境誘發(fā)的。細胞外因素、細胞內(nèi)因素、DNA分子內(nèi)部因素第六十九頁，共一百四十頁，2022年，8月28日（1）細胞外的誘發(fā)因素自然環(huán)境或人工條件下的物理和化學因素自然環(huán)境中，宇宙間的短波輻射、宇宙線和紫外線等，多因素低劑量長期輻射的綜合效應，將會引起生物的自發(fā)突變。自然環(huán)境中存在低劑量的金屬離子、高分子化合物、生物堿藥物、染料等都能成為引起生物突變的化學因素第七十頁，共一百四十頁，2022年，8月28日（2）細胞內(nèi)的誘發(fā)因素細胞的代謝活動會產(chǎn)生一些誘變物質(zhì)，如過氧化氫、咖啡堿和重氮絲氨酸等，它們是引起自發(fā)突變的內(nèi)源誘變劑。許多微生物的陳舊培養(yǎng)物中易出現(xiàn)自發(fā)突變株，可能就是這類原因。第七十一頁，共一百四十頁，2022年，8月28日（3）DNA分子內(nèi)部因素一般生理條件下，堿基互變平衡反應傾向于酮式或氨基式，DNA兩條互補鏈之間總是以A:T和C:G堿基配對。但T偶爾也會以稀有的烯醇式形式出現(xiàn)，這樣在DNA復制到達這一位置的瞬間，新合成鏈中T對應的不再是A，而是G；若堿基C以稀有的亞氨基形式出現(xiàn)，在DNA復制到達這一位置的瞬間，則它對應的不是G。據(jù)統(tǒng)計，堿基對發(fā)生自發(fā)突變的幾率約為10–6-10–9。第七十二頁，共一百四十頁，2022年，8月28日（六）紫外線對DNA的損傷

及其修復紫外線的主要作用是使同鏈DNA的相鄰嘧啶間形成共價結合的胸腺嘧啶二聚體。第七十三頁，共一百四十頁，2022年，8月28日第七十四頁，共一百四十頁，2022年，8月28日1、光復活作用（photoreactivation）經(jīng)紫外線照射后的微生物立即暴露于可見光下時，可明顯降低其死亡率的現(xiàn)象，稱為光復活作用。對照：

8×106個/mlE.coliUV100個/ml試驗：

8×106個/mlE.coliUV360-490nm可見光，30分2×106個/ml

第七十五頁，共一百四十頁，2022年，8月28日1、光復活作用（photoreactivation）經(jīng)紫外線照射后形成的帶有胸腺嘧啶二聚體的DNA分子，在黑暗下會被一種光激活酶即光裂合酶（photolyase）結合，當形成的復合物暴露在可見光（300-500nm）下時，此酶會因獲得光能而發(fā)生解離，從而使二聚體重新分解成單體。光激活酶也從復合物中釋放出來。每一E.coli細胞中約含有25個光激活酶分子。第七十六頁，共一百四十頁，2022年，8月28日1、光復活作用（photoreactivation）

由于一般的微生物中都存在著光復活作用，所以進行紫外線誘變育種時，只能在紅光下照射及處理照射后的菌液。第七十七頁，共一百四十頁，2022年，8月28日2、暗修復作用（darkrepair）又稱切除修復（excisionrepair）。是活細胞內(nèi)一種用于修復被紫外線等誘變劑（包括烷化劑、X射線和γ射線等）損傷后的DNA的機制。這種修復作用與光無關。第七十八頁，共一百四十頁，2022年，8月28日二、突變與育種（一）自發(fā)突變與育種1、生產(chǎn)中育種

10-6突變率-----尋找正向突變菌株2、定向培育優(yōu)良菌種卡介苗：牛型結核桿菌→13年→230代→卡介苗（減毒活菌疫苗）第七十九頁，共一百四十頁，2022年，8月28日（二）誘變育種誘變+篩選誘變是隨機的；篩選是定向的目前發(fā)酵工業(yè)生產(chǎn)菌株都是經(jīng)過突變改造過的。第八十頁，共一百四十頁，2022年，8月28日營養(yǎng)缺陷型(auxotroph)的篩選營養(yǎng)缺陷型——某一野生型菌株因基因突變而喪失合成一種或幾種生長因子、堿基或氨基酸的能力，因而無法再在基本培養(yǎng)基上生長繁殖的變異類型。必須在培養(yǎng)基中添加某種物質(zhì)才能生長。第八十一頁，共一百四十頁，2022年，8月28日A.有關的三類遺傳型個體：

營養(yǎng)缺陷型突變株：必須在培養(yǎng)基內(nèi)加入相應有機養(yǎng)分

野生型菌株：自然界分離到的任何微生物，在其發(fā)生營養(yǎng)缺陷突變前的原始菌株，為該微生物的野生型。

原養(yǎng)型菌株：指營養(yǎng)缺陷型突變菌株回復突變或重組后產(chǎn)生的菌株，與野生型的表型相同。第八十二頁，共一百四十頁，2022年，8月28日B.有關的三類培養(yǎng)基基本培養(yǎng)基（MM）[-]：凡是能滿足野生型菌株營養(yǎng)要求的最低成分的合成培養(yǎng)基。完全培養(yǎng)基（CM）[+]：滿足一切營養(yǎng)缺陷型菌株生長的天然或半合成培養(yǎng)基。補充培養(yǎng)基（SM）[x]：在MM中有針對性地加入一或幾種營養(yǎng)成分以滿足相應營養(yǎng)缺陷型菌株生長的合成培養(yǎng)基。第八十三頁，共一百四十頁，2022年，8月28日艾姆氏試驗（Amestest）

對化學誘變劑做檢測菌種：組氨酸營養(yǎng)缺陷型鼠傷寒沙門氏菌（his-）；原理：（his-）在基本培養(yǎng)基上不長；而發(fā)生回復突變則長。第八十四頁，共一百四十頁，2022年，8月28日

艾姆斯氏試驗誘變誘導物

回復突變型

實驗目的是利用營養(yǎng)缺陷型的回復突變來檢測環(huán)境或食品中是否存在化學致癌劑。第八十五頁，共一百四十頁，2022年，8月28日第三節(jié)基因重組和雜交育種一、原核生物的基因重組二、真核微生物的基因重組第八十六頁，共一百四十頁，2022年，8月28日一、原核生物的基因重組基因重組定義:凡把兩個不同性狀個體內(nèi)的遺傳基因轉(zhuǎn)移到一起，經(jīng)過遺傳分子間的重新組合，形成新遺傳型個體的方式，稱為基因重組（generecombination）或遺傳重組。作用：重組可使生物體在未發(fā)生突變的情況下，也能產(chǎn)生新遺傳型的個體。第八十七頁，共一百四十頁，2022年，8月28日重組與雜交的關系重組是分子水平上的一個概念，可以理解成是遺傳物質(zhì)分子水平上的雜交.而一般所說的雜交（hybridization）則是細胞水平上的一個概念。雜交中必然包含著重組，而重組則不限于雜交這一形式。第八十八頁，共一百四十頁，2022年，8月28日一、原核微生物的基因重組特點：片段性：僅一小段DNA單向性：供體→受體轉(zhuǎn)移機制多樣性：轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導、接合、原生質(zhì)體融合第八十九頁，共一百四十頁，2022年，8月28日（一）轉(zhuǎn)化受體菌直接吸收來自供體菌的游離DNA片段，并把它整合到自己的基因組中，而獲得部分新的遺傳性狀的基因轉(zhuǎn)移過程，稱為轉(zhuǎn)化。轉(zhuǎn)化后的受體菌稱為轉(zhuǎn)化子（transformant）。來自供體菌的DNA片段稱為轉(zhuǎn)化因子第九十頁，共一百四十頁，2022年，8月28日轉(zhuǎn)化的過程雙鏈DNA分子與細胞表面感受位點（膜連DNA結合蛋白）進行可逆性結合。供體DNA片斷被吸入受體細胞。侵入受體細胞的供體DNA轉(zhuǎn)為單鏈，其中一條被降解。未被降解的一條鏈部分或整個與特異蛋白RecA結合，插入受體細胞的DNA中(插入部位染色體上的同源區(qū)段），形成一小段雜合DNA區(qū)段。雜合的DNA經(jīng)復制可以形成親代類型和重組類型的DNA,導致轉(zhuǎn)化細胞的形成與表達。第九十一頁，共一百四十頁，2022年，8月28日第九十二頁，共一百四十頁，2022年，8月28日自然轉(zhuǎn)化過程（野生型）營養(yǎng)缺陷型的His—組氨酸Trp—色氨酸降解第九十三頁，共一百四十頁，2022年，8月28日轉(zhuǎn)染把噬菌體或其它病毒的DNA（或RNA）抽提出來，讓它去感染感受態(tài)的宿主細胞，并進而產(chǎn)生正常的噬菌體或病毒的后代，這種現(xiàn)象稱為轉(zhuǎn)染（transfection）。

第九十四頁，共一百四十頁，2022年，8月28日（二）轉(zhuǎn)導（Transduction）借助缺陷噬菌體為媒介，把供體細胞中DNA片段攜帶到受體細胞中，從而使后者獲得前者部分遺傳性狀的現(xiàn)象，稱轉(zhuǎn)導。獲得新遺傳性狀的受體細胞稱為轉(zhuǎn)導子（transductant）。轉(zhuǎn)導過程不需要細胞接觸，而是以噬菌體為載體什么是缺陷噬菌體？第九十五頁，共一百四十頁，2022年，8月28日轉(zhuǎn)導主要分為：

完全普遍性轉(zhuǎn)導普遍性轉(zhuǎn)導

流產(chǎn)普遍性轉(zhuǎn)導

低頻局限性轉(zhuǎn)導局限性轉(zhuǎn)導

高頻局限性轉(zhuǎn)導第九十六頁，共一百四十頁，2022年，8月28日（1)

普遍性轉(zhuǎn)導

（Generalizedtransduction）定義：由于完全缺陷型噬菌體攜帶了供體菌染色體片段，當它去感染受體菌時，使后者獲得這部分遺傳性狀的現(xiàn)象稱為普遍性轉(zhuǎn)導第九十七頁，共一百四十頁，2022年，8月28日完全普遍轉(zhuǎn)導證明實驗

供體菌→野生型（鼠傷寒沙門氏菌

）受體菌→各種營養(yǎng)缺陷型完全缺陷型噬菌體----P22，感染復數(shù)<1特點：供體的任何基因都有可能進入受體細胞第九十八頁，共一百四十頁，2022年，8月28日A株菌:trp-his＋B株菌:

trp＋his-U型管實驗燒結玻璃隔板第九十九頁，共一百四十頁，2022年，8月28日缺陷噬菌體第一百頁，共一百四十頁，2022年，8月28日流產(chǎn)普遍轉(zhuǎn)導定義：經(jīng)轉(zhuǎn)導噬菌體的媒介而獲得的供體菌DNA片段的受體菌，這段DNA片段在受體菌內(nèi)不進行交換、整合和復制，也不消失，而進行轉(zhuǎn)錄，翻譯和性狀表達。結果：流產(chǎn)轉(zhuǎn)導后，細胞分裂，外源DNA片段分配到一個子細胞中，另一個子細胞獲得外源DNA片段轉(zhuǎn)錄，翻譯而形成的少量酶。特征：微小菌落。第一百零一頁，共一百四十頁，2022年，8月28日流產(chǎn)轉(zhuǎn)導示意圖酶缺陷噬菌體DNA片段第一百零二頁，共一百四十頁，2022年，8月28日（2）局限性轉(zhuǎn)導

Restrictedtransduction是指通過部分缺陷的溫和噬菌體把供體菌的少數(shù)特定基因攜帶到受體菌中并獲得表達的轉(zhuǎn)導現(xiàn)象。第一百零三頁，共一百四十頁，2022年，8月28日（2）局限性轉(zhuǎn)導

Restrictedtransduction條件：供體菌----大腸桿菌K12（λ）溶源菌（野生型）受體菌-----生物素營養(yǎng)缺陷型（Bio-）或不能發(fā)酵半乳糖營養(yǎng)缺陷型（gal-）部分缺陷溫和性噬菌體----λd特點：只傳遞供體菌的少數(shù)特定基因第一百零四頁，共一百四十頁，2022年，8月28日正常噬菌體和轉(zhuǎn)導半乳糖（gal）的缺陷型噬菌體(dg)的形成過程

第一百零五頁，共一百四十頁，2022年，8月28日發(fā)生誤切頻率10–4~10–6因此形成轉(zhuǎn)導子的頻率低條件：感染復數(shù)m.o.i<1①低頻轉(zhuǎn)導：定義：指通過一般溶源菌釋放的噬菌體所進行的轉(zhuǎn)導，因其只能形成極少數(shù)轉(zhuǎn)導子，故稱低頻轉(zhuǎn)導。低頻轉(zhuǎn)導裂解物的形成第一百零六頁，共一百四十頁，2022年，8月28日②高頻轉(zhuǎn)導

定義：在局限轉(zhuǎn)導中，若對雙重溶源菌進行誘導，就會產(chǎn)生含50%左右的局限轉(zhuǎn)導噬菌體的高頻轉(zhuǎn)導裂解物，用這種裂解物去轉(zhuǎn)導受體菌，就可獲得高達50%的轉(zhuǎn)導子。條件：當感染復數(shù)m.o.I>1

受體菌變?yōu)殡p重溶源菌

E.coliK12(/dg)UV

①轉(zhuǎn)導噬菌體（

dg）50%

+②輔助噬菌體（

）50%再次侵染其他受體細胞

，m.o.I<1

侵染的50%受體菌變?yōu)檗D(zhuǎn)導子第一百零七頁，共一百四十頁，2022年，8月28日普遍性轉(zhuǎn)導和限制性轉(zhuǎn)導（低頻）的區(qū)別？？？部分缺陷噬菌體缺陷噬菌體第一百零八頁，共一百四十頁，2022年，8月28日（3）溶源轉(zhuǎn)變當溫和噬菌體感染宿主而使其發(fā)生溶源化時，因噬菌體的基因整合到宿主的核基因組上，而使后者獲得了除免疫性以外的新性狀的現(xiàn)象，稱為溶源轉(zhuǎn)變。性質(zhì)：表面上與轉(zhuǎn)導相似，而本質(zhì)上不同于轉(zhuǎn)導。

第一百零九頁，共一百四十頁，2022年，8月28日（3）溶源轉(zhuǎn)變區(qū)別：當宿主喪失其原噬菌體時，通過溶源轉(zhuǎn)變而獲得的新性狀也隨之消失溫和噬菌體不攜帶來自供體菌的外源基因，是噬菌體自身基因使宿主獲得新性狀溫和噬菌體是完整的，不是缺陷的獲得新性狀的是溶源化的宿主細胞，不是轉(zhuǎn)導子第一百一十頁，共一百四十頁，2022年，8月28日白喉棒桿菌：白喉毒素/溫和噬菌體肉毒梭菌：C型或D型肉毒毒素紅霉素鏈霉菌：合霉素合成和氣生菌絲形成-P4溫和噬菌體

第一百一十一頁，共一百四十頁，2022年，8月28日（三）接合供體與受體細胞直接接觸，借性菌毛傳遞DNA，在受體細胞中發(fā)生交換、整合，使之獲得供體菌的遺傳性狀的現(xiàn)象，稱為接合。通過接合而獲得新性狀的受體細胞就是接合子（conjugant）。第一百一十二頁，共一百四十頁，2022年，8月28日第一百一十三頁，共一百四十頁，2022年，8月28日1946年J.Lederberg等采用E.coli的兩株營養(yǎng)缺陷型進行實驗第一百一十四頁，共一百四十頁，2022年，8月28日細菌接合遺傳物質(zhì)的單方向轉(zhuǎn)移A菌（生物素和甲硫氨酸營養(yǎng)缺陷型）:met-thr+leu+Bio-B菌（蘇氨酸和亮氨酸營養(yǎng)缺陷型）:met+thr-leu-Bio+第一百一十五頁，共一百四十頁，2022年，8月28日細菌接合實驗Davis的U型管實驗Met：甲硫氨酸Bio：生物素Thr：蘇氨酸Leu：亮氨酸Thi：胸腺嘧啶第一百一十六頁，共一百四十頁，2022年，8月28日大腸桿菌的接合第一百一十七頁，共一百四十頁，2022年，8月28日F質(zhì)粒第一百一十八頁，共一百四十頁，2022年，8月28日大腸桿菌“接合”涉及到的菌株F+（雄性）菌株：含游離的F因子1-4個，有性菌毛1-4根Hfr（高頻重組）菌株：含整合的F因子，有性菌毛，

Fˊ菌株：介于F+菌株與Hfr菌株之間，細胞中有游離的、帶小段染色體基因的環(huán)狀F因子

F–（雌性）菌株：沒有F因子，無性菌毛第一百一十九頁，共一百四十頁，2022年，8月28日第一百二十頁，共一百四十頁，2022年，8月28日F因子特點F＋細菌可以把F因子傳給后代。F＋細菌經(jīng)吖啶橙處理F因子丟失，丟失后不在出現(xiàn)。F＋可以和F－雜交，而不能和F＋雜交。F＋和F－雜交后代皆為F＋，而且可以10－7頻率獲得重組體后代。第一百二十一頁，共一百四十頁，2022年，8月28日（1）F+與F-菌株的接合第一百二十二頁，共一百四十頁，2022年，8月28日（2）Hfr與F-的接合第一百二十三頁，共一百四十頁，2022年，8月28日（3）F菌株與F-菌株的接合色氨酸基因第一百二十四頁，共一百四十頁，2022年，8月28日F＋，Hfr，F(xiàn)的接合對照第一百二十五頁，共一百四十頁，2022年，8月28日細菌的遺傳重組Transformation（轉(zhuǎn)化）,Conjugation（接合）,Transduction（轉(zhuǎn)導）（質(zhì)粒）（噬菌體）第一百二十六頁，共一百四十頁，2022年，8月28日（四）原生質(zhì)體融合原生質(zhì)體融合是通過人工方法，使遺傳性狀不同的兩個