SPE選擇使用指南目錄SPE基本內(nèi)涵SPE的裝置及操作SPE柱固定相的介紹SPE柱的選擇SPE(solidphaseextraction)基本原理利用固定相將液體樣品中的待測(cè)組分吸附，與樣品中基體和干擾組分分離，然后用洗脫液洗脫，達(dá)到分離或富集待測(cè)組分目的。有時(shí)候，可以讓感興趣的組分（分析物）直接通過固定相而不被保留，同時(shí)大部分干擾物被保留在固定相上，從而得到分離。固相萃取過程固相萃取過程注意事項(xiàng)SPE柱預(yù)處理/平衡淋洗和洗脫過程淋洗溶劑必須洗掉盡量多的干擾組分，但不能強(qiáng)到可以洗脫任何一個(gè)分析物的程度。洗脫劑強(qiáng)度要合適，洗脫溶劑用量一般0.5-0.8ml/100mg固定相固相萃取技術(shù)的重要用途目標(biāo)物的萃取，樣品的凈化。微量目標(biāo)物的富集。基質(zhì)的轉(zhuǎn)換－如將目標(biāo)物從水相轉(zhuǎn)換為有機(jī)相。除鹽－特別是在蛋白質(zhì)純化過程中。衍生化－分析物吸附在SPE柱上進(jìn)行衍生，然后洗脫。分組－按照目標(biāo)物的不同性質(zhì)分步洗脫。SPE與HPLC比較SPE的基本原理和HPLC相同但目的不同。HPLC是要在短時(shí)間內(nèi)將各化和物分離并保持好的峰形。SPE是要從母液中分離人們感興趣的化合物并將其濃縮。目前用的最廣泛的是鍵合硅膠柱(BONDEDSILICACOLUNM)及聚合物柱。SPE與HPLC分辨率比較SPE的固定相吸附型固定相：采用極性較強(qiáng)的硅膠、硅藻土和氧化鋁等吸附劑作為固定相填料。鍵合硅膠固定相：通過化學(xué)反應(yīng)的方法把各種有機(jī)官能團(tuán)共價(jià)鍵合到硅膠表面的游離羥基上。有機(jī)聚合樹脂及其鍵合固定相：有機(jī)聚合物吸附劑多為苯乙烯-二乙烯基苯共聚物，聚甲基丙烯酸甲酯等，也可將某些官能團(tuán)鍵合到樹脂上，如－SO3H，－COOH。鍵合硅膠固定相正相：鍵合基團(tuán)為CN(腈基)、DIOL（二醇基）、NH2（氨基）可作為正相的固定相。正相固定相是極性的，用來保留極性物質(zhì)。反相：C18（十八烷基）、C8（辛烷基）、C2（乙基）、CH（環(huán)己烷基）、PH（苯基）都是反相固定相。反相固定相用來保留非極性或弱極性的分析物。離子交換：鍵合基團(tuán)為丙磺酸基（PRS）、SCX(苯磺酸基)、二乙基丙基胺（DEA）、三甲基丙基胺（SAX）可作為離子交換固定相。鍵合硅膠非極性固定相萃取柱硅膠鍵合C18柱（octadecyl-silica，ODS）可以從強(qiáng)極性的溶劑中吸附非極性到中等極性的化合物應(yīng)用：中等極性到非極性化合物,如抗生素、咖啡因、藥物、染料、芳香油、脂溶性維生素、殺菌劑、除草劑、農(nóng)藥、碳水化合物、苯酚、類固醇、表面活性劑、茶堿等。非極性吸附能力最強(qiáng)，選擇性較差。由于樣品中的鹽在C18柱上沒有保留，因此可作為優(yōu)秀的除鹽柱。常用非極性固定相C8：與C18相似，適合于非極性到中等極性的化合物，對(duì)非極性化和物的保留較C18稍弱。-苯基（PH柱）：與C8類似，但選擇性更好，保留時(shí)間更短。-C4：疏水性弱，適合于多肽和蛋白質(zhì)的萃取。-環(huán)己基（CH柱）：與苯基柱類似?；衔锏臉O性和吸附劑的極性越接近，產(chǎn)生的吸附越強(qiáng)。C8材料的吸附作用鍵合硅膠極性固定相萃取柱-NH2（氨基）：較強(qiáng)的氫鍵結(jié)合能力，對(duì)某些多官能團(tuán)化合物如甾體、強(qiáng)心甙等有較好的分離能力。

a)正相萃取:適用非極性樣品溶液中吸附極性化合物。

b)弱陰離子交換萃取:適用于水溶液樣品中碳水化合物、弱陰離子和有機(jī)酸化合物。-CN（氰基）：a)正相萃?。哼m用非極性樣品溶液中吸附極性化合物，如酚類，類固醇、b)反相萃?。哼m用于水溶液樣品中等極性的化合物。-Diol(二醇基):正相萃取，適用于分離有機(jī)酸、甾體和蛋白質(zhì)。形成氫鍵的強(qiáng)弱:-NH2>-CN>Diol小結(jié)

主要由極性作用力起作用，包括：氫鍵,偶極力/偶極力,誘導(dǎo)偶極力,如：-OH,-NH3,-SO3,羰基,芳香環(huán)及含氧,氮,硫,磷等雜原子的基團(tuán)。非極性環(huán)境有利于吸附劑和分析物之間的極性作用力。極性環(huán)境有利于破壞吸附劑和分析物之間的極性作用力。環(huán)境離子強(qiáng)度大也不利于吸附劑和分析物之間的極性作用力。硅膠鍵合離子交換柱填充劑為硅膠基質(zhì)的離子交換官能團(tuán)有：季胺、氨基、二氨基、苯磺酸基、羧基等。對(duì)于酸性化合物，如有機(jī)酸、無機(jī)陰離子、酸性蛋白等，一般采用陰離子交換SPE柱。對(duì)于堿性化合物，如有機(jī)胺、金屬離子、兒茶酚胺和堿性蛋白等，采用陽離子交換SPE柱。主要的硅膠鍵合離子柱SAX柱（季銨鹽柱）：是最強(qiáng)的陰離子交換劑，，pKa>14，這種填料在溶液中總是帶正電，對(duì)于弱陰離子是很好的SPE填料，如羧酸類化合物。WAX柱（伯銨鹽柱）：是弱陰離子交換劑，適用于強(qiáng)陰離子和弱陰離子的分離回收。SCX柱（丙基苯磺酸基柱）：是強(qiáng)陽離子交換劑，具有很低的pKa值（<<1），主要作用力是非極性、陽離子交換，目標(biāo)化合物可以用一種能夠同時(shí)破壞非極性及離子作用力的溶劑洗脫。如甲醇/HCl。WCX柱（羧甲基柱）：是弱陽離子交換劑，適用于強(qiáng)陽離子和弱陽離子的分離回收。小結(jié)具有可離子化功能團(tuán)的化合物可以通過離子交換劑從低離子強(qiáng)度（<0.1M）的水溶液中萃取出來。pH值對(duì)離子作用力影響很大。環(huán)境的離子強(qiáng)度對(duì)目標(biāo)化合物的吸附影響很大。選擇SPE萃取機(jī)理反相柱非極性化合物正相柱極性化合物離子交換柱可生成陽離子/可生成陰離子化合物

在選擇了萃取機(jī)理后，就要選擇SPE填料。對(duì)一個(gè)分析，常常有多于一種SPE填料可以選用。為了縮短建立方法的時(shí)間，可以平行進(jìn)行多種同類的SPE柱萃取，如C18、C8、CN、苯基柱，以找出最佳的填料。選擇SPE柱PH對(duì)SPE的影響反向SPE柱：如果要吸附分析物，柱子及樣品的pH應(yīng)該調(diào)節(jié)到有利分析物被吸附的范圍。相反，也可以調(diào)節(jié)pH使雜質(zhì)被吸附在SPE柱上，而分析物則通過SPE柱沒有保留。正相SPE柱：由于正相SPE柱使用的都是有機(jī)溶劑，所以pH在