尿樣中氧氟沙星的含量測(cè)定

組員：胡帆、周凡漪實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?.分析臨床上廣泛用于治療泌尿系統(tǒng)，呼吸系統(tǒng)感染的藥物氧氟沙星。2.比較LC-UV與LC-熒光分析氧氟沙星的區(qū)別。背景資料：

氧氟沙星是第三代喹諾酮類新型廣譜抗菌藥,并具分布廣,吸收好,半衰期長(zhǎng)等特點(diǎn),臨床廣泛應(yīng)用具有廣譜抗菌作用。LC-UV法分析尿樣中氧氟沙星的含量一、實(shí)驗(yàn)條件：1.1實(shí)驗(yàn)儀器Agilent高效液相色譜儀，G1314B-VWD紫外檢測(cè)器，色譜柱，量瓶1.2實(shí)驗(yàn)試劑氧氟沙星片劑，甲醇(色譜純)，尿樣，空白尿樣，HAc溶液1.3色譜條件色譜柱:C185μm(250mm×416mm)流動(dòng)相:甲醇/0.05%HAC=80：20流速:1ml/min進(jìn)樣量：20μl柱溫：室溫檢測(cè)波長(zhǎng)：在250～400nm處掃描，選取有最大吸收度處作為檢測(cè)波長(zhǎng)。實(shí)際過(guò)程中選用294nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。二、實(shí)驗(yàn)方法2.1尿液的預(yù)處理取空白尿樣和尿樣，13000r/min離心10min，取上清液經(jīng)0.45μm的水相濾膜過(guò)濾，保留濾液。2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

測(cè)定時(shí)，取標(biāo)準(zhǔn)液0.5，1，1.5，2，2.5ml,用流動(dòng)相稀釋于10ml量瓶，吸取20μl作為進(jìn)樣品，記錄色譜圖，以氧氟沙星標(biāo)準(zhǔn)濃度對(duì)峰面積進(jìn)行回歸，得到回歸方程。2.4空白尿樣的配制取空白尿液濾液1ml,用流動(dòng)相稀釋20倍，吸取20μl作為進(jìn)樣品。2.5尿樣的配制取尿液濾液1ml,用流動(dòng)相稀釋20倍，吸取20μl作為進(jìn)樣品。2.6進(jìn)樣先進(jìn)1針標(biāo)準(zhǔn)品觀察流動(dòng)相配置是否合適,合適后,進(jìn)1針空白尿樣觀察有無(wú)雜質(zhì)在測(cè)定波長(zhǎng)處影響左氧氟沙星的吸收,然后進(jìn)樣標(biāo)準(zhǔn)品與待測(cè)樣品,標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)樣5針來(lái)檢驗(yàn)儀器精密度。2.8精密度實(shí)驗(yàn)取濃度為0.5～2.5μg/ml的氧氟沙星標(biāo)準(zhǔn)品，1d內(nèi)重復(fù)測(cè)定5次,測(cè)得日內(nèi)RSD，隔日測(cè)定5次,測(cè)得日間RSD。紫外檢測(cè)測(cè)定尿液中左氧氟沙星的含量紫外檢測(cè)測(cè)定尿液中左氧氟沙星的含量，實(shí)驗(yàn)操作方法除檢測(cè)器設(shè)定與熒光檢測(cè)器不同外（檢測(cè)波長(zhǎng)：294nm），其余設(shè)置和操作均與熒光檢測(cè)時(shí)相同。三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果熒光法測(cè)定尿樣中左氧氧氟沙星濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線圖精密度日內(nèi)、日間RSD測(cè)量熒光法日內(nèi)RSD=2.6%日間RSD=3.3%紫外法日內(nèi)RSD=0.8%日間RSD=2.9%回收率實(shí)驗(yàn)回收率熒光98.7%、101.4%、101.2%；紫外99.6%、98.4%、99.1%。熒光法測(cè)定尿樣中排出左氧氟沙星量（g）-時(shí)間曲線

熒光法測(cè)定尿樣中排出左氧氟沙星的累計(jì)量（g）-時(shí)間曲線

紫外檢測(cè)測(cè)定尿樣中排出左氧氟沙星的累計(jì)量（g）-時(shí)間曲線

討論1、采用LC-UV法與LC-熒光法分別測(cè)定尿樣中氧氟沙星的含量，并且比較兩種方法測(cè)量結(jié)果的不同，因此要求測(cè)量過(guò)程具有對(duì)照性：待測(cè)樣品，標(biāo)準(zhǔn)品，空白樣品的濃度兩者均相同，流動(dòng)相也相同，都采用外標(biāo)法，但因?yàn)榉治龇椒ǖ牟煌?，檢測(cè)波長(zhǎng)不同。3、由于沒(méi)有標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照，在測(cè)定時(shí)以左氧氟沙星片作為標(biāo)準(zhǔn)品使用。而事前沒(méi)有對(duì)其中左氧氟沙星的實(shí)際含量進(jìn)行過(guò)標(biāo)定，也不能排除片劑中的其他成分（如輔料中的抗氧化劑等）對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。4、實(shí)驗(yàn)本來(lái)應(yīng)該統(tǒng)計(jì)每次的尿液量，計(jì)算出每次排尿中含有的左氧氟沙星的含量，然后制的排出藥物量-時(shí)間曲線，因?yàn)楸敬螌?shí)驗(yàn)中沒(méi)有精密的容器量尿液體積，只能大概估計(jì)尿液量