珍稀野生動(dòng)物血液組織等樣品的采集與管理摘要：目前珍稀野生動(dòng)物血液等組織資源并沒(méi)有得到很好的收集和保護(hù)，很大程度上，野生動(dòng)物資源正處于大量的浪費(fèi)中。關(guān)鍵詞：野生動(dòng)物樣品；采集保存；組織庫(kù)；管理中圖分類(lèi)號(hào)：s8589文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：a為文本通訊作者1引言成都動(dòng)物園是西南地區(qū)最大的珍稀野生動(dòng)物遺傳、分子生物學(xué)等科技研究基地，在珍惜野生動(dòng)物組織資源樣品采集、保存以及管理并不規(guī)范和系統(tǒng)，野生動(dòng)物資源保護(hù)做得并不好，為了保存珍稀野生動(dòng)物資源，建立了珍稀野生動(dòng)物資源組織庫(kù)，通過(guò)對(duì)野生動(dòng)物的血液、組織等樣本的收集、保存和研究，對(duì)其進(jìn)行科學(xué)的管理和控制，為我園這個(gè)珍稀野生動(dòng)物遺傳、分子生物學(xué)等科技研究基地提供充足的材料支持，對(duì)今后我園的珍稀野生動(dòng)物生物遺傳、分子生物學(xué)科技研究提供了先決條件和巡航保證。材料與方法21時(shí)間、地點(diǎn)、材料及設(shè)備于2009年12月?2011年12月在成都動(dòng)物園完成；成都動(dòng)物園內(nèi)，各類(lèi)珍稀野生動(dòng)物；液氮罐2個(gè)，容量管若干。22方法221液氮保存與管理與傳統(tǒng)的血液、細(xì)胞組織冰箱冷凍保存有所不同，此方法用超低溫的液氮保存的方式，液氮的溫度大概為零下190°C左右，這可以讓保存的樣品迅速的達(dá)到冷凍溫度，更有效保存樣品質(zhì)量，同時(shí)有效延長(zhǎng)了樣品所保存的時(shí)間，提高遺傳、分子生物學(xué)科研提取的純度及成功率。方法由以下幾點(diǎn)：2211采樣取組織樣品（1）活體在珍稀動(dòng)物安全保定狀態(tài)下進(jìn)行，部位沒(méi)有太多要求，皮膚、受傷部位組織等均可。采后裝于冷凍管中并立即放在液氮中。（2）死亡動(dòng)物（最好為國(guó)家一、二級(jí)保護(hù)動(dòng)物）。采取主要部位包括肝臟、心、肌肉、腎等，裝于冷凍管中，然后儲(chǔ)存于液氮罐中。2212樣品保存（1）負(fù)責(zé)將樣品逐個(gè)編號(hào)、分類(lèi)，保存于液氮罐中，并在液氮罐中每個(gè)掛鉤上標(biāo)明編號(hào)位置，以便以后查找。（2）編輯成都動(dòng)物園野生動(dòng)物細(xì)胞與組織材料，保存樣品電子表格，并將每次成功采集到的樣品逐個(gè)填入電子表格，保存于電腦中。（3）編輯成都動(dòng)物園野生動(dòng)物細(xì)胞與組織材料保存樣品手寫(xiě)表格，做到每次采集后都登記，與電腦中的電子表格對(duì)應(yīng)無(wú)誤。（4）負(fù)責(zé)每月分段5?6次的檢查液氮的揮發(fā)狀況，并及時(shí)聯(lián)系液氮廠商添加液氮，保證樣品不被損壞。（5）檢查冷凍管和配套器具的庫(kù)存數(shù)量，若出現(xiàn)不足時(shí)，及時(shí)聯(lián)系相關(guān)廠商購(gòu)買(mǎi)補(bǔ)缺。222福爾馬林溶液保存與管理福爾馬林的使用涵蓋之層面其實(shí)相當(dāng)廣泛，其中因甲醛能與蛋白質(zhì)的氨基結(jié)合，使蛋白質(zhì)凝固，因此在醫(yī)藥上可做為檢驗(yàn)時(shí)的組織固定劑等。本項(xiàng)目就根據(jù)福爾馬林的這一特性，對(duì)珍稀野生動(dòng)物組織樣品進(jìn)行固定保存，極大程度地緩解了液氮保存樣品數(shù)量有限，樣品浪費(fèi)較大的弊端。方法由以下幾點(diǎn)開(kāi)展工作：2221取組織樣品（1）活體對(duì)從生病動(dòng)物身上取下的病理組織，將其放入容量管中，加入福爾馬林固定，放入樣品柜的試管架中。（2）死亡動(dòng)物，采取主要部位包括肝臟、心臟、肺臟、腎臟、脾臟等，放入容量管中，加入福爾馬林固定，放入樣品柜的試管架中。每次多采集一份組織，裝入塑料封口袋中，加入福爾馬林固定，做病理切片備用。2222樣品保存（1）負(fù)責(zé)將樣品逐個(gè)編號(hào)、分類(lèi)，保存于樣品柜中，容量管上標(biāo)明該管中保存的樣品名稱(chēng)，以便今后使用。（2）編輯成都動(dòng)物園野生動(dòng)物細(xì)胞與組織材料保存樣品電子表格，并將每次成功采集到的樣品逐個(gè)填入電子表格，保存于電腦中。（3）編輯成都動(dòng)物園野生動(dòng)物細(xì)胞與組織材料保存樣品手寫(xiě)表格，做到每次采集后都登記，與電腦中的電子表格對(duì)應(yīng)無(wú)誤。（4）購(gòu)買(mǎi)相應(yīng)的保存配套設(shè)施與器具，確保保存管理工作的順利進(jìn)行。結(jié)果31收集保存樣品數(shù)量在這兩年時(shí)間內(nèi)基本制定了采樣的基本步驟，操作規(guī)程，每次采集樣品的數(shù)量，定為2?3個(gè)為最佳。共采集到液氮保存珍稀野生動(dòng)物血液組織樣品總數(shù)1024個(gè)，其中血液樣品353個(gè)，組織樣品671個(gè)；福爾馬林保存樣品394個(gè)，兩種組織樣品保存方法共保存樣品達(dá)1428個(gè)，并且現(xiàn)在已經(jīng)合理有序的管理起來(lái)。2肝癌組織庫(kù)管理方法的建立及運(yùn)作樣品庫(kù)一共提取液氮保存樣品次數(shù)4次，共計(jì)樣品個(gè)數(shù)16個(gè)，其中血液樣品10個(gè)，其它組織樣品6個(gè)；提取福爾馬林保存樣品1次，共計(jì)樣品個(gè)數(shù)3個(gè)，各樣品提取時(shí)間和提取人均記錄于及excel2003軟件樣品庫(kù)一覽表中，整個(gè)野生動(dòng)物血液等組織樣品保存管理方法的應(yīng)用基本建立，并運(yùn)作良好，對(duì)未來(lái)的動(dòng)物樣品采集管理具有較強(qiáng)的可持續(xù)性。討論成都動(dòng)物園長(zhǎng)期以來(lái)珍稀野生動(dòng)物血液等組織資源并沒(méi)有得到很好的收集和保護(hù)，很大程度上，野生動(dòng)物資源正處于大量的浪費(fèi)中，造成我園珍稀野生動(dòng)物遺傳、分子生物學(xué)等領(lǐng)域的科技研究過(guò)程中因樣品材料不足，而導(dǎo)致科研無(wú)法進(jìn)行。珍稀野生動(dòng)物血液等組織采集與管理方法以及數(shù)據(jù)庫(kù)的建立具有重要意義，建庫(kù)的目的是采集、保存珍稀野生動(dòng)物的組織和血液標(biāo)本，并對(duì)其進(jìn)行科學(xué)的管理和控制，一方面對(duì)珍稀野生動(dòng)物物種得以記錄、保存，同時(shí)可向我園廣大科研工作者提供組織標(biāo)本，滿足科研項(xiàng)目的需求，最終對(duì)野生動(dòng)物的保護(hù)工作作出貢獻(xiàn)。參考文獻(xiàn)[1]萬(wàn)濤，周寧新，黃志強(qiáng).膽管癌新鮮組織標(biāo)本庫(kù)建立與鑒定[j].中國(guó)普外基礎(chǔ)與臨床雜志，2005,12(04)：329-332.[2]葉鐵真，鄭錦濤，張曉紅，等.兒童腫瘤標(biāo)本庫(kù)標(biāo)本信息管理系統(tǒng)的建立和應(yīng)用[j].中國(guó)小兒血液，2003,8(04)：183-185.李莉華，魏福祥，王豐，等.腫瘤庫(kù)(用于分子生物學(xué)研究)的建立及管理[j].腫瘤，2004，24(06)：578-580.陳偉，林葉，侯寶華，等.規(guī)范化網(wǎng)絡(luò)信息系統(tǒng)支持的肝癌標(biāo)本庫(kù)建立探討[j].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2007，23(06)：826-827.季加孚.北