第十四章肝臟功能試驗第一頁，共三十六頁，2022年，8月28日課時目標(biāo)

了解肝功能試驗的意義及評價熟悉血氨、膽汁酸測定的意義掌握膽紅素的原理注意事項及主要臨床意義第二頁，共三十六頁，2022年，8月28日第一節(jié)概述肝功能檢驗是臨床生化檢驗的重要內(nèi)容之一，圍繞肝的生理功能，從物質(zhì)代謝、生物轉(zhuǎn)化、膽汁酸分泌、膽色素排泄和血清酶學(xué)等方面進(jìn)行肝功能的檢測與評價來了解肝臟功能，這對肝膽疾病的診斷、預(yù)后判斷、病程監(jiān)測及療效觀察等都具有重要作用。

第三頁，共三十六頁，2022年，8月28日一、肝臟的組織結(jié)構(gòu)特點

雙重血液供應(yīng)肝

解剖學(xué)特點

組特雙重輸出通道織點有大量微絨毛結(jié)具有較高的通透性構(gòu)組織結(jié)構(gòu)特點豐富的線粒體組織學(xué)特點有豐富的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)

眾多酶系肝細(xì)胞再生

第四頁，共三十六頁，2022年，8月28日二、主要代謝營養(yǎng)物質(zhì)的代謝轉(zhuǎn)變非營養(yǎng)物質(zhì)的轉(zhuǎn)化膽汁酸分泌及膽色素排泄第五頁，共三十六頁，2022年，8月28日第二節(jié)血氨測定人體內(nèi)血氨（Plasma

ammonia）含量極微，但氨對人體有毒，能影響神經(jīng)細(xì)胞的新陳代謝。血氨的來源增加和去路減少，都會引起血氨增高。血氨測定對肝性腦病的診斷和鑒別診斷有極其重要的意義。

一、生化特性氨是氨基酸和胺類分解的產(chǎn)物。血液中氨的來源主要為腸道中細(xì)菌分解尿素和由氨基酸脫氨所生成。此外，組織細(xì)胞中有多種脫氨酶，能使蛋白質(zhì)、核苷酸脫氨而生成氨。第六頁，共三十六頁，2022年，8月28日二、氨的代謝在正常情況下，氨的主要去路是在肝臟通過鳥氨酸循環(huán)合成尿素。此外，腦和腎臟等器官的氨與谷氨酸作用生成谷氨酰胺后被運輸?shù)礁闻K，在肝臟轉(zhuǎn)變成尿素或其它含氮化合物后由腎臟排出體外，或形成銨鹽隨尿排出。第七頁，共三十六頁，2022年，8月28日

三、檢測方法

氨測定的方法有直接法（酶法和氨電極法），直接測定；間接法（微量擴散法、離子交換法等）先從全血中分離出氨，在進(jìn)行測定。目前應(yīng)用最多的是酶法（谷氨酸脫氫酶）直接測定法。第八頁，共三十六頁，2022年，8月28日四、注意事項

血氨測定的準(zhǔn)確性在很大程度上取決于標(biāo)本的留取收集。注意事項：（1）不能用血清做標(biāo)本。（2）抗凝劑可用非銨鹽的肝素、EDTA和草酸鹽等。（3）血標(biāo)本，低溫離心5min，30min內(nèi)檢測完成。（4）標(biāo)本應(yīng)禁止溶血。（5）密封防止環(huán)境中的氨污染標(biāo)本。尿氨也可以測定。尿在無防腐劑條件下收集，保持低溫和密封。

第九頁，共三十六頁，2022年，8月28日四、臨床意義

【參考值】

18

～72μmol/L

umol/L引起血氨增高的原因有：重癥肝病時尿素生成功能低下、門靜脈側(cè)支循環(huán)增加、先天性鳥氨酸循環(huán)的有關(guān)酶缺乏等。高血氨有神經(jīng)毒性，容易引起肝性腦病（肝昏迷）。因此，血氨的測定在診斷和治療肝性腦病中有重要作用。當(dāng)血氨增高時，氨能降低大腦內(nèi)的ATP水平，進(jìn)而影響神經(jīng)元的功能。其他原因引起的血氨增高有初生兒不明原因的一過性血氨增高、靜脈給氧、尿路感染、休克、白血病、心衰等一過性的血氨增高，以及Reye綜合癥和鳥氨酸氨基甲酰酶缺乏癥等。

第十頁，共三十六頁，2022年，8月28日第三節(jié)血清膽汁酸測定一、膽汁酸的來源及代謝

膽汁酸是膽固醇在肝臟分解代謝的產(chǎn)物，它由肝臟分泌到膽汁中，并隨膽汁排入腸腔，作用于脂肪的消化和吸收，抑制膽結(jié)石的生成。健康人肝細(xì)胞能有效地從血液中攝取膽汁酸，因此循環(huán)血液中膽汁酸含量很微。第十一頁，共三十六頁，2022年，8月28日1、膽汁酸代謝膽汁的來源：肝膽汁膽囊膽汁十二指腸膽汁的成分：水/膽汁酸（鹽）、卵磷脂、蛋白質(zhì)、脂肪酸和膽固醇第十二頁，共三十六頁，2022年，8月28日（2）膽汁酸肝腸循環(huán)：（3）膽汁酸的功能：①促進(jìn)脂類消化②促進(jìn)脂類吸收③抑制膽固醇從膽汁中析出沉淀游離型膽汁酸結(jié)合型膽汁酸第十三頁，共三十六頁，2022年，8月28日三、血清膽汁酸測定方法及評價高效液相色譜法放射免疫分析法酶免疫分析法酶比色法

測定方法第十四頁，共三十六頁，2022年，8月28日(1)酶比色法測定原理

3α-HSD

NADH+NBT甲jie（藍(lán)色化合物)3-氧-5β類固醇+NAD+3-氧-5β類固醇+NADH

黃遞酶△4-DH酶比色法

膽汁酸+NAD+3-氧-5β類固醇+NADH

第十五頁，共三十六頁，2022年，8月28日酶比色測定法評價：

優(yōu)點:

快速、簡便、準(zhǔn)確、可靠和適用

缺點:試劑價貴、不易保存。對酶量的要

求嚴(yán)格，易產(chǎn)生誤差。此外，標(biāo)準(zhǔn)品的制備非常重要。常采用甘氨膽酸溶入小牛血清中制成凍干品。

第十六頁，共三十六頁，2022年，8月28日【參考范圍】

0～12μmol/L

(成人空腹)【臨床意義】

反映肝實質(zhì)性損傷的重要標(biāo)志。各種類型的肝炎、肝硬化、原發(fā)性肝癌、膽汁淤積、酒精性肝病及急慢性膽道阻塞等。尤其適合慢性肝炎預(yù)后評估及早期肝硬化的診斷。慢性活動性肝炎常>20μmo1/L，肝硬化常>3Oμmol/L。肺心病急性期、右心衰、肝瘀血時也可增高。

任何引起肝細(xì)胞損傷的病理過程都可能引起血中膽汁酸升高.不僅用于臨床診斷，還能反映病情發(fā)展和評估預(yù)后。特別適用于可疑有肝病但其它生化試驗正?；蜉p度異常的病人的診斷。

第十七頁，共三十六頁，2022年，8月28日第四節(jié)血清膽紅素測定一、膽紅素的來源及代謝1、來源正常人每日生成膽紅素250～350mg；由衰老紅細(xì)胞破壞、降解而來——85%；旁路膽紅素——15%：非血紅蛋白的血紅素蛋白質(zhì)（如細(xì)胞色素P450、細(xì)胞色素b5、過氧化氫酶等）的血紅素輔基的分解無效造血所產(chǎn)生的膽紅素第十八頁，共三十六頁，2022年，8月28日2、膽紅素代謝膽色素

尿膽素原

糞膽素原

尿膽素糞膽素膽綠素

膽紅素結(jié)合膽紅素為水溶性，可通過腎小球濾過從尿中排出。正常情況下，膽紅素進(jìn)入與離開血循環(huán)保持動態(tài)的平衡，因此血中膽紅素的濃度保持相對恒定。膽素原第十九頁，共三十六頁，2022年，8月28日

膽綠素還原酶亞鐵血紅素溶血微粒體亞鐵血紅素氧化酶一氧化碳鐵膽紅素膽綠素NADPH+H+NADP+(250~300mg/天)紅細(xì)胞第二十頁，共三十六頁，2022年，8月28日膽紅素在血液中的運輸在血漿內(nèi)主要以膽紅素-白蛋白復(fù)合體的形式存在和運輸，α1-球蛋白也可與膽紅素結(jié)合；一般說白蛋白與膽紅素的結(jié)合是可逆的；由于膽紅素與白蛋白結(jié)合成復(fù)合體，一方面改變了膽紅素的脂溶性，另一方面又限制了它自由通過各種生物膜的能力，不致有大量游離膽紅素進(jìn)入組織細(xì)胞而產(chǎn)生毒性作用。第二十一頁，共三十六頁，2022年，8月28日膽紅素的排泄及腸肝循環(huán)

結(jié)合膽紅素和其他膽汁成分分泌到膽小管，在腸道細(xì)菌作用使膽紅素還原成膽素原等物質(zhì)，膽素原接觸空氣分別被氧化成為尿膽原等，大部分隨糞便排出。10%～20%經(jīng)回腸末端通過門靜脈血回到肝，轉(zhuǎn)變?yōu)槟懠t素或未經(jīng)轉(zhuǎn)變，再隨膽汁排入腸內(nèi)，此過程稱“腸肝循環(huán)”；從腸道重吸收的尿膽原，僅極少部分進(jìn)入體循環(huán)，經(jīng)腎臟排出。第二十二頁，共三十六頁，2022年，8月28日二、膽紅素的類型未結(jié)合膽紅素又稱“間接反應(yīng)膽紅素”或“間接膽紅素”。結(jié)合膽紅素又稱“直接反應(yīng)膽紅素”或“直接膽紅素”。δ-膽紅素與重氮反應(yīng)呈直接陽性

第二十三頁，共三十六頁，2022年，8月28日

間接膽紅素（UCB）直接膽紅素（CB）937否，不從尿中排出是，可從尿中排出【UCB和CB的特點和理化性質(zhì)】

水溶性：結(jié)構(gòu)特點：與葡萄糖醛酸結(jié)合游離膽紅素或膽紅素-白蛋白分子量：585重氮反應(yīng)：間接反應(yīng)直接反應(yīng)透過生物膜：易，有毒性不易第二十四頁，共三十六頁，2022年，8月28日三、膽紅素測定常用方法—改良J-G法—膽紅素氧化酶第二十五頁，共三十六頁，2022年，8月28日原理及評價改良J-G法原理：血清與咖啡因試劑混合后，加入中氮試劑，生成紫紅色偶氮膽紅素，最后加入強堿性酒石酸鈉溶液，使不穩(wěn)定的紫色偶氮膽紅素在咖啡因存在條件下轉(zhuǎn)化成穩(wěn)定的藍(lán)色偶氮膽紅素。波長660nm評價：靈敏度高，線性范圍寬，顯色穩(wěn)定精確度較好，干擾少。是我國醫(yī)學(xué)檢驗的推薦方法。第二十六頁，共三十六頁，2022年，8月28日實驗操作

加入物（mL）總膽紅素管結(jié)合膽紅素管空白管血清0.2

0.2

0.2咖啡因試劑

1.6—

1.6對氨基苯磺酸

——

0.4重氮試劑

0.4

0.4

—第二十七頁，共三十六頁，2022年，8月28日

膽紅素氧化酶及評價原理：總膽紅素+1/2O2膽紅素氧化酶法

膽綠素+H2O膽綠素+O2淡紫色化合物膽紅素在450nm波長處，吸光度的下降與濃度成正比。方法評價：靈敏度高，干擾少，準(zhǔn)確度好，線性范圍寬。第二十八頁，共三十六頁，2022年，8月28日試劑及作用方法

作用改良J-G法苯甲酸鈉—咖啡因加速劑乙酸鈉緩沖液保持反應(yīng)pH值疊氮鈉終止反應(yīng)氧化酶法膽紅素氧化酶催化劑第二十九頁，共三十六頁，2022年，8月28日四、注意事項

空腹采血重氮試劑現(xiàn)配現(xiàn)用10~37C范圍測定內(nèi)段時間呈色穩(wěn)定膽紅素標(biāo)準(zhǔn)品濃度要純第三十頁，共三十六頁，2022年，8月28日膽紅素氧化酶BOD濃度的選擇BOD的最適pH其他干擾因素第三十一頁，共三十六頁，2022年，8月28日五、臨床意義

【參考值】

血清總膽紅素：5.1～17.1μmol／L血清結(jié)合膽紅素：0～3.4μmol／L

【臨床意義】

血清總膽紅素測定對診斷黃疸幾判斷黃疸程度有非常重要的意義，總膽素紅素〉17.1μmol／L為隱形黃疸；〉34.0μmol／L時皮膚粘膜出現(xiàn)黃染，臨床稱黃疸。

根據(jù)血清膽紅素分類，判斷黃疽類型。溶血性黃疸：血清總膽紅素和以間接血清總膽紅素增多為主，例如溶血性貧血，嚴(yán)重大面積燒傷等；第三十二頁，共三十六頁，2022年，8月28日

梗阻性黃疸：血清總膽紅素和以直接膽紅素增高為主，例如膽石癥，尿膽原可呈間歇性減少或消失，如為腫瘤壓迫所致，尿膽原可進(jìn)行性減少或消失；肝細(xì)胞性黃疸：血清總膽紅