學(xué)習(xí)目標(biāo)核心素養(yǎng)1.舉例說(shuō)明通過(guò)調(diào)整培養(yǎng)基的配方可有目的地培養(yǎng)某種微生物。2．概述稀釋涂布平板法和顯微鏡計(jì)數(shù)法是測(cè)定微生物數(shù)量的常用方法。1.生命觀念：各類微生物都能適應(yīng)其生活環(huán)境。2．科學(xué)思維：根據(jù)微生物的代謝類型配制選擇培養(yǎng)基。3．科學(xué)探究：討論土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)的方法。第2節(jié)微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用二微生物的選擇培養(yǎng)和計(jì)數(shù)

思考：如何從自然界中分離出生產(chǎn)所需要的特定微生物？

1973年，科學(xué)家從美國(guó)黃石國(guó)家公園的熱泉中篩選出水生棲熱菌，進(jìn)而從這種菌中提取出耐高溫的DNA聚合酶。1、實(shí)例：

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）是一種在體外擴(kuò)增DNA片段的技術(shù)，此項(xiàng)技術(shù)要求使用耐高溫的DNA聚合酶。尋找耐高溫的DNA聚合酶

篩選原因：水生棲熱菌能在70-80℃高溫條件下生存，而絕大多數(shù)微生物在此條件下不能生存。一、選擇培養(yǎng)基美國(guó)黃石公園2.概念：

在微生物學(xué)中，將允許特定種類的微生物生長(zhǎng)，同時(shí)抑制或阻止其他種類微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基稱為選擇培養(yǎng)基。3.原理：

人為提供_________________的條件（包括_____、_____和_____等），同時(shí)___________________________。有利于目的菌生長(zhǎng)抑制或阻止其他微生物的生長(zhǎng)營(yíng)養(yǎng)溫度pH4.實(shí)驗(yàn)室中微生物的篩選：分離酵母菌、霉菌等真菌分離固氮菌分離自養(yǎng)型微生物④加高濃度食鹽金黃色葡萄球菌⑤金黃色葡萄球菌能消除石油污染的微生物③不加含碳有機(jī)物的無(wú)碳培養(yǎng)基②不加氮源的無(wú)氮培養(yǎng)基①加入青霉素的培養(yǎng)基思考：那么如果讓你分離土壤中分解尿素的細(xì)菌，你應(yīng)該怎么設(shè)計(jì)呢？思考討論：選擇培養(yǎng)基配方的設(shè)計(jì)尿素含氮量高，化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥，尿素施入土壤后，被某些細(xì)菌分解成NH3，NH3再轉(zhuǎn)化成NO3-、NH4+等才能被植物吸收。尿素的立體結(jié)構(gòu)

土壤中尿素分解菌之所以能將尿素分解，是因?yàn)樗鼈兡芎铣呻迕福篊O(NH2)2+H2O脲酶CO2+2NH31、你如何設(shè)計(jì)培養(yǎng)基配方，將土壤稀釋液中能分解尿素的細(xì)菌分離出來(lái)？培養(yǎng)基添加尿素作唯一氮源，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素、缺乏氮源而不能生長(zhǎng)發(fā)育繁殖，所以用此培養(yǎng)基就能夠選擇出分解尿素的微生物。2、該培養(yǎng)基與普通培養(yǎng)基有哪些共同點(diǎn)和不同點(diǎn)？牛肉膏5.0g蛋白胨10.0gNaCl5.0g瓊脂20.0g蒸餾水定容到1000mlKH2PO41.4gNaH2PO42.1gMgSO4·7H2O0.2g葡萄糖10.0g尿素CO(NH2)21.0g瓊脂15.0g蒸餾水定容到1000ml配方一：培養(yǎng)細(xì)菌配方二：培養(yǎng)可以分解尿素的細(xì)菌（1）從物理性質(zhì)看此培養(yǎng)基屬于哪類？從用途上屬于哪類培養(yǎng)基？固體培養(yǎng)基。配方二是以尿素作唯一氮源的選擇培養(yǎng)基（2）此培養(yǎng)基中共有哪些成分？在此培養(yǎng)基中哪些作為碳源、氮源？碳源：配方二氮源：成分：碳源、氮源、水、無(wú)機(jī)鹽二、微生物的選擇培養(yǎng)如果想知道1g土壤中有多少能分解尿素的細(xì)菌，還需對(duì)土壤菌液進(jìn)行稀釋及科學(xué)的微生物數(shù)量測(cè)定方法---稀釋涂布平板法。2、實(shí)驗(yàn)的具體操作：

(2)土壤取樣：從肥沃、濕潤(rùn)的土壤中取樣。先鏟去表層土3cm左右，再取樣，將樣品裝入事先準(zhǔn)備好的信封中。注：取土樣用的小鐵鏟和盛土樣的的信封在使用前都要滅菌(1)制備培養(yǎng)基：制備以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基。1、稀釋涂布平板法:是將菌液進(jìn)行一系列梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。6支試管，分別加入9ml無(wú)菌水1ml1021ml1031ml1041ml1051ml1061ml107(3)樣品梯度稀釋：微量移液器稀釋10倍菌液101土壤10g在火焰旁稱取土壤10g，加入90ml無(wú)菌水中，搖勻，制成稀釋10倍的土壤菌液。分別取1ml上清液，加入盛有9ml無(wú)菌水的試管中，制成不同稀釋倍數(shù)的菌液。取6支試管，分別加入9ml無(wú)菌水。①將涂布器浸在盛有酒精的燒杯中滴②取少量稀釋液（不超過(guò)0.1ml

），滴加到培養(yǎng)基表面灼③將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃盡后，冷卻8-10s。涂④用涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面。涂布時(shí)可轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿，使涂布均勻。注：各梯度分別涂布3個(gè)平板,1個(gè)不涂布作空白對(duì)照浸(4)取樣涂布平板：（5）培養(yǎng)與觀察：稀釋103倍稀釋104倍稀釋105倍空白對(duì)照恒溫培養(yǎng)箱待涂布的菌液被培養(yǎng)基吸收后，將平板倒置，放入30～37℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1～2d。稀釋涂布平板法除可以分離微生物外，也常用來(lái)統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目。小結(jié)：兩種接種方法的比較平板劃線法稀釋涂布平板法純化原理接種工具單菌落的獲得用途接種效果圖相同點(diǎn)通過(guò)連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋程度的菌液分別涂布到固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)，以得到單菌落接種環(huán)涂布器從最后劃線的區(qū)域挑取稀釋度合適，整個(gè)平板上都可找到單菌落分離純化菌種，獲得單菌落①分離純化菌種，獲得單菌落②用于計(jì)數(shù)①都能分離純化菌種；②都是在固體培養(yǎng)基上進(jìn)行的。2023/2/19案例:兩位同學(xué)用稀釋涂布平板法測(cè)定同一土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)。從對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中，得到以下兩種統(tǒng)計(jì)結(jié)果。1、甲同學(xué)在該濃度下涂布了一個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)為230。2、乙同學(xué)在該濃度下涂布了A、B、C三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別為21、212、256，該同學(xué)以這三個(gè)平板上菌落數(shù)的平均值163作為統(tǒng)計(jì)結(jié)果。你認(rèn)為這兩位同學(xué)的作法正確嗎？如果有問(wèn)題，錯(cuò)在哪？甲：沒有重復(fù)實(shí)驗(yàn)（至少涂布3個(gè)平板）。為增加實(shí)驗(yàn)的說(shuō)服力與準(zhǔn)確性，應(yīng)設(shè)置重復(fù)實(shí)驗(yàn)，在同一稀釋度下至少涂布3個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)結(jié)果后計(jì)算平均值。乙：其中一個(gè)平板計(jì)數(shù)結(jié)果與其他兩個(gè)相差太大，操作過(guò)程可能出現(xiàn)了錯(cuò)誤。微生物計(jì)數(shù)時(shí)，如果實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)重復(fù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果差別很大的情況，應(yīng)分析實(shí)驗(yàn)過(guò)程中可能的影響因素，找出差異的原因，而不能簡(jiǎn)單地將結(jié)果舍棄后進(jìn)行計(jì)數(shù)。(1)篩選分解尿素的細(xì)菌的培養(yǎng)基以尿素為唯一氮源，且為液體培養(yǎng)基。()解析：選擇培養(yǎng)基一般為固體培養(yǎng)基。(2)能分解尿素的細(xì)菌之所以能分解尿素，是因?yàn)槠淠墚a(chǎn)生脲酶。()(3)稀釋涂布平板法能分離細(xì)菌，也能計(jì)數(shù)(

)(4)平板劃線法不僅能純化細(xì)菌，也能計(jì)數(shù)(

)（5）可利用以石油為唯一碳源的培養(yǎng)基篩選能分解石油的細(xì)菌（）（6）取土壤和稀釋土壤溶液時(shí)應(yīng)在酒精燈火焰旁操作（）×√√×√√【基礎(chǔ)過(guò)關(guān)】【典例】利用稀釋涂布平板法純化的大腸桿菌，經(jīng)培養(yǎng)后發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上出現(xiàn)了多種菌落，不可能的原因是(

) A.培養(yǎng)基制備過(guò)程中被雜菌污染 B.接種過(guò)程中，無(wú)菌操作不符合要求 C.系列稀釋時(shí)，無(wú)菌操作不符合要求 D.使用涂布器時(shí)涂布不均勻D——間接計(jì)數(shù)法1.稀釋涂布平板法（1）原理：

當(dāng)樣品的稀釋度足夠___時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)____，來(lái)源于__________中的一個(gè)____；通過(guò)計(jì)數(shù)平板上的____數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少_____。高菌落樣品稀釋液活菌菌落活菌（2）計(jì)數(shù)原則①選擇菌落數(shù)為_______的平板計(jì)數(shù)30-300②同一稀釋度下，應(yīng)至少對(duì)___個(gè)平板進(jìn)行重復(fù)計(jì)數(shù)，然后求出______；3平均值樣品的______將直接影響平板上的菌落數(shù)目；稀釋度三、微生物的數(shù)量測(cè)定（3）結(jié)果分析：①統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目____；原因：________________________________________________________②統(tǒng)計(jì)結(jié)果一般用_______而不是用活菌數(shù)來(lái)表示；少當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落菌落數(shù)（4）計(jì)算公式：每g樣品中的菌落數(shù)＝(C÷V)×MC代表某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積(mL)M代表稀釋倍數(shù)例：某同學(xué)在稀釋倍數(shù)為106

的培養(yǎng)基中測(cè)得平板上菌落數(shù)的平均數(shù)為234，那么每g樣品中的菌落數(shù)是（涂布平板時(shí)所用稀釋液的體積為0.1mL)()A.2.34×108B.2.34×109C.234D.23.4B2.顯微鏡直接計(jì)數(shù)——直接計(jì)數(shù)法（1）方法：

利用特定的___________或_____________在______下觀察、計(jì)數(shù)，然后再計(jì)算_________的樣品中微生物的數(shù)量；細(xì)菌計(jì)數(shù)板血細(xì)胞計(jì)數(shù)板顯微鏡一定體積血細(xì)胞計(jì)數(shù)板常用于_______________________________等的計(jì)數(shù)相對(duì)較大的酵母菌細(xì)胞、霉菌孢子細(xì)菌計(jì)數(shù)板可對(duì)_________________進(jìn)行觀察和計(jì)數(shù)；細(xì)菌等較小的細(xì)胞（2）優(yōu)點(diǎn)：快速直觀（3）缺點(diǎn)：①統(tǒng)計(jì)的結(jié)果一般是活菌數(shù)和死菌數(shù)的總和，不能區(qū)分死菌與活菌。②個(gè)體小的細(xì)菌在顯微鏡下難以觀察。內(nèi)容直接計(jì)數(shù)法間接計(jì)數(shù)法主要用具顯微鏡、細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板涂布器計(jì)數(shù)依據(jù)細(xì)菌個(gè)數(shù)培養(yǎng)基上菌落數(shù)優(yōu)點(diǎn)計(jì)數(shù)方便、操作簡(jiǎn)單計(jì)數(shù)的是活菌缺點(diǎn)不能區(qū)分死菌與活菌操作較復(fù)雜且有一定誤差計(jì)算公式每毫升原液含菌株數(shù)＝400×1000×每小格平均菌株數(shù)×稀釋倍數(shù)每毫升原液含菌株數(shù)＝平均菌落數(shù)/所用涂布液體積×稀釋倍數(shù)3.

比較直接計(jì)數(shù)法與間接計(jì)數(shù)法四、探究實(shí)踐：土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)1.提出問(wèn)題（實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?）從土壤中分離出能夠分解尿素的細(xì)菌。（2）統(tǒng)計(jì)每克土壤樣品中究竟含有多少這樣的細(xì)菌。2.實(shí)驗(yàn)原理

絕大多數(shù)微生物都能利用葡萄糖，但是只有能合成_____的微生物才能分解尿素，利用___________________的_____培養(yǎng)基，可以從土壤中分離出_________的細(xì)菌。組分含量KH2PO41.4gNa2HPO42.1gMgSO4·7H2O0.2g葡萄糖10.0g尿素1.0g瓊脂15.0gH2O定容至1000mL脲酶以尿素作為唯一氮源選擇分解尿素CO(NH2)2+H2O脲酶2NH3+CO23.實(shí)驗(yàn)步驟（1）土壤取樣①取樣地點(diǎn)要求：

酸堿度接近中性的潮濕土壤。細(xì)菌適宜在該環(huán)境中生長(zhǎng)。②取樣過(guò)程：

鏟去表層土（一般3cm左右）。細(xì)菌絕大部分分布在距地表3～8cm的土壤層。③注意事項(xiàng)：

取土樣時(shí)用的鐵鏟和取樣袋在使用前都需要滅菌。操作完成后，一定要洗手。（2）制備培養(yǎng)基①選擇培養(yǎng)基：以尿素為唯一氮源。葡萄糖10.0g尿素1.0gKH2PO41.4gNa2HPO42.1gMgSO4·7H2O0.2g瓊脂15.0g蒸餾水1000ml②牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基：作為對(duì)照組，來(lái)判斷選擇培養(yǎng)基是否具有選擇作用。③KH2PO4和Na2HPO4的作用是：

提供無(wú)機(jī)鹽；調(diào)節(jié)pH。（3）樣品的稀釋與涂布平板（稀釋涂布平板法）注：測(cè)細(xì)菌時(shí)，一般選用104、105、106倍稀釋的稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng)

在初次實(shí)驗(yàn)中，對(duì)于稀釋的范圍沒有把握，應(yīng)選擇一個(gè)比較寬的范圍，將1×103～1×107倍稀釋的稀釋液分別涂布到平板上培養(yǎng)，以保證能從中選擇出菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。①每個(gè)濃度至少設(shè)置4個(gè)平板，1、2、3平板是選擇培養(yǎng)基（實(shí)驗(yàn)組，三個(gè)重復(fù)），4為牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（用以判斷選擇培養(yǎng)基是否具有選擇作用）②如何驗(yàn)證培養(yǎng)基中是否含有雜菌？設(shè)置2個(gè)平板作為對(duì)照：不涂布稀釋液的選擇培養(yǎng)基和牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（4）微生物的培養(yǎng)與觀察①培養(yǎng)條件：

不同種類的微生物，往往需要不同的培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時(shí)間。（細(xì)菌一般在30-37℃的溫度下培養(yǎng)1-2d）②觀察：

每隔24h統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目，選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果。（一般來(lái)說(shuō)，在相同的培養(yǎng)條件下，同種微生物表現(xiàn)出穩(wěn)定的菌落特征，如形狀、大小和顏色等）（5）結(jié)果分析現(xiàn)象分析未涂布培養(yǎng)基上無(wú)菌落生長(zhǎng)未涂布培養(yǎng)基上有菌落生長(zhǎng)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上的菌落數(shù)目明顯多于選擇培養(yǎng)基上的菌落數(shù)目培養(yǎng)基未被雜菌污染培養(yǎng)基被雜菌污染選擇培養(yǎng)基具有選擇作用①結(jié)合對(duì)照組，分析培養(yǎng)物中是否有雜菌污染以及選擇培養(yǎng)基是否篩選出一些菌落。②你是否獲得了某一稀釋度下菌落數(shù)為30～300的平板?在這一稀釋度下，是否至少有2個(gè)平板的菌落數(shù)接近?③你統(tǒng)計(jì)的每克土樣中能分解尿素的細(xì)菌的菌落數(shù)是多少?與其他同學(xué)統(tǒng)計(jì)的結(jié)果接近嗎?如果差異很大，可能是什么原因引起的?如果沒有接種的培養(yǎng)基上沒有菌落生長(zhǎng)，說(shuō)明培養(yǎng)基沒有被雜菌污染。如果接種后的完全培養(yǎng)基上的菌落數(shù)明顯多于選擇培養(yǎng)基上的菌落數(shù)，說(shuō)明選擇培養(yǎng)基篩選出了一些尿素分解菌。如果得到了兩個(gè)或多個(gè)菌落數(shù)為30～300的平板，說(shuō)明稀釋度合適，操作比較成功，能夠進(jìn)行菌落的計(jì)數(shù)。如果是用同一土樣進(jìn)行的操作，數(shù)據(jù)應(yīng)該比較接近。如果差異很大，就需要從操作是否規(guī)范、培養(yǎng)基配制是否合理等方面查找原因。(6)操作提示

②無(wú)菌操作③做好標(biāo)記

本實(shí)驗(yàn)使用的平板和試管比較多，為避免混淆，使用前要做好標(biāo)記。例如，在標(biāo)記培養(yǎng)皿時(shí)應(yīng)該注明組別、培養(yǎng)日期和平板上培養(yǎng)樣品的稀釋度等。④制定計(jì)劃對(duì)于耗時(shí)較長(zhǎng)的生物實(shí)驗(yàn)，要事先規(guī)劃時(shí)間，以便提高工作效率，在操作時(shí)更加有條不紊。①不要將過(guò)熱的涂布器放在盛有酒精的燒杯中，以免引燃酒精。a、取土用的小鐵鏟的盛土樣的信封在使用前都需要滅菌。b、應(yīng)在火焰旁稱取土壤。在火焰附近將稱好的土樣倒入

錐形瓶中，塞好棉塞。c、在稀釋土壤溶液的過(guò)程中，每一步都要在火焰旁操作?？梢杂^察菌落周圍是否出現(xiàn)紅色環(huán)帶，紅色環(huán)帶直徑與菌落直徑比值越大，說(shuō)明分解能力越強(qiáng)。（6）進(jìn)一步探究——分解尿素細(xì)菌的進(jìn)一步鑒定①原理：

細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解為氨，氨會(huì)使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng)，pH升高，因此可以通過(guò)檢測(cè)培養(yǎng)基pH的變化來(lái)判斷是否發(fā)生了該化學(xué)反應(yīng)，進(jìn)而判斷該菌是否為尿素分解細(xì)菌。②方法：

在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，培養(yǎng)某種細(xì)菌后，如果pH升高，指示劑將變紅：液體培養(yǎng)基：可以直接看液體的變色情況；固體培養(yǎng)基：(1)從土壤中取樣時(shí)，土層越淺越好()(2)來(lái)自土壤的微生物稀釋倍數(shù)越大越好(

)(3)測(cè)定不同微生物數(shù)量時(shí)，接種的土壤懸浮液的稀釋度相同(

)(4)菌落特征是鑒別菌種的重要依據(jù)()(5)利用顯微鏡直接計(jì)數(shù)法統(tǒng)計(jì)的細(xì)菌數(shù)量就是活菌的數(shù)量()×××√×【基礎(chǔ)過(guò)關(guān)】【典例】某同學(xué)將1mL土壤樣液稀釋100倍，在3個(gè)平板上用稀釋涂布平板法分別接入0.1mL稀釋液，經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)后，3個(gè)平板上的菌落數(shù)分別為56、57和58。下列敘述錯(cuò)誤的是(

) A.可得出土壤樣液中活菌大約為5.7×107個(gè)/L B.此方法統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比實(shí)際的活菌數(shù)目低 C.一般選擇菌落數(shù)為30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù) D.顯微鏡直接計(jì)數(shù)法統(tǒng)計(jì)的是稀釋液中的活菌數(shù)D【典例】下列關(guān)于土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)的敘述正確的是

(

) A.只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素 B.統(tǒng)計(jì)樣品中的活菌數(shù)目一般用平板劃線法 C.篩選分解尿素的細(xì)菌時(shí)，應(yīng)以尿素作為培養(yǎng)基中唯一的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì) D.在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，若指示劑變藍(lán)，則表明篩選到了分解尿素的細(xì)菌

A注：顯微鏡直接計(jì)數(shù)法本身不能區(qū)分細(xì)菌的死活，因此一般用來(lái)統(tǒng)計(jì)總菌數(shù)。但是，通過(guò)一定的輔助處理，可以實(shí)現(xiàn)活菌計(jì)數(shù)，如在計(jì)數(shù)前用臺(tái)盼藍(lán)染液進(jìn)行染色，可以通過(guò)統(tǒng)計(jì)無(wú)色細(xì)胞的個(gè)數(shù)來(lái)對(duì)活菌進(jìn)行計(jì)數(shù)。

微生物的數(shù)量測(cè)定選擇培養(yǎng)基的作用微生物選擇培養(yǎng)獲取純培養(yǎng)物的方法-稀釋涂布平板法微生物的選擇培養(yǎng)和計(jì)數(shù)選擇培養(yǎng)基微生物的選擇培養(yǎng)科學(xué)實(shí)例篩選原則選擇培養(yǎng)基的概念及舉例稀釋涂布平板法的操作過(guò)程間接計(jì)數(shù)法—稀釋涂布平板法直接計(jì)數(shù)—計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)法土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)培養(yǎng)基的制備實(shí)驗(yàn)設(shè)