維生素C制劑的鑒別、檢查、含量

測(cè)定（總5頁(yè)）-本頁(yè)僅作為預(yù)覽文檔封面，使用時(shí)請(qǐng)刪除本頁(yè)-維生素C制劑的鑒別、雜質(zhì)檢查、含量測(cè)定2010級(jí)藥學(xué)一班陶磊35［摘要］維生素C（VitaminC,AscorbicAcid）又叫L-抗壞血酸，是一種水溶性維生素，能夠治療壞血病并且具有酸性。在化學(xué)結(jié)構(gòu)上和糖類十分相似，有4種光學(xué)異構(gòu)體，其中以L-構(gòu)型右旋體生物活性最強(qiáng)。ChP2010收載有維生素C原料及其片劑、泡騰片、顆粒劑、泡騰顆粒劑、注射劑和復(fù)方制劑維生素C銀翹片〔1〕。本文通過(guò)查閱文獻(xiàn)資料總結(jié)了維生素C原料藥及各種劑型的鑒別，雜質(zhì)檢查，含量測(cè)定，并結(jié)合實(shí)驗(yàn)室實(shí)際情況確定實(shí)驗(yàn)方法。［關(guān)鍵詞］維生素C；鑒別；雜質(zhì)檢查；含量測(cè)定1儀器及試劑儀器754型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)；高效液相色譜儀；電爐；250mL碘量瓶；分析天平；電子天平；堿式滴定管；移液管等。試劑mol/LHNO3、硝酸銀試液（mol/LAgNO3）、mol/LH2SO4、mol/LHCl、二氯靛酚鈉、稀硝酸、草酸、氫氧化鈉試液、氯化鈣試液、鹽酸、淀粉指示液、碘滴定液、％亞甲藍(lán)乙醇液、醋酸鹽緩沖液（pH=）、堿性酒石酸銅、標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液、標(biāo)準(zhǔn)銅溶液、醋酸銨、醋酸鈉、醋酸、磷酸二氫鉀,均為分析純；甲醇、乙臘，為色譜純;蒸餾水，維生素C對(duì)照品等。部分試劑的配制如下：（1） 淀粉指示劑：稱取g可溶性淀粉，加水5mL攪拌均勻，緩緩加入100mL沸水中，邊加邊攪拌，煮沸2min，放冷，取上清液，應(yīng)新鮮配制。（2） 稀醋酸：量取冰醋酸6mL，加水定容至100mL。（3） 堿性酒石酸銅：稱取硫酸銅結(jié)晶g,加水溶解定容至100mL；稱取酒石酸堿鈉g,氫氧化鈉10g,加水溶解定容至100mL；用時(shí)等量混合。2方法鑒別與硝酸銀反應(yīng):除維生素C鈣、維生素C鈉、維生素注射液、維生素C銀翹片，其余制劑均可用此方法。取維生素Cg,加水10mL溶解。取該溶液5mL，加硝酸銀試液mL,即生成金屬銀的黑色沉淀。與二氯靛酚鈉反應(yīng)：除維生素C注射液和維生素C鈉制劑，其余均可用此方法。（1） 取維生素Cg，加水10mL溶解。取該溶液5mL，加二氯靛酚鈉1?2滴，試液的顏色即消失。（2） 取維生素C銀翹片10片，除去糖衣，精密稱定，研細(xì)，混勻，充分研磨，精密稱定適量（約相當(dāng)于維生素Cg），置100mL量瓶中，加新煮沸的冷開(kāi)水10mL、稀醋酸10mL，振搖使充分溶解，用水稀釋至刻度，搖勻?yàn)V過(guò)，取續(xù)濾液適量，用氨試液調(diào)節(jié)pH至中性，加入適量活性炭（每30mL續(xù)濾液中加g活性炭），加熱至沸，濾過(guò)。取二氯靛酚鈉試液數(shù)滴置點(diǎn)滴板，滴加濾液數(shù)滴，試液的藍(lán)色即消退。與其他氧化劑的反應(yīng)：（1）取維生素C注射液，用水稀釋制成lmL中含維生素Cl0mg的溶液，取4mL，加mol/L的鹽酸溶液4mL，混勻，加％亞甲藍(lán)乙醇溶液4滴，置40°C水浴中加熱，3分鐘內(nèi)溶液應(yīng)由深藍(lán)色變?yōu)闇\藍(lán)色或完全褪色。（2）取維生素C鈉水溶液4mL,加L鹽酸溶液1mL，加堿式酒石酸銅試液數(shù)滴，加熱，生成紅色沉淀。薄層色譜法：此方法主要用于維生素C制劑的鑒別。（1） 取維生素C顆粒細(xì)粉適量（約相當(dāng)于維生素Cl0mg），加水10mL，振搖使維生素C溶解，濾過(guò)，取濾液作為供試品溶液；另取維生素C對(duì)照品，加水溶解并稀釋制成lmL中約含lmg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法，吸取上述兩種溶液各2uL,分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以乙酸乙酯-乙醇-水（541）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，晾干，立即（1小時(shí)內(nèi)）置紫外光燈（254nm）下檢視。供試品溶液所顯主斑點(diǎn)的位置和顏色應(yīng)與對(duì)照品溶液的主斑點(diǎn)相同。（2） 取維生素C注射液，用水稀釋制成lmL中含維生素Clmg的溶液，作為供試品溶液；另取維生素C對(duì)照品，加水溶解并稀釋制成lmL中約含lmg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2uL，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以乙酸乙酯-乙醇-水（541）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，晾干，立即（1小時(shí)內(nèi)）置紫外光燈（254nm）下檢視。供試品溶液所顯主斑點(diǎn)的位置和顏色應(yīng)與對(duì)照品溶液的主斑點(diǎn)相同。（3）取維生素C顆粒細(xì)粉適量（約相當(dāng)于維生素Cl0mg），加水10mL，振搖使維生素C溶解，濾過(guò)，取濾液作為供試品溶液；另取維生素C對(duì)照品，加水溶解并稀釋制成lmL中約含lmg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法（附錄VB）試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2uL,分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以乙酸乙酯-乙醇-水（541）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，晾干，立即（1小時(shí)內(nèi)）置紫外光燈（254nm）下檢視。供試品溶液所顯主斑點(diǎn)的位置和顏色應(yīng)與對(duì)照品溶液的主斑點(diǎn)相同。（4）取維生素C泡騰顆粒細(xì)粉適量（約相當(dāng)于維生素ClOmg），加水10mL，振搖使維生素C溶解，濾過(guò)，取濾液作為供試品溶液；另取維生素C對(duì)照品，加水溶解并稀釋制成lmL中約含lmg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2uL，分別點(diǎn)于同一珪膠GF254薄層板上，以乙酸乙酯-乙醇-水（541）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，晾干，立即（1小時(shí)內(nèi)）置紫外光燈（254nm）下檢視。供試品溶液所顯主斑點(diǎn)的位置和顏色應(yīng)與對(duì)照品溶液的主斑點(diǎn)相同。（5）取維生素C泡騰片細(xì)粉適量（約相當(dāng)于維生素CLomg），加水10mL，振搖使維生素C溶解，濾過(guò)，取濾液作為供試品溶液；另取維生素C對(duì)照品，加水溶解并稀釋制成lmL中約含lmg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2uL，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以乙酸乙酯-乙醇-水（541）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，晾干，立即（1小時(shí)內(nèi)）置紫外光燈（254nm）下檢視。供試品溶液所顯主斑點(diǎn)的位置和顏色應(yīng)與對(duì)照品溶液的主斑點(diǎn)相同。紫外光譜法：維生素C在mol/L鹽酸溶液中在243nm波長(zhǎng)處有惟一的最大吸收，可采用此方法進(jìn)行特征鑒別。紅外光譜法：維生素C的原料藥的紅外光吸收?qǐng)D譜應(yīng)與對(duì)照的圖譜（光譜集450圖）一致。維生素C的紅外光吸收?qǐng)D譜應(yīng)與對(duì)照的圖譜（光譜集1039圖）一致。維生素C的紅外光吸收?qǐng)D譜應(yīng)與對(duì)照的圖譜（光譜集451圖）一致。雜質(zhì)檢查ChP2010規(guī)定應(yīng)檢查維生素C及其片劑、注射劑的澄清度與顏色，對(duì)維生素C原料中的銅、鐵離子進(jìn)行檢查，對(duì)維生素C及其注射液進(jìn)行草酸檢查。溶液的澄清度與顏色檢查（1） 取維生素C供試品g，加水15mL，振搖使溶解，溶液應(yīng)澄清無(wú)色；如顯色，將溶液經(jīng)4號(hào)垂熔玻璃漏斗濾過(guò)，取濾液，照紫外-可見(jiàn)分光光度法，在420nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，不得過(guò)。維生素C制劑在加工過(guò)程中有色雜質(zhì)增加，限量比原料藥寬一些，維生素C片的測(cè)定波長(zhǎng)為440nm。（2） 取維生素C注射液，用水稀釋制成每lml中含維生素C50mg的溶液，照紫外-可見(jiàn)分光光度法，在420nm的波長(zhǎng)處測(cè)定，吸光度不得過(guò)。（3） 取維生素C細(xì)粉適量（相當(dāng)于維生素Cg），加水20mL，振搖使維生素C溶解，濾過(guò)，濾液照紫外-可見(jiàn)分光光度法，在440nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，不得過(guò)。（4） 取維生素C鈣g，加水30mL使溶解，溶液應(yīng)澄清無(wú)色；如顯渾濁，與1號(hào)濁度標(biāo)準(zhǔn)液比較，不得更濃；如顯色，經(jīng)4號(hào)垂熔玻璃漏斗濾過(guò)，取濾液，照紫外-可見(jiàn)分光光度法，在420nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，不得過(guò)。（5） 取維生素C鈉g，加水10mL使溶解，溶液應(yīng)澄清無(wú)色；如顯渾濁，與1號(hào)濁度標(biāo)準(zhǔn)液比較，不得更濃；如顯色，經(jīng)4號(hào)垂熔玻璃漏斗濾過(guò)，取濾液，照紫外-可見(jiàn)分光光度法，在420nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，不得過(guò)。草酸的檢查（1） 取維生素C原料藥g，加水mL,振搖使維生素C溶解，加氫氧化鈉試液mL、稀醋酸lmL與氯化鈣試液mL，搖勻，放置1小時(shí)，作為供試品溶液；另精密稱取草酸75mg，置500mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5mL，加稀醋酸1mL與氯化鈣試液mL，搖勻，放置1小時(shí)，作為對(duì)照溶液。供試品溶液產(chǎn)生的渾濁不得濃于對(duì)照溶液（0.3%）。（2） 取維生素C注射液，用水稀釋制成每1mL中含維生素C50mg的的溶液，精密量取5mL，加稀醋酸1mL與氯化鈣試液mL，搖勻，放置1小時(shí)，作為供試品溶液；精密稱取草酸75mg，置500mL量瓶中，加水溶液并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5mL，加稀醋酸1ml與氯化鈣試液mL，搖勻，放置1小時(shí)，作為對(duì)照溶液。供試品溶液產(chǎn)生的渾濁不得濃于對(duì)照溶液（％）。（3） 維生素C鈉g，加水mL，振搖使溶解，加稀醋酸lmL與氯化鈣試液0.5mL，搖勻，放置1小時(shí)，作為供試品溶液；精密稱取草酸75mg，置500mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5mL，加稀醋酸lmL與氯化鈣試液mL,搖勻，放置1小時(shí)，作為對(duì)照溶液。供試品溶液產(chǎn)生的渾濁不得濃于對(duì)照溶液（0.3%）。鐵、銅離子的檢查（1）取維生素C原料藥5.0g兩份，分別置25mL量瓶中，一份中加0.lmol/L硝酸溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液（B）；另一份中加標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液（精密稱取硫酸鐵銨863mg，置1000mL量瓶中，加lmol/L硫酸溶液25ml，用水稀釋至刻度，搖勻，精密量取10mL,100mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻）mL，^口0.lmol/L硝酸溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照溶液（A）。照原子吸收分光光度法，在248.3nm的波長(zhǎng)處分別測(cè)定，應(yīng)符合規(guī)定［若A和B溶液測(cè)得吸光度分別為a和b，則要求b＜（a-b）］。（2）取維生素C原料藥g兩份，分別置25mL量瓶中，一份中加0.lmol/L硝酸溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液（B）;另一份中加標(biāo)準(zhǔn)銅溶液（精密稱取硫酸銅393mg，置1000mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取10mL，置100mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻）mL，為口0.lmol/L硝酸溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照溶液（A）。照原子吸收分光光度法，在nm的波長(zhǎng)處分別測(cè)定，應(yīng)符合規(guī)定［若A和B溶液測(cè)得吸光度分別為a和b，則要求b＜（a-b）］。含量測(cè)定目前已有一些文獻(xiàn)綜述了對(duì)維生素C的測(cè)定方法,常用的方法有光度法〔2-3〕、電化學(xué)法、滴定法、酶法〔4〕、色譜法〔5〕、差示旋光法等。碘量法：ChP2010采用本法對(duì)維生素C原料、片劑、顆粒劑、泡騰顆粒劑、泡騰片、注射劑及維生素C銀翹片進(jìn)行含量測(cè)定。為消除輔料對(duì)測(cè)定的干擾，滴定前要進(jìn)行必要的處理。如片劑溶解后應(yīng)濾過(guò)，取續(xù)濾液測(cè)定；注射液測(cè)定前應(yīng)加丙酮2mL，以消除抗氧化劑亞硫酸氫鈉對(duì)測(cè)定的影響。（1） 取維生素C原料藥約，精密稱定，加新沸過(guò)的冷水100mL于稀醋酸10mL使溶解，加淀粉指示液lmL,立即用碘滴定液（mol/L）滴定，至溶液顯藍(lán)色并在30秒鐘內(nèi)不褪，每lmL碘滴定液（0.05mol/L）相當(dāng)于mg的C6H8O6。（2） 取維生素C片20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于維生素Cg），置100mL量瓶中，加新沸過(guò)的冷水100mL與稀醋酸10mL的混合液適量，振搖使維生素C溶解并稀釋至刻度，搖勻，迅速濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液50mL，加淀粉指示液lmL，立即用碘滴定液（L）滴定，至溶液顯藍(lán)色并持續(xù)30秒鐘不褪。每lmL碘滴定液（mol/L）相當(dāng)于的C6H8O6O（3） 精密量取維生素C注射液適量（約相當(dāng)于維生素Cg），加水15mL與丙酮2mL，搖勻，放置5分鐘，加稀醋酸4mL與淀粉指示液lmL，用碘滴定液（mol/L）滴定，至溶液顯藍(lán)色并持續(xù)30秒鐘不褪。每lmL碘滴定液（L）相當(dāng)于mg的C6H8O6。（4） 取維生素C銀翹片10片，除去糖衣，精密稱定，研細(xì)，混勻，充分研磨，精密稱定適量（約相當(dāng)于維生素Cg），置100mL量瓶中，加新煮沸的冷開(kāi)水10mL、稀醋酸10mL，振搖使充分溶解，用水稀釋至刻度，搖勻?yàn)V過(guò)，精密量取續(xù)濾液50mL，加淀粉指示液lmL，立即用碘滴定液（L）滴定，至溶液顯藍(lán)色并持續(xù)30秒鐘不褪。每lmL碘滴定液（mol/L）相當(dāng)于mg的C6H8O6。該品每片含維生素C（C6H8O6）應(yīng)為標(biāo)示量的％?％。二氯靛酚滴定法：本法的專屬性較碘量法高，多用于維生素C制劑的含量分析。精密量取維生素C口服液適量（約相當(dāng)于維生素C50mg），置100mL量瓶中，加偏磷酸-醋酸試液20mL，用水稀釋至刻度，搖勻；精密量取稀釋液適量（約相當(dāng)于維生素C2mg），置50mL錐形瓶中，加偏磷酸-醋酸試液5mL,用二氯靛酚滴定液滴定至溶液顯玫瑰紅色，并持續(xù)5秒不退色；另取偏磷酸-醋酸試液mL，加水15mL，用二氯靛酚滴定液滴定，作為空白校正。以二氯靛酚滴定液對(duì)維生素C的滴定度計(jì)算，即得。高效液相色譜法維生素C銀翹片的含量測(cè)定〔6〕維生素C標(biāo)準(zhǔn)液的配制：精密稱取維生素C對(duì)照品0.0241g,置50mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得對(duì)照品液.流動(dòng)相的配制：精密稱取g醋酸銨，加入1000mL蒸餾水使其溶解，量取330mL,加入670mL甲醇,10mL醋酸，混勻，用um濾膜濾過(guò)，超聲脫氣10min.色譜條件:色譜柱KrosmasilC18(4.6mmX250mm,5um);流動(dòng)相:甲醇-醋酸L)醋酸(體積比67:33:1);流速mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng):249nm;柱溫:20°C;進(jìn)樣量:20uL,靈敏度:AUFS.試液的配制及測(cè)定:避光操作,取樣品10片，除去糖衣，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量(約相當(dāng)于維生素Cg),置于100mL的量瓶中,加甲醇30mL,超聲振蕩10min,使充分溶解，用新煮沸的冷蒸餾水稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液5mL,置50mL量瓶中，加蒸餾水至刻度，搖勻，精密吸取