醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)資料小結(jié)1、質(zhì)粒一一是細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)攜帶的染色體外的DNA分子，是共價(jià)閉合的環(huán)狀DNA分子，能獨(dú)立進(jìn)行復(fù)制。質(zhì)粒只有在宿主細(xì)胞內(nèi)才能夠完成自己的復(fù)制。2、基因一一指貯存有功能的蛋白質(zhì)多肽鏈或RNA序列及表達(dá)這些信息所需的全部核甘酸序列，是核酸分子中貯存遺傳信息的遺傳單位。3、癌基因一一是細(xì)胞內(nèi)控制細(xì)胞生長和分化的基因，具有潛在的誘導(dǎo)細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的特性，它的結(jié)構(gòu)異?；虮磉_(dá)異常，可以引起細(xì)胞癌變。4、基因克隆一一是指把一個生物體的遺傳信息（基因片段）轉(zhuǎn)入另一個生物體內(nèi)進(jìn)行無性繁殖，得到一群完全相同的基因片段，又稱DNA克隆。5、抑癌基因一一是指存在于正常細(xì)胞內(nèi)的一大類可抑制細(xì)胞生長并具有潛在抑癌作用的基因，當(dāng)這類基因在發(fā)生突變、缺失或失活時可引起細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化而導(dǎo)致腫瘤發(fā)生。6、基因診斷一一是以DNA和RNA為診斷材料，通過檢查基因的存在、缺陷或表達(dá)異常，對人體狀態(tài)和疾病作出診斷的方法和過程。7、管家基因一一是在生命過程都是必需的，是在一個生物個體的幾乎所有細(xì)胞中持續(xù)表達(dá)的基因，它較少受環(huán)境因素的影響，其表達(dá)方式為組成性基因表達(dá)。8、klenow片段一一亦稱DNA聚合酶1大片段，為DNA聚合酶I經(jīng)枯草桿菌蛋白酶裂解后產(chǎn)生的大片段，它除了保留5/^3,聚合酶活性及3,^5,外切酶活性外，失去了5,^3,外切酶活性，它具有的3，f5,外切酶活性能保證DNA復(fù)制的準(zhǔn)確性，把DNA合成過程中錯誤配對的堿基去除，再把正確的核甘酸接上去。9、核蛋白體一一系tRNA與蛋白質(zhì)結(jié)合生成的一種復(fù)合體，是蛋白質(zhì)生物合成的場所。10、限制性內(nèi)切核酸酶一一能識別DNA的特異序列，并在識別位點(diǎn)或其附近切割雙鏈DNA的一類內(nèi)切核酸酶，是基因克隆中最重要的工具酶，通常所說的限制酶是指2型酶。主要從原核細(xì)胞中提取，大多數(shù)限制性內(nèi)切酶是錯位切割雙鏈DNA,產(chǎn)生粘性末端，部分酶則沿對稱軸切割DNA而產(chǎn)生平端。11、Tm值一一DNA變性是在一個相當(dāng)窄的溫度范圍內(nèi)完成的，在這一范圍內(nèi)，紫外吸收值達(dá)到最大值的50%時的溫度稱為DNA的解鏈溫度，又稱融解溫度（Tm）,其大小與G+C含量成正比。或:雙鏈DNA變性一半所需要的溫度叫DNA的融解溫度.12、DNA的甲基化一一是指DNA的一級結(jié)構(gòu)中，有一些堿基可以通過加上一個甲基而被修飾，其作用是對自身DNA產(chǎn)生保護(hù)作用。13、原位雜交一一是核酸保持在細(xì)胞或組織切片中，經(jīng)適當(dāng)方法處理細(xì)胞或組織后，將標(biāo)記的核酸探針與細(xì)胞或組織中的核酸進(jìn)行雜交的方法。14、DNA微陳列一一系直接將大量DNA探針以顯微打印的方式有序地固化于支持物表面所組成的微陳列（基因芯片）稱為DNA微陳列。.15、順序作用元件一一是指那些與結(jié)構(gòu)基因表達(dá)調(diào)控相關(guān)，能被基因調(diào)控蛋白異性識別和結(jié)合的DNA序列，抱括啟動子.上游啟動子元件.增強(qiáng)子.加尾信號和一些反應(yīng)元件。16.轉(zhuǎn)位因子一是指能夠在一個DNA分子內(nèi)或2個DNA分子之間移動的DNA片段。17、基因治療一是指通過在特定靶細(xì)胞中表達(dá)該細(xì)胞本來不表達(dá)的基因，或采用特定方式關(guān)閉和抑制異常表達(dá)基因，達(dá)到治療疾病目的的治療方法。二、綜合內(nèi)容1、DNA的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)及特點(diǎn)①一級結(jié)構(gòu)是指DNA分子中核甘酸的排列順序，二級結(jié)構(gòu)是指兩條DNA單鏈形成的雙螺旋結(jié)構(gòu)、三股螺旋結(jié)構(gòu)和四股螺旋結(jié)構(gòu);三級結(jié)構(gòu)是指雙鏈DNA進(jìn)一步扭曲盤旋形成的超螺旋結(jié)構(gòu)。②DNA一級結(jié)構(gòu)的基本特點(diǎn)：4種脫氧核糖核甘酸以3'，5'一磷酸二酯鍵相連，形成長鏈，鏈中的脫氧核糖和磷酸都是相同的。組成DNA的堿基有腺嘌呤（A）、鳥嘌呤（G）、胞喀啶（C）和胸腺喀啶（T）。③DNA是由兩條單鏈結(jié)合在一起形成的雙鏈分子，兩條單鏈都是由A、T、G、C以千變?nèi)f化的排列組合而形成的。大多數(shù)生物的遺傳信息都是儲存在DNA分子中。④DNA分子主要攜帶兩類遺傳信息，即有功能活性的DNA序列所攜帶的信息和調(diào)控信息。⑤DNA二級結(jié)構(gòu)是指DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)，其特點(diǎn)為：脫氧核糖與磷酸交替排列構(gòu)成了DNA主鏈；兩條脫氧核昔酸鏈?zhǔn)欠聪蚱叫信帕?，一條是5,f3’方向，另一條為3‘f5’方向；以右手方向盤繞成雙螺旋構(gòu)型；A配T,G配C。⑥生物體的閉環(huán)DNA都以超螺旋形式存在，如細(xì)菌質(zhì)粒、一些病毒、線粒體的DNA等。2、RNA的結(jié)構(gòu)、功能、特點(diǎn)①由4種基本的核甘酸以3’,5’-磷酸二酯鍵連接而成的長鏈，堿基中沒有T,而為尿喀啶（U）。②分為mRNA（信使RNA）,tRNA（轉(zhuǎn)RNA,轉(zhuǎn)運(yùn)氨基酸）和核蛋白體RNA（rRNA）。mRNA結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：不穩(wěn)定、代謝活躍，更新迅速，壽命短。原核生物mRNA具有操縱子結(jié)構(gòu)，主要是多順反子，mRNA5/端無帽子結(jié)構(gòu)，3,端一般無多聚A尾巴，沒有修飾堿基；真核mRNA5/端有帽子結(jié)構(gòu)、3,端大多有多聚腺甘酸尾巴、分子中可能有修飾堿基，主要有甲基化、有編碼區(qū)和非編碼區(qū)。tRNA的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及作用：作用：在蛋白質(zhì)合成過程轉(zhuǎn)運(yùn)氨基酸，參與蛋白質(zhì)的翻譯。一級結(jié)構(gòu)含有稀有堿基如DHU,3,端為3個同樣的核甘酸序列（CCA）序列，此序列是tRNA結(jié)合和轉(zhuǎn)運(yùn)安基酸而生成氨酰tRNA所必需的。5,端為G、具有TWC；二級結(jié)構(gòu)為三葉草形，三級結(jié)構(gòu)為倒L形；C、rRNA即核蛋白體RNA：為細(xì)胞內(nèi)含量最豐富的RNA,約占細(xì)胞總RNA的80%以上，參與組成核蛋白體，作為蛋白質(zhì)生物合成的場所。原核生物核糖體的沉降系數(shù)為70S,由50S和30S兩個大小亞基組成，30S小亞基含16SrRNA和21種蛋白質(zhì),50S大亞基含23S和5SrRNA以及34種蛋白質(zhì)；真核生物細(xì)胞核糖體的沉降系數(shù)為80S，由大小亞基組成，40S小亞基含18SrRNA及30多種蛋白質(zhì)，60S大亞基含3種rRNA（28S.5.8S.5S）以及大約45種蛋白質(zhì)。④hnRNA即核內(nèi)不均-RNA,為真核生物轉(zhuǎn)錄生成的mRNA前體。⑤SnRNA即小分子核內(nèi)RNA,不單獨(dú)存在，常與多種特異的蛋白質(zhì)結(jié)合在一起，形成小分子核內(nèi)核蛋白顆粒，在mRNA的剪接中起重要作用。⑥反義RNA,又稱調(diào)節(jié)RNA,主要封閉RNA。3、參與蛋白質(zhì)合成的氨基酸在特異的氨基酰tRNA合成酶催化下，與其相應(yīng)的tRNA結(jié)合成氨基酰一tRNA。真核生物起始tRNA結(jié)合的氨基酸為蛋氨酸，結(jié)合形成Met-tRNAjmet,翻譯起始時首先與40S核糖體小亞基結(jié)合形成復(fù)合物。原核生物的起始氨基酸為甲?；鞍彼?，結(jié)合形成fMet-tRNAffmet。導(dǎo)致DNA變性的常用方法有熱變性、堿變性和化學(xué)試劑變性。DNA變性的結(jié)果：粘性降低，密度增加，A260紫外吸收值增加。4、蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)、功能特點(diǎn)①蛋白質(zhì)又稱為“功能分子”，根據(jù)功能分為結(jié)構(gòu)蛋白、活性蛋白和信息蛋白。蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)是指蛋白質(zhì)多肽鏈中氨基酸排列的順序。蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，可以使蛋白質(zhì)的功能發(fā)生改變，嚴(yán)重時可導(dǎo)致疾病的發(fā)生。②因基因突變而導(dǎo)致的蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)改變后表現(xiàn)出生理功能的異常，使機(jī)體出現(xiàn)病態(tài)現(xiàn)象，稱為分子病。③蛋白質(zhì)的二級結(jié)構(gòu)單元（形式）有a-螺旋、0-折疊、-轉(zhuǎn)角、無規(guī)則卷曲。④一級結(jié)構(gòu)的化學(xué)鍵是肽鍵及二硫鍵；二級結(jié)構(gòu)主要化學(xué)鍵為氫鍵；三級結(jié)構(gòu)的主要靠疏水作用、離子鍵、氫鍵和范得華力等；四級結(jié)構(gòu)的結(jié)合力主要是疏水作用、氫鍵和離子鍵。5、端粒的主要特點(diǎn)和功能：特點(diǎn)為：位于真核生物染色體末端、端粒酶催化端粒DNA延長、在決定細(xì)胞壽命中起重要作用、含短的高度重復(fù)序列。其主要功能有：保護(hù)線性DNA的完整復(fù)制I、保護(hù)染色體末端、決定細(xì)胞的壽命。6、DNA聚合酶（DNApol）①作用是催化DNA合成，其活性需要Mg2+的存在。大腸桿菌DNA聚合酶有I-II、II3種（即原核生物DNA聚合酶）。②DNApolI的功能有：a、聚合作用，使DNA鏈沿5,-3’方向延伸，b、3,-5’外切酶活性，即能從DNA鏈3,端開始沿3，f5,進(jìn)行水解反應(yīng)，產(chǎn)生5,單核甘酸，糾正復(fù)制過程中的錯誤，保證DNA復(fù)制的正確性，因而具有校對功能；C、5,f3’外切酶活性，參與RNA生物的切除、填補(bǔ)岡崎片段間的空隙以及DNA損傷的修復(fù)。③DNApolII：具有5,f3,DNA聚合酶活性及3,f5’外切核酸酶活性，可能參與DNA損傷的應(yīng)急狀態(tài)修復(fù)。④DNApolII：a亞基具有催化合成DNA的功能；&亞基具有3‘f5’外切酶活性及編輯和校對功能，9則為裝配所必需，是原核生物復(fù)制延長中真正起催化作用的酶。DNA聚合酶的共同性質(zhì)是：需要DNA模板；RNA或DNA作為引物；ATP與Mg2+的參與；以dNTP作底物；DNA合成的方向是5，^3,。反應(yīng)特點(diǎn)：新生鏈的延伸方向?yàn)?'f3'；半保留方式合成子代DNA雙鏈；反應(yīng)需要DNA引物。共同具有的酶活性：5'-3'聚合酶活性；3'-5'核酸外切酶活性。7、RNA聚合酶①RNA聚合酶也稱依賴DNA的RNA聚合酶，能以DNA為模板，四種核昔三磷酸為底物，按照堿基配對原則，從5,-3’方向延長RNA鏈。②原核生物的RNA聚合酶只有一種，是由四種亞基af0'O組成的五聚體蛋白質(zhì)，稱為全酶。去掉O亞基后，剩下的a200,稱為核心酶?；罴?xì)胞的轉(zhuǎn)錄起始，需要全酶；而核心酶負(fù)責(zé)催化RNA鏈的延伸。③真核生物RNA聚合酶有三種，即RNA聚合酶I、II、III。RNA聚合酶I定位在核仁，主要轉(zhuǎn)錄5.8S、18S、28S-rRNA基因；酶II定位在核漿，主要轉(zhuǎn)錄編碼蛋白質(zhì)的基因，即主要轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生mRNA；酶III定位在核漿，主要轉(zhuǎn)錄tRNA和5S-rRNA基因。④RNA聚合酶催化聚合反應(yīng)時需要有Mg2+或Mm+的存在，無3,f5’外切酶海性，無校對功能。8、密碼子分為起始密碼和終止密碼，起始密碼為AUG,終止密碼為UAA、UAG和UGA,共有64種不同的密碼?？勺鳛樵松锲鹗济艽a的是：AUG.GUG.UUG。9、遺傳密碼具有以下特點(diǎn)：A、連續(xù)性：兩個密碼子之間沒有任何核甘酸加以分隔，即密碼是無標(biāo)點(diǎn)的。B、方向性：mRNA中密碼子的排列是有方向性的，即起始密碼子總是位于編碼區(qū)5,末端，而終止密碼子位于3,末端。每個密碼子的三個核背酸也是5‘f3’方向閱讀，不能倒讀。C、簡并性：是指遺傳密碼中除色氨酸和甲硫氨酸僅有一個密碼子外，其余氨基酸有2?6個密碼子為其編碼。D、通用性：從最簡單的病毒、原核生物、直至人類，都使用同一套遺傳密碼。E、擺動性：翻譯過程中，氨基酸的正確加入，要靠mRNA上的密碼子與tRNA上的反密碼子相辯認(rèn)。密碼子與反密碼子配對辯認(rèn)時，有時不完全遵守堿基互補(bǔ)規(guī)律，即使不嚴(yán)格互補(bǔ)也能辯認(rèn)配對，這種現(xiàn)象稱為擺動。10、轉(zhuǎn)錄的過程及特點(diǎn)①轉(zhuǎn)錄是以DNA為模板，以4種NTP為原料，依堿基配對規(guī)律，在DNA指導(dǎo)的RNA聚合酶催化下合成RNA的過程，其過程包括：起始、延長和終止三個階段。②轉(zhuǎn)錄的特點(diǎn):A、對于一個基因組來說，轉(zhuǎn)錄只發(fā)生在一部分基因，而且每個基因的轉(zhuǎn)錄都受到相對獨(dú)立的控制。B、轉(zhuǎn)錄是不對稱的。C、轉(zhuǎn)錄時不需要引物，而且RNA鏈的合成是連續(xù)的。D、轉(zhuǎn)錄的單向性，即RNA生物合成時，只能向一個方向進(jìn)行聚合，所依賴的模板DNA鏈的方向?yàn)?‘f5,，而RNA鏈的合成方向?yàn)?‘f3,。E、有特定的起始和終止位點(diǎn)。參與轉(zhuǎn)錄終止的因素為p因子或轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的3,端發(fā)夾結(jié)構(gòu)，轉(zhuǎn)錄終止的修飾點(diǎn):AATAAA+GT序列。11、原核生物DNA復(fù)制的過程及特點(diǎn)①復(fù)制過程包括：起始（復(fù)制起始位點(diǎn)識別、解螺旋酶解開DNA雙鏈，引發(fā)體合成RNA引物）延伸（DNA聚合酶催化聚合反應(yīng)，連續(xù)合成前導(dǎo)鏈，不連續(xù)合成隨從鏈）。終止（RNA引物去除、岡崎片段連接、在特殊的終止結(jié)構(gòu)區(qū)域停止）。②復(fù)制的共同特點(diǎn)為：半保留復(fù)制和半不連續(xù)復(fù)制、聚合反應(yīng)都需要模板、底物、DNA聚合酶及其它酶和蛋白質(zhì)。12、真核生物染色體DNA復(fù)制的特點(diǎn)：（原核相反）①復(fù)制起始點(diǎn)為多個；②復(fù)制叉移動速度慢；③復(fù)制方向大多數(shù)為雙向；④RNA引物短；⑤岡崎片段短，⑥不可連續(xù)復(fù)制13、翻譯的主要過程及特點(diǎn)①起始：形成翻譯起始復(fù)合物②延長：指每加一個氨基酸經(jīng)過進(jìn)位、成肽和轉(zhuǎn)位，使肽鏈從N端向C端延長。③終止（當(dāng)mRNA分子中的終止密碼子出現(xiàn)后，多肽鏈合成停止，肽鏈從肽酰-tRNA中釋出，mRNA、核蛋白體等分離）。蛋白制合成是一個耗能過程，每生成一個肽鍵，要消耗2個高能磷酸鍵，氨基酸活化要消耗2個高能磷酸鍵，整個過程可能多于4個高能磷酸鍵。14、原核生物mRNA的加工：轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物mRNA分子不需加工。tRNA結(jié)構(gòu)基因的初級轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物需要加工，才能成為具有生物功能的成熟分子。tRNA前體的加工包括剪切作用（切除多余核甘酸）、添加和修復(fù)3'端CCA序列，某些堿基的化學(xué)修飾（成熟tRNA分子中有稀有堿基）。15、翻譯后的加工修飾：①加工包括：A、去掉N-甲?；?、N-蛋氨酸或N端序列。B、個別氨基酸的修飾（羥化、磷酸化形成-S-S-等）。C、多蛋白水解修飾，D、分子伴侶，蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶，肽-脯氨酰順反異構(gòu)酶輔助折疊成空間構(gòu)象。E、亞基聚合，F(xiàn)、輔基的結(jié)合（糖基化等）。其中A、B、C屬一級結(jié)構(gòu)修飾，D、E、F屬空間結(jié)構(gòu)修飾。②多肽鏈形成后，氨基酸殘基可進(jìn)行多種共價(jià)修飾，包括；磷酸化，羥基化，ADP-核糖基化，形成胱氨酸及乙酰化。③翻譯過程涉及多種分子之間的相互作用，可以歸納為：RNA-蛋白質(zhì)相互作用，蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用及RNA-RNA相互作用。④參與翻譯終止的蛋白質(zhì)因子包括：RF、PR、IF。⑤廣義的核蛋白體循環(huán)包括：翻譯起始，進(jìn)位，成肽，轉(zhuǎn)位和翻譯終止。16、真核生物mRNA的加工包括：①5,端加帽（由加帽酶催化5/端加入7-甲昔烏甘酸，形成帽子結(jié)構(gòu)m^pppmNP-）。②3/端加入Poly（A）尾（A、組蛋白的成熟mRNA無需加polyA尾；B、加尾信號包括AAUAAA和富含GU的序列；C、加尾不需模板；D剪切過程需要多種蛋白質(zhì)因子的輔助）。③mRNA前體的剪接（剪接加工以除去內(nèi)含子序列，并將外顯子序列連接成為成熟的有功能的mRNA分子。內(nèi)含子兩端的結(jié)構(gòu)通常是5,-GU……AG-3,。選擇性剪接的作用機(jī)制包括；A使用不同的剪接位點(diǎn)，B選擇使用外顯子，C、反式剪接，D、使用不同的啟動子，E、使用不同的多腺甘酸化位點(diǎn)）。④RNA的編輯（發(fā)生于轉(zhuǎn)錄后水平，改編mRNA序列，C-U或A-G,增加遺傳信息容量）。17、基因表達(dá)是指生物基因組中結(jié)構(gòu)基因所攜帶的遺傳信息經(jīng)過轉(zhuǎn)錄、翻譯等一系列過程，合成特定的蛋白質(zhì)，進(jìn)而發(fā)揮特定的生物學(xué)功能和生物學(xué)效應(yīng)的全過程。但并非所有基因表達(dá)過程都產(chǎn)生蛋白質(zhì)，tRNA、rRNA編碼基因轉(zhuǎn)錄生成RNA的過程也屬于基因表達(dá)?；虮磉_(dá)受到多級水平的調(diào)控，具有階段特異性（時間特異性）和組織特異性（空間特異性）?；虮磉_(dá)分為幾個階段：基因活化、轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)錄后加工、翻譯、翻譯后加工等、產(chǎn)物是RNA和有功能的蛋白質(zhì)。18、原核生物基因表達(dá)調(diào)控的環(huán)節(jié)，主要在轉(zhuǎn)錄水平，其次是翻譯水平。原核生物基因多以操縱子的形式存在，轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控涉及到啟動子、。因子（能與RNA聚合酶結(jié)合）、阻遏蛋白（負(fù)調(diào)控）、正調(diào)控蛋白、倒位蛋白、RNA聚合酶抑制物、衰減子等多種因素。而翻譯水平的調(diào)控涉及到SD序列（位于AUG前）、mRNA的穩(wěn)定性（不穩(wěn)定，其5,端和3,端的發(fā)夾結(jié)構(gòu)可保護(hù)其不被酶水解，mRNA的5,端與核糖體結(jié)合，可明顯提高其穩(wěn)定性）、翻譯產(chǎn)物及小分子RNA的調(diào)控作用。19、真核生物基因表達(dá)的調(diào)控環(huán)節(jié)較多，在DNA水平可通過染色體丟失，基因擴(kuò)增、基因重排、DNA甲基化以及染色體結(jié)構(gòu)改變影響基因表達(dá)，在轉(zhuǎn)錄水平則主要通過反式作用因子的作用調(diào)控轉(zhuǎn)錄因子與TATA盒的結(jié)合、RNA聚合酶與轉(zhuǎn)錄因子-DNA復(fù)合物的結(jié)合及轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物的形成；在轉(zhuǎn)錄后水平主要通過RNA修飾、剪接及mRNA運(yùn)輸?shù)目刂苼碛绊懟虮磉_(dá)；影響翻譯水平的因素有影響起始翻譯的阻遏蛋白、5AUG、5,端非編碼區(qū)的長度、mRNA的穩(wěn)定性調(diào)節(jié)及小分子RNA等。真核基因調(diào)控中最重要的環(huán)節(jié)是基因轉(zhuǎn)錄，真核生物基因表達(dá)需要轉(zhuǎn)錄因子、啟動子、沉默子和增強(qiáng)子。20、反式作用因子：指能直接或間接辨認(rèn)和結(jié)合轉(zhuǎn)錄上游區(qū)段DNA的蛋白質(zhì)，其主要特點(diǎn)包括三個功能結(jié)構(gòu)域（DNA識別結(jié)合域、轉(zhuǎn)錄活性域、結(jié)合其它蛋白的結(jié)合域）、能識別并結(jié)合上游調(diào)控區(qū)的順式作用元件、對基因表達(dá)有正性和負(fù)性調(diào)控作用。其活性調(diào)節(jié)方式：表達(dá)式調(diào)節(jié)，共價(jià)修飾，配體結(jié)合及蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用。作用方式:成環(huán)、扭曲、滑動、Oozing。DNA結(jié)構(gòu)域包括：鋅指、螺旋一轉(zhuǎn)角一螺旋、亮氨酸拉鏈和螺旋一環(huán)一螺旋。轉(zhuǎn)錄激活域富含：酸性氨基酸、脯氨酸和谷氨酰胺。21、參與DNA復(fù)制（合成）的物質(zhì)包括：①模板（解開成單鏈的DNA母鏈）。②引物（提供3’一OH未端使dNTP可以依次聚合）。③底物（dATP，dGTP，dCTP和dTTP）。④聚合酶（依賴DNA的DNA聚合酶（DNA—pol））。⑤其它的酶和蛋白質(zhì)因子。DNA復(fù)制的基本過程包括：①DNA雙鏈解開，②RNA引物的合成，③DNA鏈的延長，④切除引物，填補(bǔ)缺口，連接相鄰DNA片段，⑤切除和修復(fù)錯配堿基。22、結(jié)構(gòu)基因突變的類型包括點(diǎn)突變、缺失、插入和倒位四類，遺傳密碼的改變分為錯義突變、無義突變、同義突變和移碼突變。23、癌基因惡性激活的機(jī)制包括：①原癌基因點(diǎn)突變，②原癌基因獲得外源啟動子而激活，③原癌基因因甲基化程度降低而激活，④基因易位或重排使原癌基因激活。24、逆轉(zhuǎn)錄病毒載體是基因治療中最常用的載體。造血肝細(xì)胞是基因治療中最重要的靶細(xì)胞，禁用生殖細(xì)胞?；蜣D(zhuǎn)移技術(shù)（基因治療技術(shù)）包括生物學(xué)方法和非生物學(xué)方法：生物學(xué)方法有：逆轉(zhuǎn)錄病毒載體.腺病毒載體.腺相關(guān)病毒載體.單純皰疹病毒載體；非生物學(xué)方法有：脂質(zhì)體、直接注射、受體介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)移技術(shù)、DNA一磷酸鈣沉淀法、電穿孔法、顯微注射、顆粒轟擊。25、DNA甲基化的一個特點(diǎn)是它們經(jīng)過細(xì)胞許多代分裂之后仍保持穩(wěn)定。在真核生物DNA中，幾乎所有甲基化均發(fā)生于二核昔酸序列5'一mCG—3'上。26、一個基因所包括的序列有：編碼蛋白質(zhì)肽鏈或RNA的核酸序列、保證轉(zhuǎn)錄所必需的調(diào)控序列、位于編碼區(qū)5'端上游的非編碼序列、內(nèi)含子、位于編碼區(qū)3'端下游的非編碼序列。27、啟動子是RNA聚合酶特異性識別和結(jié)合的DNA序列,啟動子具有方向性，真核生物的啟動子必須與轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合后，才能被DNA聚合酶識別和結(jié)合，真核生物的啟動子元件是TATA蓋,TATA盒的核心序列是TATA（A/T）A（A/T）,位于轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)上游一25bp處,啟動子決定轉(zhuǎn)錄方向.模板鏈及轉(zhuǎn)錄效率。上游啟動子元件包括：CAAT盒，CACA盒和GC盒。28、逆轉(zhuǎn)錄：是指以RNA為模板，利用宿主細(xì)胞中4種dNTP為原料，在引物的3'端以5'-3'方向合成與RNA互補(bǔ)的DNA鏈的過程，此過程與中心法則方向相反，故稱為逆轉(zhuǎn)錄。29、原癌基因產(chǎn)物的類型及細(xì)胞定位①生長因子及其類似物，由細(xì)胞分泌，如C-sis家族（sis編碼血小板源生長因子，表達(dá)產(chǎn)物與PDGF鏈結(jié)構(gòu)同源）。②跨膜生長因子受體型的酪氨酸蛋白激酶，如erb-B,表皮細(xì)胞生長因子（EGF）受體；fims,巨噬細(xì)胞集落刺激因子受體；定位于質(zhì)膜。③細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)分子，定位于胞夜，包括A、低分子量G蛋白，如H-ras等基因表達(dá)產(chǎn)物；B、胞內(nèi)蛋白激酶（包括與膜結(jié)合的蛋白酪氨酸激酶和胞漿絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶），如src、abl。④核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子：如myc、fos等，定位于細(xì)胞核內(nèi)。⑤胞漿調(diào)節(jié)蛋白，如crk的產(chǎn)物是存在于胞漿中的調(diào)節(jié)蛋白，定位于胞漿。⑥可溶性蛋白酪氨酸激酶受體和非蛋白激酶受。30、細(xì)胞周期的主要調(diào)控點(diǎn)細(xì)胞周期的運(yùn)行受多種因素所調(diào)控，有2個主要調(diào)控點(diǎn)，亦稱為檢測點(diǎn)。①G/S期檢測點(diǎn)：在酵母中稱起點(diǎn)，1在哺乳細(xì)胞中稱限制點(diǎn)，是控制細(xì)胞進(jìn)入S期檢測點(diǎn)（G1期檢測點(diǎn)），cyclinB與CDK4和CDK6結(jié)合，cyclinE與CDK2,CDK3結(jié)合，通過磷酸化使它們活化。cyclin-CDK復(fù)合物可使Rb蛋白磷酸化，從而釋放轉(zhuǎn)錄因子E2F，促進(jìn)DNA復(fù)制相關(guān)基因的表達(dá)。CDK2也可和cyclinA、cyclinA1結(jié)合，促進(jìn)早S期DNA合成的起始。②G/M期檢測點(diǎn)：是控制細(xì)胞進(jìn)入M期檢測點(diǎn)色期檢測點(diǎn)），促有絲分裂因子（MPF）由cyclinB和CDK1組成，是啟動有絲分裂的關(guān)鍵因子。細(xì)胞何時進(jìn)入M期取決于Cdc2的磷酸化狀態(tài)。31、真核細(xì)胞轉(zhuǎn)染的基本方法：①磷酸鈣沉淀法。②電穿行法。③脂質(zhì)體介導(dǎo)的基因?qū)敕?。④DEAE-葡聚糖法。⑤顯微注射法。32、DNA損傷的主要類型①堿基和糖基破壞②錯配③DNA鏈斷裂：電離輻射致DNA損傷的主要形式④DNA變聯(lián)。上述DNA損傷可導(dǎo)致DNA模板發(fā)生堿基的置換、插入、缺失、鏈的斷裂，并可影響到染色體的高級結(jié)構(gòu)。DNA鏈中一種嘌吟被另一種嘌吟取代，或喀啶被另一種喀啶所取代，稱為轉(zhuǎn)換；嘌吟被喀吟取代，或反之，稱為顛換；轉(zhuǎn)換和顛換在DNA復(fù)制時可引起堿基錯配，導(dǎo)致基因突變；堿基的插入和缺失可引起移碼突變。33、DNA修復(fù)機(jī)制的主要類型①光修復(fù)；②切除修復(fù)；③重組修復(fù)；④SOS修復(fù)；⑤錯配修復(fù)。34、基因文庫篩選的主要方法及原理（1）根據(jù)抗藥性標(biāo)志篩選：對于帶有某種抗藥性標(biāo)志基因，只有轉(zhuǎn)化成功的受體菌才可能在含該抗生素的培養(yǎng)基中生存并形成菌落；而沒有轉(zhuǎn)化成功的受體菌，不能在培養(yǎng)基中生長，以此可選擇陽性菌。（2）根據(jù)菌落的呈色反應(yīng)篩選（互補(bǔ)、藍(lán)-白篩選）：根椐菌落的顏色并結(jié)合插入片段的序列測定篩選。（3）營養(yǎng)缺陷型標(biāo)記法：（4）核酸分子雜交法：即采用與目的基因部分互補(bǔ)的DNA片段作為探針，與含有重組體的細(xì)菌菌落進(jìn)行雜交，以確定重組體中帶目的基因。包括原位雜交和southern印跡雜交。（5）遺傳互補(bǔ)法：載體上的營養(yǎng)代謝標(biāo)記可以對宿主細(xì)胞的營養(yǎng)代謝缺陷進(jìn)行互補(bǔ)，以此作為篩選重組體的標(biāo)記。（6）免疫學(xué)方法：如果克隆基因的產(chǎn)物是已知的，并且在菌落或噬菌斑中表達(dá)，因而可以用相應(yīng)的抗血清或單克隆抗體，通過放射免疫、化學(xué)發(fā)光或顯色反應(yīng)進(jìn)行篩選。35、PCR的主要步驟及引物設(shè)計(jì)的基本要求①PCR的主要步驟：PCR又稱聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，是在體外進(jìn)行的DNA復(fù)制反應(yīng)過程。其基本過程包括：人、雙鏈DNA模板加熱變性成單鏈（變性），溫度95度左右。B、在低溫下引物與單鏈DNA互補(bǔ)配對（退火），85-90度。C、延伸：在四種DNTP底物及Mg2+存在條件下，工叫DNA聚合酶在最適作用溫度（70?75℃）下，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對原則，從特異結(jié)合到DNA模板上的引物3,-OH端開始摻入單核甘酸，合成新的DNA分子。②引物設(shè)計(jì)的基本要求：A、引物長度一般為15?30個核甘酸。B、引物中的堿基組成盡可能隨機(jī)分布，避免出現(xiàn)嘌吟、喀啶堿基堆積現(xiàn)象，尤其在3,端避免連續(xù)3個G或C。C、引物自身不應(yīng)存在互補(bǔ)序列以避免折疊成發(fā)夾結(jié)構(gòu)，引物自身存在的連續(xù)互補(bǔ)序列，一般不超過3bp。D、兩個引物之間不應(yīng)存在互補(bǔ)序列，尤其應(yīng)避免3,端的互補(bǔ)重疊。E、引物與非特異擴(kuò)增區(qū)的序列的同源性不要超過70%,引物3,末端連續(xù)8個堿基在待擴(kuò)增區(qū)以外不能有完全互補(bǔ)序列。F、引物與模板結(jié)合時，引物的5,端可以修飾。36、乳糖操縱子的正、負(fù)調(diào)節(jié)機(jī)制乳糖操縱子包含3個結(jié)構(gòu)基因Z.Y.A（編碼B-半乳糖苷酶，B-半乳糖苷通透酶和轉(zhuǎn)乙?；福?、3個調(diào)控元件（啟動子、操縱基因和CAP結(jié)合位點(diǎn)）和1個調(diào)節(jié)基因（編碼阻遏蛋白）。乳糖操縱子的轉(zhuǎn)錄起始是由CAP和阻遏蛋白兩種調(diào)控因子來調(diào)控的。（1）阻遏蛋白的負(fù)調(diào)控：無乳糖時，阻遏蛋白結(jié)合操縱基因，妨礙RNA聚合酶結(jié)合啟動子，從而抑制結(jié)構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄。有乳糖時，生成半乳糖（誘導(dǎo)劑）結(jié)合阻遏蛋白，使阻遏蛋白構(gòu)象改變，變構(gòu)的阻遏蛋白不能與操縱序列結(jié)合，阻遏機(jī)制解除，結(jié)構(gòu)基因可以轉(zhuǎn)錄，基因得以表達(dá)。③cAMP-CAP復(fù)合物的正調(diào)控:無葡萄糖時，cAMP濃度高，形成的cAMP-CAP復(fù)合物結(jié)合于CAP結(jié)合位點(diǎn)，增強(qiáng)啟動子轉(zhuǎn)錄活性，促進(jìn)下游基因得以表達(dá)；有葡萄糖時，cAMP濃度低，cAMP-CAP復(fù)合物形成受阻，影響轉(zhuǎn)錄活性。④正、負(fù)調(diào)控機(jī)制相輔相成：cAMP-CAP復(fù)合物是轉(zhuǎn)錄必需的，同時阻遏蛋白進(jìn)一步控制轉(zhuǎn)錄啟動。綜上，乳糖操縱子最強(qiáng)的表達(dá)條件是有乳糖而無葡萄糖。37、雙脫氧末端終止法DNA測序的主要步驟：雙脫氧末端終止法是以單鏈或雙鏈DNA為模板，采用DNA引物引導(dǎo)新生DNA的合成，又稱為引物合成法，或酶促引物合成法。其主要步驟為：①制備單鏈模板。②模板與測序引物結(jié)合。③摻入法標(biāo)記反應(yīng)。④延伸-終止反應(yīng)。⑤變性膠電泳。⑥放射自顯影。⑦閱讀測序結(jié)果。38、常用的分子生物學(xué)技術(shù)的原理、過程及特點(diǎn)①核酸分子雜交技術(shù)：基本原理是：具有互補(bǔ)序列的兩條單鏈核酸分子在一定條件下堿基互補(bǔ)配對結(jié)合，重新形成雙鏈；在這一過程中，核酸分子經(jīng)歷了變性和復(fù)性的變化，以及復(fù)性過程中各分子間鍵的形成和斷裂等。特點(diǎn)：直接檢測血清中病毒基因組，無須擴(kuò)增，靈敏度較PCR低。在雜交體系中已知的核酸序列稱作探針。②聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）：PCR的原理是根據(jù)待測DNA片段兩端的核苷酸序列，設(shè)計(jì)并人工合成兩個分別與DNA片段兩端互補(bǔ)的寡聚核甘酸引物，在有過量的引物、過量的底物（4種dNTP）、DNA聚合酶以及模板（待擴(kuò)增片段的DNA分子）的反應(yīng)體系中，經(jīng)過高溫變性（使DNA鏈解開）、低溫退火（使引物與模板結(jié)合）和適溫延伸（新合成的DNA片段）三個階段的循環(huán)周期，對DNA分子進(jìn)行擴(kuò)增。特點(diǎn)：極強(qiáng)的擴(kuò)增能力,度高靈敏性,高度特異性，只需微量模板，只需數(shù)小時,擴(kuò)增產(chǎn)物量大,變性.復(fù)性.延伸三個步聚循環(huán)進(jìn)行,操作簡便，適用廣泛，但可出現(xiàn)假陽性.③DNA序列測定：DNA序列測定是在高分辨率變性聚丙烯酰胺凝膠電泳技術(shù)的基礎(chǔ)上建立起來的，包括Sanger雙脫氧鏈末端終止法和化學(xué)降解法。Sanger法的基本原理是：雙脫氧核甘酸（ddNTP）在DNA合成過程中代替相應(yīng)的脫氧核甘酸（dNTP）作為底物，不能形成3,，5,-磷酸二酯鍵而導(dǎo)致鏈延伸終止?；瘜W(xué)降解法：是采用化學(xué)試劑處理末端放射性標(biāo)記的DNA單鏈片段，造成堿基特異性切割，由此產(chǎn)生一組具有不同長度的DNA鏈的反應(yīng)混合物，經(jīng)凝膠電泳按分子大小分離和放射自顯影，直接讀出待測DNA的核甘酸順序。④DNA芯片技術(shù)：DNA芯片技術(shù)是一種大規(guī)模集成的固相核酸分子雜交，以大量已知堿基序列的寡核甘酸片段為探針，檢測樣品中哪些核酸序列與其互補(bǔ)，然后通過定性、定量分析得出待測樣品的基因序列及表達(dá)的信息。DNA芯片的主要技術(shù)流程包括：芯片的設(shè)計(jì)與制備、靶基因的標(biāo)記（常用熒光色素.生物素或放射性核素標(biāo)記dNTP）、芯片雜交與雜交信號檢測。特點(diǎn)：高通量.鑒別診斷。酶：DNA聚合酶。所需探針：合成的寡核背酸片段，cDNA,已克隆的基因片段，雙鏈或單鏈DNA或RNA,肽核酸。⑤基因克隆技術(shù)（重組DNA技術(shù)）：基因克隆是指某種目的基因的擴(kuò)增與分離過程，具體是從基因組或DNA大片段中分離并獲得某一特定的基因或DNA片段，再通過DNA序列擴(kuò)增形成由眾多拷貝組成的DNA拷貝群體的過程。其基本過程為：A-目的基因的制備；栽體的選擇與制備；B-DNA分子的體外連接；C-將外源DNA導(dǎo)入宿主細(xì)胞；D-目的基因的篩選與鑒定；E-DNA重組體的擴(kuò)增與表達(dá)39、原核生物與真核生物轉(zhuǎn)錄調(diào)控的特點(diǎn)比較：①兩者均涉及RNA聚合酶和轉(zhuǎn)錄調(diào)控序列（啟動子等）的相互作用。②真核需要多種轉(zhuǎn)錄因子輔助、原核不需要。③真核以正調(diào)控為主，原核以負(fù)調(diào)控為主。④真核3種RNA聚合酶負(fù)責(zé)不同種類基因的轉(zhuǎn)錄，原核只有1種RNA聚合酶。40、原核生物和真核生基因表達(dá)調(diào)控特點(diǎn)的比較。①相同點(diǎn)：轉(zhuǎn)錄起始是基因表達(dá)調(diào)控的關(guān)鍵環(huán)節(jié)②不同點(diǎn)：A、原核基因表達(dá)調(diào)控主要包括轉(zhuǎn)錄和翻譯水平；真核基因表達(dá)調(diào)控主要包括染色質(zhì)活化、轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)錄后加工、翻譯、翻譯后加工多個層次。B、原核基因表達(dá)調(diào)控主要為負(fù)調(diào)節(jié)，真核主要為正調(diào)節(jié)。C、原核轉(zhuǎn)錄起始不需要轉(zhuǎn)錄因子，RNA聚合酶直接結(jié)合啟動子，由。因子決定基因表達(dá)的特異性；真核轉(zhuǎn)錄起始需要基礎(chǔ)、特異兩類轉(zhuǎn)錄因子，依賴DNA-蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用，調(diào)控轉(zhuǎn)錄激活。D、原核基因表達(dá)調(diào)控主要采用操縱子模型，轉(zhuǎn)錄出多順反子RNA，實(shí)現(xiàn)協(xié)調(diào)調(diào)節(jié)；真核基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為單順反子RNA，功能相關(guān)蛋白質(zhì)的協(xié)調(diào)表達(dá)機(jī)制更為復(fù)雜。41、質(zhì)粒的特征：①原核細(xì)胞中染色體外的共價(jià)閉合的環(huán)狀DNA分子。②能獨(dú)立于細(xì)胞的染色體而進(jìn)行復(fù)制，并依賴于宿主細(xì)胞。③在同一宿主中具有不相容性，即具有相同復(fù)制起始位點(diǎn)和分配區(qū)的兩種質(zhì)粒不能共存于一個宿主菌。④具有嚴(yán)格的遺傳控制系統(tǒng)（復(fù)制調(diào)控系統(tǒng)，分配系統(tǒng)，細(xì)胞分裂控制系統(tǒng)，位點(diǎn)特異重組系統(tǒng)）。⑤其所攜帶的遺傳信息能賦予宿主細(xì)胞特定的遺傳性狀。⑥是DNA重組技術(shù)中所使用的主要載體。作為克隆載體的質(zhì)粒具有的特點(diǎn)：分子量較小，能在細(xì)菌內(nèi)穩(wěn)定存在，有較高的拷貝數(shù)；具有一個以上的遺傳標(biāo)志；具有多個限制酶的單一切點(diǎn)，稱為多克隆位點(diǎn)，便于外源基因的插入。42、真核生物基因組結(jié)構(gòu)與功能的特點(diǎn)。①每一種真核生物都有一定的染色體數(shù)目，體細(xì)胞一般為雙倍體。②真核基因組遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于原核生物的基因組，具有許多復(fù)制起點(diǎn)。③真核基因組由一個結(jié)構(gòu)基因與相關(guān)的調(diào)控區(qū)組成，轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為單順反子，即一分子mRNA只能翻譯一種蛋白質(zhì)。④真核生物分子含有大量重復(fù)順序。⑤真核生物基因組內(nèi)非編碼的順序占90%以上。⑥真核基因是斷裂基因。⑦功能相關(guān)的基因構(gòu)成各種基因家族。⑧真核生物基因組中也存在一些可移動的遺傳因素。43、蛋白質(zhì)生物合成后的靶向輸送過程及特點(diǎn)：蛋白質(zhì)合成后，定向地被輸送到最終發(fā)揮生物學(xué)功能的部位稱為靶向輸送。靶向輸送的蛋白質(zhì)的N端往往有一些特異的氨基酸序列，稱為信號序列，是決定蛋白質(zhì)靶向輸送特性的重要元件，通過信號序列引導(dǎo)蛋白質(zhì)從胞漿進(jìn)入內(nèi)質(zhì)網(wǎng).線粒體.葉綠體和核內(nèi)，靶向不同的蛋白質(zhì)各有特異的信號序列。分泌型蛋白合成后進(jìn)入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，經(jīng)加工，包裝成分泌小泡，再轉(zhuǎn)移.融合到靶部位或分泌出細(xì)胞，其靶向輸送主要靠信號肽與胞漿中的信號肽識別粒子（SRP）識別并特異結(jié)合，然后再通過SRP與膜上的對接蛋白（DP）識別并結(jié)合后，將所攜帶的蛋白質(zhì)送出細(xì)胞；線粒體蛋白的靶向輸送靠導(dǎo)肽與多種蛋白復(fù)合體介導(dǎo)進(jìn)入基質(zhì)和膜間腔，然后自發(fā)的或在分子伴侶HSP70幫助下折疊形成有功能的蛋白質(zhì)；而細(xì)胞核蛋白的靶向輸送則通過核定位信號與核輸入受體結(jié)合形成核蛋白-受體復(fù)合物，被導(dǎo)出核孔，再與核孔復(fù)合體結(jié)合后進(jìn)入細(xì)胞核。44、核酸分子雜交的基本方法包括：Southern印跡雜交（鑒別DNA靶分子的雜交、待測核酸是DNA片段）、Northern印跡雜交（鑒別RNA靶分子、待測核酸是RNA）、斑點(diǎn)雜交、原位雜交和液相雜交。45、DNA復(fù)制與轉(zhuǎn)錄的異同。相同點(diǎn)：①模板是DNA②遵守堿基互補(bǔ)規(guī)律③新鏈合成方向?yàn)?'-3'④催化核甘酸以磷酸二酯鏈連接⑤合成部位在細(xì)胞核。不同點(diǎn)：①復(fù)制的原材料是dNTP,轉(zhuǎn)錄的原料是NTP②復(fù)制的主要酶類是DNA聚合酶，轉(zhuǎn)錄酶是RNA聚合酶③復(fù)制需要RNA引物，轉(zhuǎn)錄不需要引物④復(fù)制的產(chǎn)物是雙鏈DNA,轉(zhuǎn)錄的產(chǎn)物是單鏈RNA⑤復(fù)制的模板是DNA雙鏈（半保留復(fù)制），轉(zhuǎn)錄的模板是DNA單鏈（不對稱轉(zhuǎn)錄）⑥復(fù)制的功能是傳遞遺傳信息給子代，轉(zhuǎn)錄是表達(dá)信息所需步聚.46、雙脫氧核昔酸末端終止法DNA序列測定中所需要的順序試劑：Mis載體、dNTP、DNA聚合酶I的klenow片段，逆轉(zhuǎn)錄酶，TqaDNA聚合酶（耐熱DNA聚合酶），經(jīng)過修飾的T7噬菌菌體DNA聚合酶，測序酶2.0版，雙脫氧核苷三磷酸（即2',3'-ddNTP）、dNTP類似物，放射性標(biāo)記的[a-32P]dNTP。47、PCR體系的主要成分。引物、TaqDNA聚合酶、dNTP、模板核酸、緩沖液。48、DNA聚合酶I的作用特點(diǎn)：①模板為DNA,②底物為4種脫氧核甘酸（dATP、dCTP、dGTP、dTTP）,③Mg2+參與，④DNA合成方向?yàn)?'f3',⑤具有DNA聚合酶活性，3'f5'及5'f3'核酸外切酶活性，其5'-3'核酸外切酶活性，用于缺口平移法標(biāo)記DNA探針。基因治療的方法有兩種：體內(nèi)直接轉(zhuǎn)基因，稱為體內(nèi)法；細(xì)胞介導(dǎo)的基因治療，稱為回體法。基因滅活技術(shù)有：反義核酸技術(shù)，核酶技術(shù)，三鏈技術(shù)，干擾RNA技術(shù)。人的DNA端粒含有TTAGGG重復(fù)序列。.信號肽的特點(diǎn)：能與細(xì)胞質(zhì)中的信號識別顆粒結(jié)合,SRP受體是蛋白質(zhì)進(jìn)入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)所必需的,N端一小段富含蔬水氨基酸的序列,翻譯的同時引導(dǎo)新生多肽鏈穿過內(nèi)質(zhì)網(wǎng).基因組文庫一采用限制酶將基因組DNA切成片段，每一DNA片段都與一個載體分子拼接成重組DNA,將全部DNA分子都引入宿主細(xì)胞并擴(kuò)增所得到的分子克隆混合體叫基因組文庫。.基因重組是指DNA之間的共價(jià)連接.在分子克隆中的克隆是指無性繁殖DNA?；蚬こ讨心康幕虻膩碓纯梢允?化學(xué)合成.PCR合成.細(xì)胞DNA.組織DNA.cDNA文庫。分子生物學(xué)需要掌握的重點(diǎn)：DNA、RNA、蛋白質(zhì)、質(zhì)粒、基因、端粒、聚合酶、密碼子、突變、變性的概念或結(jié)構(gòu)、性質(zhì)及特點(diǎn)；復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、逆轉(zhuǎn)錄、翻譯、加工修飾、靶向輸送的主要過程及特點(diǎn)；癌基因的概念、原癌基因產(chǎn)物的類型及細(xì)胞定位、癌基因活化致癌的主要機(jī)制；常用分子生物學(xué)技術(shù)的原理、主要步驟、酶學(xué)及特點(diǎn)；基因表及其調(diào)控的原理、主要過程或步驟，乳糖操縱子的正、負(fù)調(diào)節(jié)機(jī)制；常用的基因診斷及基因治療技術(shù)；基因克隆、基因診斷、基因治療、管家基因、抑癌基因、Klenow片段、核蛋白體、限制性內(nèi)切核酸酶、人類基因組計(jì)劃、原位雜交的概念；雙脫氧末端終止法DNA測序、重組DNA技術(shù)的主要步驟；結(jié)構(gòu)基因、順式作用元件、啟動子、遺傳密碼、反式作用因子、氨基酰-tRNA、基因組文庫、DNA多態(tài)性、轉(zhuǎn)位因子、探針、Tm值、DNA微陣列、DNA甲基化的概念、性質(zhì)；核酸分子雜交的主要類型、PCR的主要步驟及引物設(shè)計(jì)；DNA、RNA及多肽鏈的合成方向；真核細(xì)胞轉(zhuǎn)染的基本方法；細(xì)胞周期的主要調(diào)控點(diǎn)；DNA損傷及修復(fù)的主要類型和機(jī)制；基因文庫篩選的主要方法及原理?！夺t(yī)學(xué)分子生物學(xué)》主要內(nèi)容1、醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)：醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)是分子生物學(xué)的一個重要分支，是從分子水平研究人體在正常和疾病狀態(tài)下生命活動及其規(guī)律的一門科學(xué)。2、基因的概念、功能基因：是貯存遺傳信息的核酸（DNA或RNA）片段，包括編碼RNA和蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因以及轉(zhuǎn)錄調(diào)控序列兩部分?；虻墓δ埽?、利用4種堿基的不同排列荷載遺傳信息；2、通過復(fù)制將所有的遺傳信息穩(wěn)定、忠實(shí)地遺傳個子代細(xì)胞；3、作為基因表達(dá)的模版。3、DNA、RNA的結(jié)構(gòu)和功能功能：DNA:DNA的基本功能是以基因的形式荷載遺傳信息，并作為基因復(fù)制和轉(zhuǎn)錄的模板。它是生命遺傳的物質(zhì)基礎(chǔ)，也是個體生命活動的信息基礎(chǔ)。RNA:1、mRNA：攜帶蛋白質(zhì)的序列信息，在翻譯過程作為模板指導(dǎo)蛋白質(zhì)的合成2、tRNA:在蛋白質(zhì)生物合成時運(yùn)輸氨基酸3、核蛋白體：介導(dǎo)rRNA與mRNA的結(jié)合rRNA與核蛋白體蛋白的結(jié)合rRNA與tRNA的相互識別和相互作用4、小分子RNA：參與mRNA的剪接、加工U3與rRNA加工有關(guān)4、不同生物基因的基本結(jié)構(gòu)特點(diǎn)原核生物：5’-啟動子-結(jié)構(gòu)基因-轉(zhuǎn)錄終止子-3’真核生物：由1個結(jié)構(gòu)基因+轉(zhuǎn)錄調(diào)控序列組成，mRNA多是單順反子，rRNA基因結(jié)構(gòu)是多順反子病毒：與真核基因相比很小，一般沒有內(nèi)含子，調(diào)控序列較少，有不規(guī)則基因5、原核、真核生物基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控序列有哪些（1）原核生物：啟動子、終止子、操縱原件、正調(diào)控蛋白結(jié)合位點(diǎn)；①啟動子：提供轉(zhuǎn)錄起始信號，其本身不出現(xiàn)于RNA產(chǎn)物中。其中有著“TATAAT”的共有特征序列，稱為普里布諾盒。②終止子：提供RNA合成終止信號。其含有GC富集區(qū)組成的回文特征序列。③操縱元件：被阻遏蛋白識別與結(jié)合。與啟動子通常有部分重疊。④正調(diào)控蛋白結(jié)合位點(diǎn)：加強(qiáng)下游結(jié)構(gòu)基因的轉(zhuǎn)錄。（2）真核生物：啟動子、上游啟動子元件、增強(qiáng)子、加尾信號和一些反應(yīng)元件等。①啟動子：提供轉(zhuǎn)錄起始信號，啟動子本身通常不被轉(zhuǎn)錄，除了編碼tRNA基因的啟動子。分為三類：I類啟動子富含GC堿基對，編碼rRNA的基因，除了5SrRNA。II類啟動子具有TATA盒特征結(jié)構(gòu)，編碼蛋白質(zhì)（mRNA）的基因和一些小RNA基因。III類啟動子包括A盒、B盒、C盒，編碼5SrRNA、tRNA、U6snRNA。②增強(qiáng)子：順式作用元件，增強(qiáng)鄰近基因的轉(zhuǎn)錄。③沉默子：負(fù)性調(diào)控元件，可抑制基因轉(zhuǎn)錄的特定序列。6、操縱子、啟動子、增強(qiáng)子、斷裂基因、內(nèi)含子和外顯子的概念操縱子：功能上相關(guān)聯(lián)的數(shù)個結(jié)構(gòu)基因串聯(lián)在一起，由一套轉(zhuǎn)錄調(diào)控序列控制其轉(zhuǎn)錄，構(gòu)成的基因表達(dá)單位。啟動子：指結(jié)構(gòu)基因的轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)附近的一段DNA序列，它結(jié)合RNA聚合酶（真核生物還需要結(jié)合其他蛋白質(zhì)因子）后能夠開放基因轉(zhuǎn)錄。增強(qiáng)子：是可以增強(qiáng)真核生物基因啟動子的工作效率的順式作用元件。斷裂基因：真核生物的結(jié)構(gòu)基因中，編碼區(qū)與非編碼區(qū)間隔排列。內(nèi)含子：指在真核生物的斷裂基因及其初級轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物中出現(xiàn)，但在成熟RNA中被剪接除去的核酸序列。10外顯子：指在真核生物的斷裂基因及其成熟RNA中都存在的核酸序列。7、基因組的定義和功能定義：細(xì)胞或生物體中，一套完整單倍體的遺傳物質(zhì)的總和。功能：儲存和表達(dá)遺傳信息8、真核生物基因組的特點(diǎn)真核生物的基因組龐大，出了結(jié)構(gòu)基因的結(jié)構(gòu)與原核生物大不相同以外，還存在大量的非結(jié)構(gòu)基因區(qū)域。真核細(xì)胞基因組具有結(jié)構(gòu)基因呈斷裂基因形式、以單順反子轉(zhuǎn)錄、結(jié)構(gòu)基因在基因組中所占比例小于非編碼區(qū)域的特點(diǎn)。真核細(xì)胞基因組存在大量重復(fù)序列，可以分為高度重復(fù)序列、中毒重復(fù)序列和單拷貝或低度重復(fù)序列等3種。真核基因組的另一特點(diǎn)是存在多基因家族。9、原核生物基因組的特點(diǎn)原核生物的基因組主要是染色體DNA。特點(diǎn)：1、基因組中很少有重復(fù)序列；2、編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因多為單拷貝基因，但編碼rRNA的基因仍然是多拷貝基因；3、結(jié)構(gòu)基因在基因組中所占的比例遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于真核基因組，但小于病毒基因組；4、許多結(jié)構(gòu)基因在基因組中以操縱子為單位排列。10、質(zhì)粒、基因重疊、基因組、假基因、核酶質(zhì)粒：細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)的、染色體外的DNA分子，是共價(jià)閉合的環(huán)狀DNA分子，能夠獨(dú)立于細(xì)胞的染色質(zhì)DNA而進(jìn)行復(fù)制。基因重疊：同一DNA片段可以是2種甚至3種蛋白質(zhì)分子的部分編碼區(qū)?；蚪M：細(xì)胞或生物體中，一套完整單倍體的遺傳物質(zhì)的總和。假基因：與有功能的基因同源，但不能產(chǎn)生有功能的基因產(chǎn)物的基因。核酶：指具有催化活性的RNA，其作用底物是RNA，主要參與RNA的加工成熟。11、DNA復(fù)制過程的共同特點(diǎn)1、半保留復(fù)制方式保證了遺傳信息的忠實(shí)傳遞；2、基因組DNA都有固定的復(fù)制起始點(diǎn)；3、復(fù)制子是基本復(fù)制單位；4、雙向復(fù)制形成復(fù)制泡和復(fù)制叉；5、半不連續(xù)復(fù)制方式克服了DNA空間結(jié)構(gòu)對DNA新鏈合成的制約。12、DNA復(fù)制保真性的機(jī)制1、DNA聚合酶對堿基配對的選擇作用，保證嚴(yán)格的堿基配對規(guī)律；2、DNA聚合酶對模板的識別作用；3、DNA聚合酶3'f5’外切活性的校正作用，復(fù)制出錯時有即時的糾錯功能。13、真核生物DNA復(fù)制的基本過程1、DNA復(fù)制的起始；2、DNA鏈的延伸。DNA鏈的延伸主要由DNA聚合酶完成。DNA聚合酶催化的反應(yīng)是以親代DNA為模板、4種脫氧核糖核苷三磷酸，即dATP、dGTP、dCTP、dTTP為原料底物，一句堿基配對原則，在RNA引物鏈的3'-OH上開始逐個添加dNTP,從而延伸為子代DNA鏈；3、復(fù)制的終止。復(fù)制的終止過程包括去除RNA引物、岡崎片段的連接等反應(yīng)，最終形成兩個完整的子代DNA雙鏈。14、端粒、端粒酶端粒：是位于真核生物染色體末端的、由DNA和蛋白質(zhì)組成的一膨出結(jié)構(gòu)。端粒DNA由短的高度重復(fù)序列組成，不同生物的重復(fù)序列不同。端粒酶：是反轉(zhuǎn)錄酶，由蛋白質(zhì)和RNA共同組成能以自身的RNA為模板反復(fù)延伸端粒的重復(fù)序列。15、DNA損傷的因素、類型DNA損傷的因素包括：電離輻射、紫外線、堿基類似物、堿基修飾劑、某些化學(xué)染料和自由基。DNA損傷的類型有堿基和糖基破壞、錯配、DNA鏈斷裂、DNA交聯(lián)等。16、DNA損傷的修復(fù)方式DNA損傷的修復(fù)方式：直接修復(fù)、切除修復(fù)、重組修復(fù)和損傷跨越。17、切除修復(fù)、重組修復(fù)切除修復(fù)：在多種酶作用下，先將損傷區(qū)域切除，然后利用互補(bǔ)鏈為模板，合成一段正確配對的堿11基順序來修補(bǔ)。重組修復(fù)：重組酶系將未受損傷的DNA片段移到損傷部位，提供正確的模板，進(jìn)行修復(fù)。18、基因表達(dá)的概念基因表達(dá)：指基因轉(zhuǎn)錄及翻譯的過程，基因表達(dá)的最終產(chǎn)物是蛋白質(zhì)或者rRNA、tRNA等。管家基因是組成性表達(dá)，而可調(diào)節(jié)基因的表達(dá)具有時空特異性。19、何為轉(zhuǎn)錄？轉(zhuǎn)錄的體系？復(fù)制和轉(zhuǎn)錄的區(qū)別有哪些？轉(zhuǎn)錄：以DNA為模板合成RNA的過程稱為轉(zhuǎn)錄。轉(zhuǎn)錄體系：1、模板：DNA；2、原料：ATP、GTP、CTP、UTP；3、RNA聚合酶：原核細(xì)胞：全酶a200'O；真核細(xì)胞：RNA聚合酶I、II、III復(fù)制和轉(zhuǎn)錄的不同點(diǎn)：1）復(fù)制的模板是DNA雙鏈（半保留復(fù)制），轉(zhuǎn)錄的模板是DNA單鏈（不對稱轉(zhuǎn)錄）。2）復(fù)制的原料是dNTP，轉(zhuǎn)錄的原料是NTP。3）復(fù)制的主要酶類是DNA聚合酶，轉(zhuǎn)錄酶是RNA聚合酶。4）復(fù)制需要RNA引物（由引物酶合成），轉(zhuǎn)錄不需要引物。5）復(fù)制的產(chǎn)物是雙鏈DNA，轉(zhuǎn)錄的產(chǎn)物是單鏈RNA。6）復(fù)制的功能是傳遞遺傳信息給子代，轉(zhuǎn)錄是表達(dá)遺傳信息所需步驟。20、原核、真核生物RNA轉(zhuǎn)錄的基本過程轉(zhuǎn)錄起始：轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合體在啟動子部位形成（形成開放轉(zhuǎn)錄復(fù)合體）①原核生物：RNA聚合酶與啟動子相互作用。②真核生物：RNA聚合酶、反式作用因子與順式作用元件相互作用。轉(zhuǎn)錄延長：RNA鏈隨著轉(zhuǎn)錄泡的移動得以延長①原核生物：核心酶催化（a20'03） ②真核生物：磷酸化的RNA聚合酶催化，核小體解聚。轉(zhuǎn)錄終止：轉(zhuǎn)錄終止受DNA模板上終止信號的控制①原核生物：a.依賴p因子：p因子與RNA轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物結(jié)合，結(jié)合后p因子和RNA聚合酶發(fā)生構(gòu)象變化，使RNA聚合酶停頓，轉(zhuǎn)錄停止。b.非依賴p因子：DNA模板上靠近終止處有些特殊堿基序列，轉(zhuǎn)錄出RNA后，RNA產(chǎn)物形成特殊的莖環(huán)結(jié)構(gòu)來終止轉(zhuǎn)錄。②真核生物：轉(zhuǎn)錄終止的修飾點(diǎn)處切離并加尾。21、蛋白質(zhì)合成體系蛋白質(zhì)合成體系：1、模板：mRNA；2、氨基酸運(yùn)輸：tRNA;3、肽鏈合成場所：核糖體；4、蛋白質(zhì)因子：起始、延長、終止因子；5、原料：20種有遺傳密碼的氨基酸22、原核、真核生物翻譯的基本過程：1、起始：形成翻譯起始復(fù)合物；2延長：只每加一個氨基酸經(jīng)過進(jìn)位、成肽和轉(zhuǎn)位；3、終止：原核細(xì)胞：RF1，RF2識別終止密碼，RF3激活轉(zhuǎn)肽酶釋放肽鏈；真核細(xì)胞：eRF同時具有上述功能。23、基因表達(dá)調(diào)控的基本規(guī)律（包括基因表達(dá)的特點(diǎn)、方式等）1、基因表達(dá)具有時空特異性；2、誘導(dǎo)表達(dá)和阻遏表達(dá)時基因表達(dá)調(diào)控的最普遍方式；3、基因表達(dá)受順式作用元件和反式作用元件因子共同調(diào)節(jié)；4、蛋白質(zhì)-DNA以及蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)的相互作用是基因表達(dá)調(diào)控的分子基礎(chǔ)；5、基因表達(dá)調(diào)控是多層次的復(fù)雜調(diào)節(jié)。24、RNA編輯、核蛋白體循環(huán)、分子伴侶RNA編輯：指細(xì)胞核中初級轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物hnRNA的序列改變，使C變?yōu)閁或者A變?yōu)镚，結(jié)果一個基因表達(dá)產(chǎn)生不止一種蛋白質(zhì)，增加了遺傳信息容量。核蛋白體循環(huán)：是指氨基酸活化后，在核蛋白體上縮合形成多肽鏈的過程，該過程包括肽鏈合成的起始，肽鏈的延長，肽鏈合成的終止和釋放。分子伴侶：幫助新生多肽鏈折疊成天然空間構(gòu)象的一類保守蛋白質(zhì)（如熱休克蛋白），在原核細(xì)胞和真核細(xì)胞中廣泛存在。25、乳糖操縱子作用機(jī)制（1）乳糖操縱子包含3個結(jié)構(gòu)基因（編碼0—半乳糖苷酶、0—半乳糖背通透酶和轉(zhuǎn)乙?；福?、3個調(diào)控元件（啟動子、操縱基因和CAP結(jié)合位點(diǎn)）和1個調(diào)節(jié)基因（編碼阻遏蛋白）。（2）阻遏蛋白的負(fù)調(diào)控：無乳糖時，阻遏蛋白結(jié)合操縱基因，妨礙RNA聚合酶結(jié)合啟動子，抑制結(jié)構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄。有乳糖時，生成別位乳糖（誘導(dǎo)劑）結(jié)合阻遏蛋白，不能封閉操縱基因，結(jié)構(gòu)基因可以轉(zhuǎn)錄。（3）cAMP-CAP12復(fù)合物的正調(diào)控：無葡萄糖時，cAMP濃度高，形成的cAMP-CAP復(fù)合物結(jié)合于CAP結(jié)合位點(diǎn)，增強(qiáng)啟動子轉(zhuǎn)錄活性。有葡萄糖時，cAMP濃度低，cAMP-CAP復(fù)合物形成受阻，影響轉(zhuǎn)錄活性。（4）正、負(fù)調(diào)控機(jī)制相輔相成。cAMP-CAP復(fù)合物是轉(zhuǎn)錄必需的，同時阻遏蛋白進(jìn)一步控制轉(zhuǎn)錄啟動。綜上，乳糖操縱子最強(qiáng)的表達(dá)條件是有乳糖而無葡萄糖。26、試述原核生物和真核生物基因表達(dá)調(diào)控特點(diǎn)的異同（1）相同點(diǎn)轉(zhuǎn)錄起始是基因表達(dá)調(diào)控的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。（2）不同點(diǎn)1）原核基因表達(dá)調(diào)控主要包括轉(zhuǎn)錄和翻譯水平；真核基因表達(dá)調(diào)控包括染色質(zhì)活化、轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)錄后加工、翻譯、翻譯后加工多個層次。2）原核基因表達(dá)調(diào)控主要為負(fù)調(diào)節(jié)；真核基因表達(dá)調(diào)控主要為正調(diào)節(jié)。3）原核轉(zhuǎn)錄起始不需要轉(zhuǎn)錄因子，RNA聚合酶直接結(jié)合啟動子，由。因子決定基因表達(dá)的特異性；真核轉(zhuǎn)錄起始需要基礎(chǔ)、特異兩類轉(zhuǎn)錄因子，依賴DNA一蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)一蛋白質(zhì)相互作用，調(diào)控轉(zhuǎn)錄激活。4）原核基因表達(dá)調(diào)控主要采用操縱子模型，轉(zhuǎn)錄出多順反子RNA,實(shí)現(xiàn)協(xié)調(diào)調(diào)節(jié);真核基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為單順反子RNA,功能相關(guān)蛋白質(zhì)的協(xié)調(diào)表達(dá)機(jī)制更為復(fù)雜。27、細(xì)胞通訊、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的概念細(xì)胞通訊：生物體內(nèi)各種細(xì)胞在功能上的協(xié)調(diào)統(tǒng)一是通過細(xì)胞間相互識別和相互作用的機(jī)制來實(shí)現(xiàn)的，這種機(jī)制稱為細(xì)胞通訊。信號轉(zhuǎn)導(dǎo)：是通過多種分子相互作用的一系列有序反應(yīng)、將來自細(xì)胞外的信息傳遞到細(xì)胞內(nèi)各種效應(yīng)分子的過程。28、化學(xué)信號分子的分類化學(xué)信號分子可根據(jù)物理性質(zhì)分為脂溶性化學(xué)信號和水溶性化學(xué)信號兩大類。從其作用距離考慮則可分為激素、神經(jīng)遞質(zhì)和屬于旁分泌系統(tǒng)的細(xì)胞因子、生長因子等三大類。29、受體的概念、分類、作用和特點(diǎn)（1）概念：受體位于細(xì)胞膜或細(xì)胞內(nèi)，能特異識別生物活性分子，可與之相互結(jié)合，進(jìn)而引起生物學(xué)效應(yīng)的蛋白質(zhì)，以及個別糖脂。（2）分類：膜受體和胞內(nèi)受體1）膜受體分類：①離子通道型受體與此類受體結(jié)合的主要是神經(jīng)遞質(zhì)，介導(dǎo)離子通道的打開和關(guān)閉，改變膜通透性，能迅速、準(zhǔn)確地傳遞神經(jīng)沖動，作用時間很短。②G蛋白偶聯(lián)受體又名七次跨膜受體，胞漿面的第三個環(huán)能與鳥甘酸結(jié)合蛋白偶聯(lián)，通過不同的G蛋白影響腺昔酸環(huán)化酶或磷脂酶C改變細(xì)胞內(nèi)第二信使?jié)舛?，以?shí)現(xiàn)跨膜信號傳遞。③單次a螺旋跨膜受體結(jié)構(gòu)上具有一個跨膜a螺旋，包括受體型酪氨酸蛋白激酶和非酪氨酸蛋白激酶型受體。2）胞內(nèi)受體：多為反式作用因子，當(dāng)其與相應(yīng)配體（例