急性毒性試驗(yàn)－LD50

與LC50

測(cè)定急性毒性實(shí)驗(yàn)終結(jié)版專家講座第1頁(yè)急性毒性試驗(yàn)試驗(yàn)?zāi)繕?biāo)及意義： 確定受試物半數(shù)致死劑量LD50/LC50、觀察受試物所致急性中毒癥狀及其毒性作用特點(diǎn)，為深入毒性試驗(yàn)提供主要參考依據(jù)。 急性毒性試驗(yàn)染毒方式可有各種，包含經(jīng)口、經(jīng)呼吸道、經(jīng)皮及注射染毒方式等。急性毒性實(shí)驗(yàn)終結(jié)版專家講座第2頁(yè)經(jīng)口急性毒性試驗(yàn)（LD50）

試驗(yàn)?zāi)繕?biāo)

學(xué)習(xí)急性毒性試驗(yàn)試驗(yàn)設(shè)計(jì)標(biāo)準(zhǔn)熟練掌握經(jīng)口灌胃染毒操作技術(shù)掌握LD50計(jì)算方法和急性毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)

試驗(yàn)內(nèi)容動(dòng)物選擇和性別判定稱重、編號(hào)和隨機(jī)分組小鼠經(jīng)口灌胃操作技術(shù)

毒性癥狀觀察、LD50計(jì)算和毒性分級(jí)急性毒性實(shí)驗(yàn)終結(jié)版專家講座第3頁(yè)操作步驟動(dòng)物選擇及性別識(shí)別 急性毒性試驗(yàn)普通首選哺乳動(dòng)物，其中又以大小鼠最為慣用。大、小鼠主要依據(jù)肛門與生殖器之間距離來(lái)區(qū)分。遠(yuǎn)——♂、近——♀。成年鼠：雄性臥位可見睪丸，雌性可見腹部有12個(gè)乳頭。動(dòng)物稱重、編號(hào)和隨機(jī)分組應(yīng)依據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行隨機(jī)分組。12345612...組數(shù)只數(shù)體重123456789急性毒性實(shí)驗(yàn)終結(jié)版專家講座第4頁(yè)受試物劑量選擇對(duì)于一個(gè)新化學(xué)物質(zhì)，劑量選擇可參考同系物毒性或文件資料加以預(yù)計(jì)，先用少許動(dòng)物以組距較大一系列劑量進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)，找出粗略致死劑量范圍，然后再設(shè)計(jì)出正式試驗(yàn)劑量組受試物配制 此次試驗(yàn)所用受試物是80％敵敵畏(DDVP)原液。按照事先設(shè)計(jì)劑量分別稀釋配制為幾個(gè)不一樣濃度受試物溶液，而各個(gè)劑量組動(dòng)物均給予相同單位體重體積受試化學(xué)物。急性毒性實(shí)驗(yàn)終結(jié)版專家講座第5頁(yè)劑量mg/kg

原液量(g)原液量(ml)定容量(ml)原液量(ml)36.440.11390.0813500.094851.020.15940.1139500.132771.430.22320.1594500.18581000.31250.2232500.26031400.43750.3125500.36421960.61250.4375500.5099敵敵畏（DDVP）配制：（組距1.4，給藥量0.2ml/10g）（4℃）（25℃）急性毒性實(shí)驗(yàn)終結(jié)版專家講座第6頁(yè)灌胃操作將動(dòng)物固定成垂直體位，腹部面向操作者，使動(dòng)物上消化道固定成一直線毒性作用/中毒癥狀和動(dòng)物死亡情況觀察 高劑量組動(dòng)物死亡常很快發(fā)生，染毒后應(yīng)即刻親密觀察。觀察和統(tǒng)計(jì)中毒癥狀及出現(xiàn)時(shí)間，死亡數(shù)量和時(shí)間及死亡前特征。按照試驗(yàn)結(jié)果，填寫急性毒性試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)表。 中毒癥狀觀察：興奮、流涎、肌震顫、抽搐、管狀尾、呼吸減慢、呼吸困難、四肢無(wú)力、站立不穩(wěn)、大小便失禁、大劑量側(cè)臥以致死亡。急性毒性實(shí)驗(yàn)終結(jié)版專家講座第7頁(yè) 改進(jìn)寇氏法是利用劑量對(duì)數(shù)與死亡率呈S型曲線而設(shè)計(jì)方法，又稱Karber法或平均致死量法。本法要求每個(gè)染毒劑量組動(dòng)物數(shù)要相同，各劑量組組距呈等比級(jí)數(shù)，死亡率呈正態(tài)分布，最低劑量組死亡率呈<20%，最高劑量組死亡率>80%。LD50計(jì)算（改良寇氏法）急性毒性實(shí)驗(yàn)終結(jié)版專家講座第8頁(yè) 依據(jù)試驗(yàn)動(dòng)物中毒癥狀、死亡時(shí)間、特征和LD50，按受試物種類，分別參考對(duì)應(yīng)經(jīng)口急性毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)定，判斷該受試物毒性大小及毒性特征。毒性分級(jí)及結(jié)果評(píng)定急性毒性實(shí)驗(yàn)終結(jié)版專家講座第9頁(yè)健康成年小鼠若干只（按每組5~6人，每組10只動(dòng)物，♂♀各半）、50ml容量瓶(每組1個(gè))、加樣器（200μl、1000μl）、加樣槍頭、DDVP原液、1ml玻璃注射器、灌胃針頭（每組2套）、棉簽、染液、LD50統(tǒng)計(jì)紙、小鼠籠（每組2個(gè)）、電子天平（2臺(tái)）、搪瓷托盤（每組一個(gè)）、受試物、苦味酸酒精飽和液、0.5%品紅溶液或其它染色劑。試驗(yàn)課所需準(zhǔn)備試劑和材料：急性毒性實(shí)驗(yàn)終結(jié)版專家講座第10頁(yè)經(jīng)呼吸道急性毒性試驗(yàn)（LC50）試驗(yàn)?zāi)繕?biāo)學(xué)習(xí)靜式呼吸道染毒操作方法學(xué)習(xí)測(cè)定和計(jì)算LC50試驗(yàn)步驟和方法。試驗(yàn)原理（染毒方式）呼吸道吸入染毒可分為兩種方式，一個(gè)是動(dòng)式吸入，一個(gè)是靜式吸入。急性毒性實(shí)驗(yàn)終結(jié)版專家講座第11頁(yè)靜式呼吸道吸入染毒：優(yōu)點(diǎn)：設(shè)備簡(jiǎn)單、操作方便、消耗受試物少、適合用于小動(dòng)物接觸易揮發(fā)液態(tài)化合物急性毒性研究。缺點(diǎn)：受試物濃度難維持恒定，而且試驗(yàn)動(dòng)物有經(jīng)皮吸收可能。動(dòng)式吸入：優(yōu)點(diǎn)：能即時(shí)補(bǔ)入新鮮空氣和排出污濁空氣，氧分壓，二氧化碳分壓，溫度、濕度，受試物濃度保持恒定。缺點(diǎn)：設(shè)備復(fù)雜，消耗受試物多、易污染環(huán)境急性毒性實(shí)驗(yàn)終結(jié)版專家講座第12頁(yè)染毒柜內(nèi)受試物濃度計(jì)算注意單位！急性毒性實(shí)驗(yàn)終結(jié)版專家講座第13頁(yè)試劑和材料試驗(yàn)動(dòng)物及器材健康成年小鼠若干只，（每組10只，♂♀各半），小鼠籠（每組2個(gè)）。靜式吸入染毒柜6個(gè)、吸管、動(dòng)物秤、統(tǒng)計(jì)紙。試劑受試物（易揮發(fā)液體，苯（原液））、苦味酸酒精飽和液、0.5%品紅溶液或其它染色劑。急性毒性實(shí)驗(yàn)終結(jié)版專家講座第14頁(yè)操作步驟選擇健康試驗(yàn)動(dòng)物，稱重（準(zhǔn)確到0.1g），編號(hào)，隨機(jī)分組。劑量分組急性毒性實(shí)驗(yàn)終結(jié)版專家講座第15頁(yè)呼吸道吸入染毒：依設(shè)計(jì)劑量濃度及染毒柜體積，計(jì)算需要加入受試物量。將5♂、5♀共10只小鼠→放入靜式染毒柜內(nèi)→加蓋（注：每只小鼠每小時(shí)所需要?dú)夥e為3L）。將液態(tài)受試物經(jīng)加藥孔加到接物蒸發(fā)器（紗布、濾紙、蒸發(fā)皿或小型加熱器）上→開啟小風(fēng)扇，計(jì)時(shí)→觀察、統(tǒng)計(jì)中毒癥狀和動(dòng)物死亡情況。染毒結(jié)束后，關(guān)閉電源，打開蓋子，驅(qū)走柜內(nèi)殘余含毒空氣，取出動(dòng)物，存活者歸籠繼續(xù)觀察。（癥狀：嘔吐、昏迷、抽搐、呼吸麻痹而死亡）LC50計(jì)算：同LD50急性毒性實(shí)驗(yàn)終結(jié)版專家講座第16頁(yè)急性毒性試驗(yàn)觀察和統(tǒng)計(jì)內(nèi)容主要包含4個(gè)方面：中毒體征及發(fā)生過(guò)程、死亡情況和時(shí)間分布、體重和病理形態(tài)學(xué)改變。 觀察和統(tǒng)計(jì)中毒癥狀及出現(xiàn)時(shí)間，死亡數(shù)量和時(shí)間及死亡前特征。急性毒性試驗(yàn)觀察周期普通為14天，LD50或LC50計(jì)算時(shí)以觀察周期內(nèi)各組動(dòng)物總死亡數(shù)為依據(jù)。依據(jù)觀察情況分析中毒特點(diǎn)和毒作用靶器官。按照試驗(yàn)結(jié)果，填寫急性毒性試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)表。中毒癥狀和動(dòng)物死亡情況觀察急性毒性實(shí)驗(yàn)終結(jié)版專家講座第17頁(yè)結(jié)果評(píng)定/結(jié)果評(píng)價(jià)依據(jù)試驗(yàn)動(dòng)物中毒癥狀、死亡時(shí)間、LC50及急性毒作用帶，參考對(duì)應(yīng)急性毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，評(píng)價(jià)毒物急性毒性強(qiáng)弱，判斷該受試物毒性大小及其毒性特征。急性毒性實(shí)驗(yàn)終結(jié)版專家講座第18頁(yè)試驗(yàn)匯報(bào)

試驗(yàn)動(dòng)物種屬、品系、性別及起源。試驗(yàn)前動(dòng)物禁食和健康情況。試驗(yàn)動(dòng)物體重和隨機(jī)分組情況。受試物名稱、起源、純度、性狀等情況。詳細(xì)描述試驗(yàn)觀察中毒表現(xiàn)和死亡情況等。

LD50/LC50計(jì)算方法和結(jié)果。受試物毒性分級(jí)、分級(jí)依據(jù)和結(jié)果評(píng)價(jià)。急性毒性實(shí)驗(yàn)終結(jié)版專家講座第19頁(yè)注意事項(xiàng)

敵敵畏溶液灌胃前要搖勻！注意染毒柜密閉，保持柜內(nèi)受試