第四章微生物生長與生活環(huán)境演示文稿當(dāng)前1頁，總共23頁。（優(yōu)選）第四章微生物生長與生活環(huán)境當(dāng)前2頁，總共23頁。第一節(jié)微生物純培養(yǎng)二、微生物純培養(yǎng)技術(shù)1、稀釋平板分離法：傾注平板法和涂布平板法?；具^程：（1）梯度稀釋過程；（2）分離培養(yǎng)過程涂布傾注梯度稀釋過程10-110-210-310-410-510-6當(dāng)前3頁，總共23頁。當(dāng)前4頁，總共23頁。2、單細胞挑取法：從待分離材料中挑取一個細胞來培養(yǎng)，從而獲得純培養(yǎng)的過程。第一節(jié)微生物純培養(yǎng)二、微生物純培養(yǎng)技術(shù)當(dāng)前5頁，總共23頁。3、平皿劃線法用接種環(huán)沾少許待分離的材料，在培養(yǎng)基表面進行多次平行劃線，使微生物細胞分開生長以獲得微生物純培養(yǎng)的過程。第一節(jié)微生物純培養(yǎng)二、微生物純培養(yǎng)技術(shù)當(dāng)前6頁，總共23頁。三、微生物無菌操作與接種技術(shù)培養(yǎng)基經(jīng)高壓滅菌后，用經(jīng)過滅菌的工具（如接種針和吸管等）在無菌條件下接種含菌材料（如樣品、菌苔或菌懸液等）于培養(yǎng)基上，這個過程叫做無菌接種操作。在實驗室檢驗中的各種接種必須是無菌操作。（1）培養(yǎng)基與接菌工具的滅菌（2）保證接菌過程的無菌操作當(dāng)前7頁，總共23頁。滅菌方法一、高溫滅菌濕熱滅菌干熱滅菌：干燥條件，160℃維持1-2h。高壓蒸汽滅菌法：密閉條件下，水加熱蒸發(fā)形成高壓的同時產(chǎn)生高溫。利用高溫殺死菌。巴斯德消毒法：采用60-70℃的溫度處理15-30min

的消毒方法。間歇滅菌法：100℃，30-60min

冷卻，37℃培養(yǎng)1d反復(fù)三次當(dāng)前8頁，總共23頁。1、紫外線：殺菌波長范圍：240—300nm殺菌力最強范圍：255—265nm

二、輻射紫外線殺菌特點：穿透力差，用作表面消毒或空氣滅菌，30min滅菌95%以上2、放射性同位素：Co60等，主要用于誘變產(chǎn)生新品種當(dāng)前9頁，總共23頁。（一）純培養(yǎng)的保存第一節(jié)微生物純培養(yǎng)四、純培養(yǎng)的保存與復(fù)壯保存過程的注意點：防止雜菌污染。1、傳代保存法2、液體石蠟覆蓋保存法3、載體保存法4、懸液保存法5、寄主保存法6、冷凍保存法當(dāng)前10頁，總共23頁。（二）純培養(yǎng)的衰退與復(fù)壯第一節(jié)微生物純培養(yǎng)四、純培養(yǎng)的保存與復(fù)壯衰退的原因：衰老、變異衰退的表現(xiàn)：生長緩慢優(yōu)良性狀的喪失抗逆性下降衰退的預(yù)防：控制傳代頻率創(chuàng)造良好的培養(yǎng)條件采取有效的保存方式復(fù)壯選優(yōu)汰劣當(dāng)前11頁，總共23頁。一、微生物生長量的測定第二節(jié)微生物純培養(yǎng)群體生長規(guī)律微生物生長量的測定微生物數(shù)量的測定顯微鏡直接計數(shù)法平板計數(shù)法比濁法稱重法含N量測定法DNA含量測定法ATP含量測定法代謝活性法微生物重量的測定當(dāng)前12頁，總共23頁。(一)微生物數(shù)量的測定

1、顯微鏡直接計數(shù)法使用細菌計數(shù)板或血球計數(shù)板在顯微鏡下直接計數(shù)。

優(yōu)點：操作簡便，計數(shù)直觀。一、微生物生長量的測定第二節(jié)微生物純培養(yǎng)群體生長規(guī)律當(dāng)前13頁，總共23頁。2、平板計數(shù)法對樣品稀釋培養(yǎng)，據(jù)形成的菌落數(shù)計數(shù)。

優(yōu)點：傳統(tǒng)計數(shù)方法。對設(shè)備要求不高。一、微生物生長量的測定第二節(jié)微生物純培養(yǎng)群體生長規(guī)律10-310-510-410-6當(dāng)前14頁，總共23頁。３、比濁計數(shù)法根據(jù)細菌懸浮液的吸光度測定其數(shù)量。優(yōu)點：簡便，直接。一、微生物生長量的測定第二節(jié)微生物純培養(yǎng)群體生長規(guī)律當(dāng)前15頁，總共23頁。(二)微生物重量的測定

1、稱重法用離心或過濾的方法將菌體從培養(yǎng)基中分離、冼凈，稱濕重或干重。優(yōu)點：簡單可靠。一、微生物生長量的測定第二節(jié)微生物純培養(yǎng)群體生長規(guī)律在活性污泥法中采用的指標(biāo)：（1）混合液懸浮固體(MLSS)（粗放測定）

污泥—干燥----稱重(W1)（2）揮發(fā)性懸浮固體(MLVSS)（相對準(zhǔn)確）

上述已稱重污泥-----馬福爐(500度2小時)----冷卻---稱重(W2)當(dāng)前16頁，總共23頁。(二)微生物重量的測定

2、含氮量測定法

根據(jù)樣品中菌體蛋白質(zhì)含量計算微生物重量的方法。

一、微生物生長量的測定第二節(jié)微生物純培養(yǎng)群體生長規(guī)律原理：（1）微生物蛋白質(zhì)含量穩(wěn)定（2）氮是蛋白質(zhì)的穩(wěn)定成分

(蛋白質(zhì)量=6.25×總含N量)優(yōu)點：測定準(zhǔn)確?！埃俊碑?dāng)前17頁，總共23頁。第二節(jié)微生物純培養(yǎng)群體生長規(guī)律（1）分批培養(yǎng)（2）連續(xù)培養(yǎng)當(dāng)前18頁，總共23頁。二、細菌分批培養(yǎng)群體生長規(guī)律第二節(jié)微生物純培養(yǎng)群體生長規(guī)律分批培養(yǎng)(batchculture)：將少量的菌體接種到一定體積的液體培養(yǎng)基中，在適宜的條件下培養(yǎng)，最后一次性收獲的過程。當(dāng)前19頁，總共23頁。生長曲線(growthcurve)代表細菌在新的適宜的環(huán)境中生長、繁殖、衰老、死亡的動態(tài)變化。生長曲線：以培養(yǎng)時間為橫坐標(biāo)，以細菌的數(shù)目的對數(shù)為縱坐標(biāo)繪制成的曲線圖。當(dāng)前20頁，總共23頁。

根據(jù)細菌生長繁殖速率將生長曲線分四個階段：第二節(jié)微生物純培養(yǎng)群體生長規(guī)律緩慢期對數(shù)期穩(wěn)定期衰亡期二、細菌分批培養(yǎng)群體生長規(guī)律當(dāng)前21頁，總共23頁。第二節(jié)微生物純培養(yǎng)群體生長規(guī)律緩慢期（延遲期、滯留適應(yīng)期）滯留適應(yīng)期二、細菌分批培養(yǎng)群體生長規(guī)律特點：分裂遲緩。產(chǎn)生及影響緩慢期長短的因素１、培養(yǎng)基成分２、菌株的遺傳性３、接種量４．接種時的機械損傷引當(dāng)前22頁，總共23頁。第二節(jié)微生物純培養(yǎng)群體生長規(guī)律對數(shù)期（指數(shù)生長期）特點：（1）代謝活性強（2）世代時短而穩(wěn)定對數(shù)生長期二、細菌分批培養(yǎng)群體生長規(guī)律Nt=2nN0n=3.33(lgNt-lgN0)G=t/n=0.3