/第一章實驗動物學概述一、實驗動物科學的概念和研究范疇二、實驗動物科學的誕生三、中國現(xiàn)代實驗動物學的誕生四、實驗動物科學應用范疇五、動物實驗研究的現(xiàn)狀及發(fā)展趨勢六、動物實驗研究的優(yōu)越性和欠缺一、實驗動物科學的概念和研究范疇（一）、實驗動物科學的基本概念1、實驗動物科學（LaboratoryAnimalScience)是一門研究實驗動物及其培育和應用的學科，是生命科學的一個分支。它是現(xiàn)代科學技術(shù)的重要組成部分，是生命科學研究的基礎(chǔ)條件，是衡量一個國家或一個地區(qū)科研水平的重要標志。2、實驗動物：指經(jīng)人工飼育的，對其攜帶的微生物和寄生蟲實行控制，遺傳背景明確或來源清楚的，用于科學研究、教學、生產(chǎn)、檢定的動物。特點：生物學特性明確、遺傳背景清楚、表型均一、對刺激敏感和反應一致等3、實驗用動物：指能夠用于科學實驗的所有動物。（哺乳類、魚類、兩棲類、爬行類的蛇、昆蟲類的果蠅等。它們不具有實驗動物的特點、又達不到生產(chǎn)和檢定所要求的那樣精良。）二）、實驗動物科學研究的范疇1、實驗動物育種學：主要研究實驗動物的遺傳改良、遺傳控制、新型實驗動物的開發(fā)和野生動物的實驗動物化。2、實驗動物醫(yī)學：研究實驗動物的疾病診斷、治療和預防。3、實驗動物生態(tài)學：研究如何為實驗動物提供適于生存的環(huán)境條件，使實驗動物健康無病，生理指標穩(wěn)定。4、比較醫(yī)學：研究包括人體在內(nèi)的所有實驗動物的基本生命現(xiàn)象，并將各種正常構(gòu)造和生理機能，以及疾病的發(fā)生發(fā)展的規(guī)律進行比較，研究人與其他動物的相同點與不同點，從而揭示生命的奧秘。5、動物實驗技術(shù)：研究動物實驗的設計、選擇試驗方法、選擇恰當?shù)膶嶒瀯游锏?，也包括胚胎工程學、細胞工程學等動物實驗技術(shù)。二、實驗動物科學的誕生1、公元前4世紀至公元3世紀公元前4世紀，杰出的生物學奠基人Aristotle首先開展了多種動物解剖，但都是在死亡的動物和人尸體上進行的。Erasistratus可能是進行活體動物實驗的創(chuàng)始人，他在豬體內(nèi)確定了氣管是吐納空氣的通道，肺是呼吸空氣的器官。之后，Galen對豬、猴及其他多種動物都施行了活體解剖檢查，以此推論人體的生理功能。2、公元3世紀至16世紀初從Galen之后，直到16世紀初，科學發(fā)展被教條主義所取代。動物實驗技術(shù)的發(fā)展受到的影響尤為嚴重。當時即使是對死亡的動物和人的尸體施行解剖，也會被基督教會所禁止。他們阻止人們獲取有關(guān)認識世界的知識，否則就被認為褻瀆神明的行為。3、16世紀初至19世紀末這一時期是動物實驗技術(shù)方法發(fā)展得輝煌時期。1538年，現(xiàn)代解剖學奠基人AndreasVesal利用犬和豬進行了公開的解剖學示范教學。1682年，WilliamHarvey采用20多種動物進行解剖與生理研究，揭開了血液循環(huán)的秘密，使生理學成為了一門學科。1796年，EdwardJenner研究牛痘疫苗，征服了天花，并開辟了免疫療法。1859年，CDarwin發(fā)表了《動物起源》奠定了進化論和比較醫(yī)學的基礎(chǔ)，從而為通過動物來研究人提供給了理論基礎(chǔ)。1865年，ClandBernard做了大量的動物實驗，在其發(fā)表的《實驗動物序說》中詳細闡述了實驗動物和動物實驗的理論。1882年，RobertCoch對牛羊等動物研究，發(fā)現(xiàn)了結(jié)核菌和結(jié)核菌素，并研制了狂犬疫苗，奠定了微生物學和傳染病學基礎(chǔ)。后來Lister受到Coch啟發(fā)，創(chuàng)立了無菌手術(shù)理論。1885年，Nuttall培育了無菌豚鼠。1890年，Behring用豚鼠進行實驗，研制出白喉抗毒素。1897年，Baflof用狗做了大量實驗，在消化生理和高級神經(jīng)活動的研究中取得了巨大成就。4、20世紀初至今20世紀初，孟德爾遺傳學定律發(fā)現(xiàn)以后，動物實驗技術(shù)方法的發(fā)展進入了突飛猛進的時期。1909年，Little培育出第一株近交小鼠。1910年，Morgan用果蠅發(fā)現(xiàn)了染色體在遺傳上的作用。1914年，山極和市川用瀝青抹兔耳，誘發(fā)出皮膚癌。1929年，F(xiàn)leming通過動物實驗發(fā)現(xiàn)了青霉素。1937年，Krebs發(fā)現(xiàn)了三羧酸循環(huán)。1944年，美國紐約科學院召開會議，專門討論實驗動物與醫(yī)學發(fā)展的關(guān)系，提出實驗動物標準化勢在必行。1947年，英國成立了實驗動物管理署。1950年，美國成立了實驗動物管理小組。1952年，日本成立了實驗動物中央研究所。1953年，Crick提出DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)。1956年，聯(lián)合國創(chuàng)立國際實驗動物科學委員會（InternationalCouncilLaboratoryAnimalScienceICLAS)ICLAS的成立是實驗動物學成為獨立學科的標志，也是實驗動物走向現(xiàn)代化的起點。故一般認為實驗動物學是20世紀50年代誕生的。上個世紀80年代以來，通過實驗動物與動物實驗研究獲得三次諾貝爾醫(yī)學獎：（1）、1980年度諾貝爾醫(yī)學獎：GeorgeSnell的組織相容性基因的發(fā)現(xiàn)；（2）、1984年度諾貝爾醫(yī)學獎：G.Kohler和C.Milstein單克隆抗體的發(fā)現(xiàn)；（3）、1996年度諾貝爾醫(yī)學獎：Koherty和ZinkermagelT淋巴細胞識別微生物的發(fā)現(xiàn)三、中國現(xiàn)代實驗動物學的誕生1918年，中央防疫處從國外引進小鼠、豚鼠進行飼養(yǎng)、并進行動物實驗。1919年，謝恩增醫(yī)師等撲捉野生地鼠（后來公認為中國地鼠）作肺炎雙球菌檢定。1946年，從印度引進小白鼠，后繁育成昆明小鼠。1948年，藍春霖教授從美國引進金黃地鼠。1949年，新中國成立，北京、上海、長春、蘭州、成都成立了生物制品研究所，從此開始了大量飼養(yǎng)實驗動物。1966年—1977年，文化大革命動亂使實驗動物事業(yè)遭受嚴重的摧殘。1982年，文革結(jié)束后，確立了改革開放的方針，經(jīng)學者到國外考察實驗動物情況，發(fā)現(xiàn)我國已落后20~30年。國家科委在云南西雙版納召開了第一次實驗動物工作會議，我國實驗動物現(xiàn)代化研究拉開了序幕。1983年，鐘品仁主編的《哺乳類實驗動物》出版，為我國實驗動物學第一部專著。1985年，京滬兩地實行實驗動物合格證制度，推動了實驗動物的標準化。1985年，國際小鼠命名委員會正式承認我國培育的TA1、TA2、615近交系小鼠。1988年，我國加入國際實驗動物科學委員會并出版了《中國實驗動物學雜志》。1988年，國家科委發(fā)布2號令即《實驗動物管理條例》，為我國第一部有關(guān)實驗動物的法律。四、實驗動物科學應用范疇1、生命科學方面基礎(chǔ)醫(yī)學理論，疾病的病因、治療和預防的研究；新的治療方法、新的檢查和治療儀器的研制；分子生物學研究；基因工程研究；老年學研究；生育控制研究等。2、藥學方面藥理學的研究；新藥開發(fā)研究；診斷用血清、疫苗、免疫血清的整理；藥品的安全性評價試驗；藥效試驗等。3、化工業(yè)和環(huán)境保護方面職業(yè)性中毒的預防研究；食品及食品添加劑的安全性評價；服裝、面料、皮毛、化纖的安全性評價；化妝品、衛(wèi)生紙等的安全性評價；環(huán)境條件的檢測和評價等。4、重工業(yè)方面廢水、廢物、廢氣等公害的鑒定和防治；光輻射、噪聲的有害性的鑒定和污染的防治等。5、農(nóng)業(yè)科學方面化學肥料、農(nóng)藥的殘毒的檢測；新品種安全性檢測等。6、畜牧科學方面家畜疾病的病因?qū)W診斷、治療和預防研究；疫苗的制造和鑒定；新品種的培育研究；SPF蛋的生產(chǎn)和使用研究；飼料的營養(yǎng)學、安全性分析和鑒定。7、軍事科學方面如武器殺傷效果、化學、輻射、生物激光等武器的防護研究等。8、航天科學方面如宇宙射線、失重狀態(tài)等對生物的影響及航天醫(yī)學的研究等。9、國際貿(mào)易方面如瘋牛病、口蹄疫等不合格肉類及食品的化學殘毒等都需實驗動物檢疫和檢測。10、行為科學方面如災難事故的處理、汽車撞擊的耐受度、建筑物耐受震動的允許度的檢測等。五、動物實驗研究的現(xiàn)狀及發(fā)展趨勢（一）、動物實驗研究的現(xiàn)狀1、國外動物實驗方面的現(xiàn)狀在美國，每年用于實驗動物研究的非人靈長類動物、犬、豚鼠、兔、地鼠和其他動物（大、小鼠和禽鳥類除外）約150~200萬只。大鼠、小鼠和禽鳥類，估計每年用1700萬只動物。非人靈長類動物的使用基本上保持恒定，貓和犬的使用數(shù)量正在下降，逐漸被豬、小牛和其他家畜所取代。在加拿大，所使用的動物數(shù)量每年月200萬只左右徘徊。在許多領(lǐng)域，特別是毒理學方面，魚已取代哺乳動物。在英國，醫(yī)學上每年使用的實驗動物數(shù)量約263萬只。在荷蘭，每年使用實驗動物約100萬只左右。2、我國動物實驗研究方面的概況（1）、80年代前的情況：80年代前，我國實驗動物的飼養(yǎng)管理水平很低，動物實驗發(fā)展水平也較低，沒有法規(guī)和標準。（2）、80年代的情況：1982年國務院責成國家科委負責實驗動物科技工作，啟動了我國是實驗動物與動物實驗科技領(lǐng)域現(xiàn)代化工作進程。1988年11月14日經(jīng)國務院批準由原國家科委頒布第2號令，即《實驗動物管理條例》，條例對推動我國實驗動物科學事業(yè)的發(fā)展，確保實驗動物的質(zhì)量起了重要作用。（3）、90年代的情況：1994年1月由國家技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布施行實驗動物管理的國家標準，為我國實驗動物標準化工作開創(chuàng)了新局面。隨著實驗動物質(zhì)量逐步標準化，科學研究水平明顯提高。（4）、目前的現(xiàn)狀：據(jù)國家科技部統(tǒng)計，實驗動物生產(chǎn)使用單位有2100多家，工作人員近9500余人，其中專業(yè)技術(shù)人員占39.5%，已形成地區(qū)性生產(chǎn)基地。年生產(chǎn)各類實驗動物約1321萬余只，并已開始向生產(chǎn)規(guī)?；?、供應社會化方向發(fā)展。年使用動物1045萬余只，動物實驗也在向技術(shù)服務社會化方向邁進。3、我國動物實驗研究方面存在的問題（1）、研究人員缺乏必要的動物實驗知識和訓練。（2）、用于實驗的動物種系少。（3）、用于實驗的動物質(zhì)量和籠器具質(zhì)量差。（4）、動物使用率低。（5）、動物實驗方面技術(shù)人員缺乏，國際交流少，信息不靈。二）、動物實驗的發(fā)展趨勢1、使用動物的數(shù)量不斷下降2、使用動物的質(zhì)量在不斷的提高3、使用實驗動物的種系不斷增加4、實驗動物模型走向商品化5、動物替代物和替代方法不斷的應用六、動物實驗研究的優(yōu)越性和欠缺（一）、動物實驗研究的優(yōu)越性1、可以把臨床研究中的復雜問題簡單化，對各種因素可以進行細微的探討。2、動物的各種條件可以進行嚴格控制，便于得出科學的結(jié)論。動物作為實驗對象，可以在同一時間選擇年齡、性別、環(huán)境條件、營養(yǎng)狀況、遺傳特點、微生物等條件相同的若干動物，而以人為研究對象是辦不到的。3、可以縮短實驗周期，短期內(nèi)可觀察多次。動物的壽命短，一個研究者可觀察動物幾十代、甚至幾百代，而以人為研究對象是辦不到的。4、可以在動物身上進行在人體上不能進行的高危險度的試驗。從法律和道德上看，凡對人身安全構(gòu)成威脅的試驗在人身上都不能做（如燒傷、致癌等試驗）。5、可按研究者的設計要求進行實驗。動物實驗中，可按時、按量、按次數(shù)、按種類、按方式施加任何條件，而人則不會給以配合。6、可隨時取材，取任何材料，甚至處死后取材。（二）、動物實驗研究的欠缺1、動物在遺傳特性、生理、解剖特性上即使與人有相似之處，但畢竟不同于人，所以動物實驗數(shù)據(jù)只能用作參考，不能直接應用于人。2、動物模型與臨床疾病相比在病因、病理、外在表現(xiàn)等方面不完全相同，只能相似，所以復制的動物模型必須進行科學的分析和討論。3、動物實驗多在麻醉狀態(tài)下進行，與人在清醒狀態(tài)下的反應是不一樣的。4、離體器官（或組織）實驗與整體實驗的情況是不一樣的。5、動物缺少思維和語言，不能訴說內(nèi)心感受，有些實驗無法在動物身上進行。（一）、實驗動物福利的概念及內(nèi)涵1、實驗動物福利的概念實驗動物福利是在其整個生命過程中對其實施保護的具體體現(xiàn)，其實質(zhì)和基本原則是為了保證實驗動物的康樂（Welfare),通俗地說，就是讓實驗動物在康樂的狀態(tài)下生活，在無痛苦狀態(tài)下死亡，內(nèi)容包括無任何疾病，行為無異常、無心理緊張、壓抑和痛苦等。2、實驗動物福利的內(nèi)涵（1）、提供適當清潔飲水和保持身體健康需要的食物，使動物免受饑渴之苦（享受不受饑渴的自由）；（2）、提供適當?shù)臈鏊?，能舒適的休息，使動物免受困頓勞累之苦（享受生活舒適的自由）；（3）、做好衛(wèi)生防疫、預防疾病和給患病的動物及時診治，使動物免受病痛之苦（享受不受痛苦傷害和疾病威脅的自由）；3、實驗動物飼養(yǎng)過程中的福利要求1）、對飼養(yǎng)設施、設備和飼育生活環(huán)境的要求；（2）、對待實驗動物的態(tài)度和飼養(yǎng)管理的要求；（3）、對飼料和飲水的要求；（4）、特殊情況下對實驗動物的照料。4、實驗動物應用過程中的福利要求（1）、對科研人員素質(zhì)的要求；（2）、對動物實驗設備和手術(shù)器械的要求；（3）、對實驗設計的要求；（4）、對保定和麻醉技術(shù)的要求；（5）、對術(shù)后護理的要求；（6）、對實驗結(jié)束后，對實驗動物的處理。1、實驗動物工整理和研究者應樹立愛護動物的觀念。2、研究者應懂得正確的動物實驗方法。3、試驗中不許恐嚇動物，不許造成動物肉體的痛苦，故進行使動物痛苦實驗時，必須實施麻醉，處死動物時要施行安樂死、尸體要焚燒。4、要給犧牲的動物樹立“慰靈碑”，表示對動物的感謝，喚起人們對動物的愛護和尊重。5、建立健全法規(guī)、用法律約束人們的行為。6、遵守3R原則、既代替（Replacement）減少（Reduction）優(yōu)化（Refinement）。7、為動物設計舒適、有利于動物生存的環(huán)境。三）重視實驗動物福利的意義1、有助于培養(yǎng)人類熱愛自然、熱愛生命、保護動物的意識。2、有利于從動物的身體上獲得更加準確的數(shù)據(jù)。3、有利于非動物實驗（代替法）的研究推廣。4、有利于人類社會及人類社會和動物界的和諧，從而有利于科學的進步和社會的進步。四）、3R原則的內(nèi)涵1、實驗動物的代替（Replacement)（1）、生命系統(tǒng)包括離體培養(yǎng)的器官、組織、細胞等。在單克隆抗體生產(chǎn)、病毒疫苗研制、效力安全試驗等研究項目中廣泛應用。（2）、非生命系統(tǒng)包括物理、化學方法代替動物。醫(yī)學基礎(chǔ)教學已有用物理學系統(tǒng)和機械系統(tǒng)者（如心肺復蘇等病理過程）。免疫化學可用結(jié)合力很高的抗體來搜尋抗原或鑒定毒素存在。減少實驗動物使用量（Reduction（1）、合用動物；（2）、改進統(tǒng)計學設計；（3）、使用低等動物代替高等的實驗動物；（4）、使用高質(zhì)量動物。3、動物實驗的優(yōu)化（Refinement（1）、改良儀器設備；（2）、減少對動物的侵擾。改善實驗室條件，提高實驗質(zhì)量；（3）、進一步控制痛苦；（4）、改進動物保定技術(shù)。二、實驗動物的法規(guī)（一）、管理機構(gòu)與社會團體國家科技部：主管全國實驗動物工作。實驗動物學會：負責學術(shù)交流、技術(shù)咨詢、人員培訓。實驗動物管理委員會：由科技部門出領(lǐng)導、學會出專家組成，負責各行業(yè)、各系統(tǒng)實驗動物管理工作、法規(guī)落實、業(yè)務指導和業(yè)務協(xié)調(diào)。（二）、政策和法規(guī)第一部法規(guī)：1988年科委報請國務院批準頒布的《實驗動物管理條例》國家科委2號令1997年又頒布了多項法規(guī)：《實驗動物質(zhì)量管理辦法》〈實驗動物國家種子中心管理辦法〉〈國家實驗動物質(zhì)量檢測機構(gòu)技術(shù)〉現(xiàn)執(zhí)行的是2001年國家科技部聯(lián)合六部委頒布的〈實驗動物許可證管理辦法〉（四）、質(zhì)量保證體系1、檢測網(wǎng)絡：國家的、系統(tǒng)的、地方的。負責檢測方法、技術(shù)、試劑的研究人員培訓和仲裁。2、種子中心：國家有嚙齒類中心和上海分中心，云南靈長類中心，哈爾濱SPF雞中心。3、生產(chǎn)、繁殖、供應中心：由各行業(yè)、各地區(qū)、各單位設施合格技術(shù)較好的單位負責生產(chǎn)和供應。五）、實驗動物從業(yè)人員1、從業(yè)人員：是指從事實驗動物的科技人員、專業(yè)管理人員和技術(shù)工人，以及利用動物進行教學、研究、藥品和生物制品生產(chǎn)及檢定等人員。國家規(guī)定從業(yè)人員實行崗位資格認可制度，所有人員必須持證上崗。2、人員素質(zhì)要求：⑴遵守法律、法規(guī)、遵守生產(chǎn)和實驗要求。⑵了解實驗動物知識、科學管理和操作。⑶有飼養(yǎng)和實驗操作技能。⑷善待動物。六）、科學教育：1、普及教育（相關(guān)人員培訓上崗）2、大學教育（生物、醫(yī)學、農(nóng)業(yè)、林業(yè)等大學授課）3、碩士和博士學位的專業(yè)教育（一）、實驗動物品種、品系1、種:動物“種”(species)是生物學分類的最基本單位,而在實驗動物中,種是指可以相互交配且后代有繁殖能力的同一種類的動物。2、實驗動物品種(stockbreed):一般指具有一些容易識別和人們所需要的性狀，而且是可以穩(wěn)定遺傳的動物群體。通常把封閉群動物稱為品種,如新西蘭白兔、KM小鼠等。3、品系(strain):實驗動物學上把基因高度純合的動物稱為品系動物,通常指近交系、突變系動物。vv二）、作為一個品種、品系應具備的條件1、相似的外貌特征：例如小鼠C57BL/6品系的毛色是黑色的,DBA/2品系的毛色是灰色的,KM品種的毛色是白色的。當然,相似的外貌特征只是品系、品種應具備的條件之一。不同品系、品種的動物也有外貌相似的,例如A、KM等十幾個品種、品系動物的毛色都是白色，但它們在其他的條件上是有區(qū)別的。2、獨特的生物學特性3、穩(wěn)定的遺傳性能：一個品種或品系有一定的育種價值，雜交F1代繁殖后代時，性狀發(fā)生分離不能成為一個品系。4、具有共同的遺傳來源和一定的遺傳結(jié)構(gòu)按培育的程度分為廣義和狹義實驗動物1、廣義實驗動物：泛指用于科學實驗的各種動物2、狹義實驗動物：指經(jīng)人工飼育的，對其攜帶的微生物和寄生蟲實行控制，遺傳背景明確或來源清楚的，用于科學研究、教學、生產(chǎn)、檢定以及其它科學實驗的動物。遠交種的命名：（1）、一般用2~4個大寫字母表示，如ICR、NIH小鼠。（2）、習慣用法，如Wistar大鼠、NewZealandWhite兔。（3）、在大寫字母之前加上一個大寫字母和幾個小寫字母構(gòu)成的培養(yǎng)者或保留者的符號，并且與品系名稱用冒號隔開，如Lac:LACA是由英國實驗動物中心保持的LACA小鼠，N:NIH是由美國國立衛(wèi)生研究院保存的NIH小鼠。一、實驗動物科學的概念和研究范疇二、實驗動物科學的誕生三、中國現(xiàn)代實驗動物學的誕生四、實驗動物科學應用范疇五、動物實驗研究的現(xiàn)狀及發(fā)展趨勢六、動物實驗研究的優(yōu)越性和欠缺1、實驗動物育種學：主要研究實驗動物的遺傳改良、遺傳控制、新型實驗動物的開發(fā)和野生動物的實驗動物化。2、實驗動物醫(yī)學：研究實驗動物的疾病診斷、治療和預防。3、實驗動物生態(tài)學：研究如何為實驗動物提供適于生存的環(huán)境條件，使實驗動物健康無病，生理指標穩(wěn)定。1、公元前4世紀至公元3世紀公元前4世紀，杰出的生物學奠基人Aristotle首先開展了多種動物解剖，但都是在死亡的動物和人尸體上進行的。Erasistratus可能是進行活體動物實驗的創(chuàng)始人，他在豬體內(nèi)確定了氣管是吐納空氣的通道，肺是呼吸空氣的器官。之后，Galen對豬、猴及其他多種動物都施行了活體解剖檢查，以此推論人體的生理功能。4、20世紀初至今上個世紀80年代以來，通過實驗動物與動物實驗研究獲得三次諾貝爾醫(yī)學獎：（1）、1980年度諾貝爾醫(yī)學獎：GeorgeSnell的組織相容性基因的發(fā)現(xiàn)；（2）、1984年度諾貝爾醫(yī)學獎：G.Kohler和C.Milstein單克隆抗體的發(fā)現(xiàn)；（3）、1996年度諾貝爾醫(yī)學獎：Koherty和ZinkermagelT淋巴細胞識別微生物的發(fā)現(xiàn)三、中國現(xiàn)代實驗動物學的誕生四、實驗動物科學應用范疇1、生命科學方面基礎(chǔ)醫(yī)學理論，疾病的病因、治療和預防的研究；新的治療方法、新的檢查和治療儀器的研制；分子生物學研究；基因工程研究；老年學研究；生育控制研究等。2、藥學方面藥理學的研究；新藥開發(fā)研究；診斷用血清、疫苗、免疫血清的整理；藥品的安全性評價試驗；藥效試驗等。五、動物實驗研究的現(xiàn)狀及發(fā)展趨勢3、我國動物實驗研究方面存在的問題（二）、動物實驗的發(fā)展趨勢六、動物實驗研究的優(yōu)越性和欠缺（二）、動物實驗研究的欠缺第二章實驗動物的法規(guī)和倫理一、實驗動物福利2、實驗動物福利的內(nèi)涵3、實驗動物飼養(yǎng)過程中的福利要求4、實驗動物應用過程中的福利要求（二）、正確對待實驗動物福利（三）重視實驗動物福利的意義（四）、3R原則的內(nèi)涵2、減少實驗動物使用量（Reduction)3、動物實驗的優(yōu)化（Refinement)二、實驗動物的法規(guī)（一）、管理機構(gòu)與社會團體國家科技部：主管全國實驗動物工作。實驗動物學會：負責學術(shù)交流、技術(shù)咨詢、人員培訓。實驗動物管理委員會：由科技部門出領(lǐng)導、學會出專家組成，負責各行業(yè)、各系統(tǒng)實驗動物管理工作、法規(guī)落實、業(yè)務指導和業(yè)務協(xié)調(diào)。（二）、政策和法規(guī)第一部法規(guī)：1988年科委報請國務院批準頒布的《實驗動物管理條例》國家科委2號令1997年又頒布了多項法規(guī)：《實驗動物質(zhì)量管理辦法》〈實驗動物國家種子中心管理辦法〉〈國家實驗動物質(zhì)量檢測機構(gòu)技術(shù)〉現(xiàn)執(zhí)行的是2001年國家科技部聯(lián)合六部委頒布的〈實驗動物許可證管理辦法〉（三）許可證內(nèi)容1、不同等級、不同種動物的生產(chǎn)、繁殖、供應合格證。2、不同等級的實驗設施許可證。3、從業(yè)人員許可證。（四）、質(zhì)量保證體系1、檢測網(wǎng)絡：國家的、系統(tǒng)的、地方的。負責檢測方法、技術(shù)、試劑的研究人員培訓和仲裁。2、種子中心：國家有嚙齒類中心和上海分中心，云南靈長類中心，哈爾濱SPF雞中心。3、生產(chǎn)、繁殖、供應中心：由各行業(yè)、各地區(qū)、各單位設施合格技術(shù)較好的單位負責生產(chǎn)和供應。（五）、實驗動物從業(yè)人員1、從業(yè)人員：是指從事實驗動物的科技人員、專業(yè)管理人員和技術(shù)工人，以及利用動物進行教學、研究、藥品和生物制品生產(chǎn)及檢定等人員。國家規(guī)定從業(yè)人員實行崗位資格認可制度，所有人員必須持證上崗。2、人員素質(zhì)要求：⑴遵守法律、法規(guī)、遵守生產(chǎn)和實驗要求。⑵了解實驗動物知識、科學管理和操作。⑶有飼養(yǎng)和實驗操作技能。⑷善待動物。（六）、科學教育：1、普及教育（相關(guān)人員培訓上崗）2、大學教育（生物、醫(yī)學、農(nóng)業(yè)、林業(yè)等大學授課）3、碩士和博士學位的專業(yè)教育第三章實驗動物分類一、自然分類法分類（二）、作為一個品種、品系應具備的條件)實驗動物在生物學分類中的位置二、按培育的程度分類按培育的程度分為廣義和狹義實驗動物1、廣義實驗動物：泛指用于科學實驗的各種動物2、狹義實驗動物：指經(jīng)人工飼育的，對其攜帶的微生物和寄生蟲實行控制，遺傳背景明確或來源清楚的，用于科學研究、教學、生產(chǎn)、檢定以及其它科學實驗的動物。（一）、封閉群普通近交系（二）、近交系——→重組近交系同源近交系（三）、雜交一代動物同源導入系（四）、突變系分離近交系1、定義：一個有效群體在固定場所，五年以上不從外部引入新個體、以非近親交配方式繁育生產(chǎn)的實驗動物群體稱為封閉群，亦稱遠交群。（1）、遠交種：一個長時期于外界隔離，雌雄個體之間能夠隨機交配的動物群。其遺傳組成比較接近于自然狀態(tài)下的動物群體結(jié)構(gòu)。常見的遠交種動物有KM、ICR、NIH小鼠、SD大鼠、新西蘭兔、Wistar大鼠等。（2）、突變種：攜帶個別突變基因的封閉群，這些突變可能以純合或雜合形式存在于封閉群中。2、封閉群的命名3、封閉群動物的特點及應用1、普通近交系（Inbredstrain)概念：是通過至少（或相當）連續(xù)20代以上兄妹或親子交配培育而成，品系內(nèi)所有個體都可以追溯到起源于第20代或以后代數(shù)的一對共同祖先，近交系數(shù)大于98.6%的動物群體。近交系特點：基因高度純合；表現(xiàn)型一致；對外界刺激敏感而反應一致；生命力差、抗病力低。普通近交系的命名近交系動物的應用2、重組近交系3、同源突變、同源導入、分離近交系1、概念：雜交群動物（HybridAnimals）指兩個近交系之間進行有計劃交配所獲得的第一代動物（也叫F1代動物）。實驗動物所說的雜交群通常指雜交F1代動物。1、定義：遺傳基因發(fā)生突變具有某種特殊表型的動物，稱為突變系動物。2、特點：多為病態(tài)，生活能力差，對飼養(yǎng)管理要求嚴格，繁殖保種較為困難。3、應用：作為人類疾病動物模型如：糖尿病鼠（diabetesmice)、肥胖癥鼠（obesemice）、自發(fā)性高血壓大鼠（spontaneoushypertension）（SHR）、裸鼠（nudemice或rats）、聯(lián)合免疫缺陷小鼠（SCID）等。按照微生物控制程度，目前我國將實驗動物分為四個等級：普通級動物（Ⅰ級）清潔級動物（Ⅱ級）無特定病原體動物（Ⅲ級或SPF級）無菌動物和悉生動物（Ⅳ級）1、普通級動物（Conventionalanimal，CV也叫一級動物）定義：未經(jīng)嚴格的微生物學和寄生蟲學控制，飼養(yǎng)在開放的環(huán)境中的實驗動物，不攜帶所規(guī)定的人獸共患病病原和動物烈性傳染病病原。特點：敏感性、一致性差，只能用于教學示教或科研預實驗。國外沒有這個等級的嚙齒類動物。2、清潔級動物（Cleananimal，CL也叫二級動物）定義：除普通動物應排除的病原體外，還不許攜帶對動物危害大和對科學研究干擾大的病原體，肉眼觀察無病外，尸體解剖時主要臟器、組織無論是宏觀還是病理組織切片均不應有病變。種子來源于剖腹產(chǎn)或SPF動物、飼養(yǎng)在屏障系統(tǒng)內(nèi)。特點：可靠性、重復性好，適用于大多數(shù)科研和教學實驗。3、無特定病原體動物（Specificpathogenfreeanimal，SPF也叫三級動物）定義：除清潔級動物應排除的病原外，不攜帶主要潛在感染或條件致病病原和對科學實驗干擾大的病原。種子來源于剖腹產(chǎn)或無菌動物，飼養(yǎng)在屏障系統(tǒng)內(nèi)。特點：國際通用的標準科研用實驗動物。4、無菌動物（Germfreeanimal，GF）和悉生動物（Gnotobilticanimal，GN也叫四級動物）定義：用現(xiàn)有的科學知識和檢測手段，在動物體內(nèi)外不能檢出一切外來生命的動物稱為無菌動物；悉生動物是指在無菌動物體內(nèi)植入已知微生物的動物。根據(jù)體內(nèi)植入菌落種類不同，又可以分為單菌動物、雙菌動物和三菌動物。種子來源于剖腹產(chǎn)，飼養(yǎng)在隔離器內(nèi)。無菌動物的特點：盲腸薄，腸粘膜絨毛增多；肝臟重量下降，心臟、脾臟、腎臟縮小；白細胞增多，數(shù)值恒定；免疫功能低下；代謝周期和壽命延長；無菌豚鼠和家兔繁殖和生長機能下降。多用于特殊實驗。第四章人類疾病的動物模型第一節(jié)人類疾病動物模型的概念、意義及分類一、人類疾病動物模型的概念人類疾病的動物模型（animalmodelofhumandisease）是指各種醫(yī)學科學研究中建立的具有人類疾病模擬表現(xiàn)的動物實驗對象和相關(guān)材料。動物模型主要用于實驗生理、實驗病理和實驗治療學（包括新藥篩選）研究。二、人類疾病動物模型在生物醫(yī)學研究中的意義1、可復制臨床上一些不常見的疾病，如放射病、毒氣中毒、烈性傳染病、外傷、腫瘤等2、可按需要選擇動物模型作為人類疾病的“復制品”，可按研究者的需要隨時采集各種樣品或分批處死動物收集標本，以了解疾病的全過程，這是臨床難以辦到的。3、可比性一般疾病多為零散發(fā)生，在同一時期內(nèi)，很難獲得一定數(shù)量的定性材料，而動物模型不僅在群體數(shù)量上容易得到滿足，而且可以在方法學上嚴格控制實驗條件，從而提高實驗結(jié)果的可比性和重復性，使所得的實驗結(jié)果更準確更深入。4、有助于全面認識疾病的本質(zhì)在臨床上研究疾病的本質(zhì)難免帶有一定的局限性。許多病原體除人以外也能引起多種動物的感染，其癥狀體征表現(xiàn)可能不完全相同。但是通過對人畜共患病的比較，則可以充分認識同一病原體給不同的機體帶來的各種危害，使研究工作上升到立體的水平來揭示某種疾病的本質(zhì)。三、好的人類疾病動物模型應具有的特點1、再現(xiàn)性好：應能再現(xiàn)所要研究的人類疾病，動物疾病的表現(xiàn)應與人類疾病相似；2、動物背景資料完整，生命周期滿足實驗要求，復制率高；3、專一性好：即一種方法只能復制出一種模型。四、人類疾病動物模型的分類1、自發(fā)性動物模型（naturallyoccurringorspontaneousanimalmodels）是取自動物自然發(fā)生的疾病，或由于基因突變的異常表現(xiàn)通過定向培育而保留下來的疾病模型。2、誘發(fā)性動物模型（experimentalartificialorinducedanimalmodels）是通過物理、生物、化學等致病因素的作用，人為誘發(fā)出的具有類似人類疾病特征的動物模型。第二節(jié)常見自發(fā)性人類疾病的動物模型2、神經(jīng)系統(tǒng)疾病3、循環(huán)系統(tǒng)疾病4、呼吸系統(tǒng)疾病5、消化系統(tǒng)疾病6、泌尿系統(tǒng)疾病7、血液與造血系統(tǒng)疾病8、新陳代謝疾病9、內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病第三節(jié)誘發(fā)性動物模型的復制方法簡介1、神經(jīng)系統(tǒng)疾病2、循環(huán)系統(tǒng)疾病3、呼吸系統(tǒng)疾病4、消化系統(tǒng)疾病5、泌尿系統(tǒng)疾病6、血液與造血系統(tǒng)疾病7、新陳代謝疾病8、寄生蟲2動物實驗技術(shù)三、分類：1.按機體水平：整體實驗和離體實驗。具體分為亞細胞、細胞、組織、器官、整體動物和無損傷動物等水平的實驗。2.時間：急性實驗（2天以內(nèi)）、亞急性實驗（1~4周）、慢性實驗（2~6個月或更長時間甚至整個生命期）四、方法：生理學、病理生理學、藥理學、病理解剖學、組織學、微生物學、免疫學的動物實驗方法等等。第二節(jié)動物實驗前的準備（二）實驗單位隨機分為三組分組情況（二）耳緣剪孔法：是在動物的耳邊緣剪出不同的缺口或打成不同的小孔進行標記的方法。為防止孔、口愈合，一般在打孔后用消毒的滑石粉涂抹在孔、口局部。由打孔或剪切的位置和孔數(shù)代表編號，一般在耳內(nèi)按上、中、下打孔，分別代表1、2、3，在相應位置剪缺口代表4、5、6，剪兩個缺口代表7、8、9，無孔或缺口為10。本法規(guī)定右耳代表個位數(shù)、左耳代表十位數(shù)。（三）烙印法：用烙印鉗將號碼烙印在犬等大中型動物無體毛或明顯部位。大、小鼠等小動物可用刺針在動物耳上刺號，然后用棉簽蘸著溶在酒精中的黑墨在針刺處涂抹。烙印前,最好對烙印的部位預先用酒精消毒，操作時要注意防止感染。（四）號牌法：用特制的金屬號牌固定在實驗動物的耳上，大動物可系于頸項部，固定號牌時要注意避開血管。（五）籠子編號法：不在動物身體上作標記而把裝動物的籠子進行編號，也叫替代法。第三節(jié)動物實驗的基本操作一、實驗動物的抓取與固定二、實驗動物被毛去除法三、實驗動物的麻醉四、實驗動物給藥途徑與方法五、實驗動物采血和采液方法3、手術(shù)固定法：用乙醚等麻醉藥品麻醉后，用長20~30cm的線繩分別系在四肢上，再把系在四肢的線繩分別系在固定板四角的釘子上，并且在頭部上顎切齒的地方牽一根線繩達到完全固定。4、在尾靜脈給藥時，先根據(jù)小鼠的大小選擇合適的固定器，打開鼠筒蓋，把小鼠放在里面，只露出尾巴；或者用倒放的燒杯將鼠扣住，尾巴自燒杯凹口處露出，并壓住，即可進行操作。（二）、大鼠的抓取與固定1、抓取方法：4~5周齡以內(nèi)的大鼠同小鼠；周齡較大的大鼠其尾部皮膚容易被剝脫，所以用左手從背部中央到胸部捏起來抓住。抓取時最好帶防護手套，但手套不宜過厚。2、手固定法：抓取大鼠的方法類似小鼠，即用左手的拇指、食指和中指抓住頸背部皮膚，小指和無名指挾住尾部牢牢固定；或左手按住抓起大鼠的時候，把食指放在頸背部，拇指及其他三指放在肋部，食指和中指挾住左前肢，分開兩前肢帶起來，右手按住后肢固定；還有一種方法，張開虎口，迅速將拇指、食指插入腹下，虎口向前，其余三指及掌心握住大鼠身體中段，并保持仰臥體位，然后調(diào)整左手拇指位置，緊抵在下頜骨上進行實驗操作。3、手術(shù)固定法：同小鼠。4、尾靜脈給藥或采血時同小鼠。（三）、豚鼠的抓取與固定1、抓取方法：抓取幼小豚鼠時，用手捧起來；成熟的大豚鼠，用手大把抓起胸肋部即可。注意不能粗野，更不能抓取腰腹部，這樣容易造成肝破裂而死亡。2、手固定法：⑴將左手的食指和中指放在豚鼠頸背部兩側(cè)，拇指和無名指放在肋部，分別用手指夾住左右前肢抓起來。⑵反轉(zhuǎn)左手，用右手的拇指和食指夾住右后肢，用中指和無名指夾住左后肢是豚鼠整體伸直成一條直線。⑶一個人固定操作時，坐在椅子上，用右手拿著豚鼠的后肢夾在兩腿之間，用大腿代替右手夾住。3、手術(shù)固定法：同大、小鼠。（四）、家兔的抓取與固定1、抓取方法：用一只手大把抓住頸背部皮膚提起來，另一只手托住其臀部，讓其重心落在托其臀部的手上，運送時，可抓住頸肩部皮膚抱著兔子運送。2、手固定法：在灌胃給藥時，人坐在椅子上，用一只手抓住頸背部皮膚，另一只手抓住兩后肢放在兩腿之間，大腿夾住兔子的下半身，用空著的手抓住兩前肢固定之，抓住頸背部的手同時捏著兩只耳朵，不讓頭部轉(zhuǎn)動。3、固定器固定法：耳靜脈給藥或采血時用盒式固定法；從頸動脈采血或手術(shù)實驗時用此固定法。（1）盒式固定法：把兔子放在盒子里，只露出頭部，用轉(zhuǎn)扭擰固定器固定家兔。（2）臺式固定法：將麻醉的兔子仰臥，用紗布條依次將四肢捆綁固定于固定臺的兩側(cè)，然后把頭部放在金屬制的首枷和咀環(huán)上固定。（五）、犬的抓取與固定1、抓取方法：先給犬帶上系有鐵鏈條的脖套，對于性情兇猛的犬，要用特制的鉗式長柄犬夾夾住犬頸部將犬按倒后，再系脖套和鏈條。2、手固定法：首先綁住犬嘴，方法是飼養(yǎng)員或犬主人從側(cè)面靠近并輕輕撫摸其頸部皮毛，然后迅速用布帶綁住犬嘴，布帶從下頜繞到上頜打一個結(jié)，再繞到下頜打一個結(jié)，然后將布帶繞到頭后頸，在頸后部再打一個結(jié)，最后打一個活結(jié)，對于未經(jīng)馴服的犬，可用長柄犬夾夾住犬頸部按倒后強制綁嘴。3、手術(shù)臺固定法：麻醉后，松開布帶，將犬仰臥在手術(shù)臺上，先固定四肢，再固定頭部。（六）、貓的抓取與固定1、抓取方法：先輕聲呼喚，慢慢將手伸入貓籠，輕輕撫摸貓頭、頸及背部，然后一只手抓住其背部皮毛，另一只手抓其腰背部。如遇兇暴的貓不讓接觸時，可用網(wǎng)套抓取。2、固定方法：同兔臺式固定法。貓頭可用一根粗棉繩，一端拉住貓的兩只門齒，另一端捆綁在實驗臺的鐵柱上。（七）、蛙的抓取與固定1、抓取方法：左手將動物背部貼緊手掌固定，以中指、無名指、小指壓住其左腹側(cè)和后肢，拇指和食指分別壓住左、右前肢，右手操作。注意：不要擠壓其耳部兩側(cè)突起的毒腺，以免毒液射進眼中。2、固定方法：用探針破壞其腦脊髓或麻醉后用大頭針固定在蛙板上。（八）、雞的抓取與固定1、抓取方法：一只手從雞的前方，另一只手繞到雞的背后悄悄接近，兩只手迅速將雞抓住。2、手固定法：把雞朝向持者方向，以右手的食指與中指夾住雞的兩腳，以左手掌緊握從腹部到翼部的位置。3、手術(shù)臺固定法：用毛巾將動物裹住固定，放在實驗臺上。（九）、羊的抓取與固定1、抓取方法：通常只需在羊脖子上帶上項圈，用繩牽著，便可抓取。2、固定方法：將羊蹄捆綁，使其側(cè)臥在地，以手固定其頭部防止掙扎翻滾；也可以采用特制的羊固定架固定。此種方法常應用于采血。（十）、豬的抓取與固定1、抓取方法：小豬常采用雙手提起后肢，兩膝夾住豬背倒立固定；成豬可采用站立固定。2、固定方法：可將豬仰放在“V”字型槽內(nèi)固定，也可用木制三角固定架和帆布吊兜固定（挖四個孔使其四肢下伸）。如沒有三腳架，也可以用犬固定臺。（十一）、猴的抓取與固定1、抓取方法：從籠內(nèi)抓取時，飼養(yǎng)人員應右手持短柄網(wǎng)罩，左臂緊靠門側(cè)，以防止籠門敞開時猴逃出。右手將網(wǎng)罩塞入籠內(nèi)，由上而下罩捕。當猴被罩住后，應立即將網(wǎng)罩翻轉(zhuǎn)取出籠外，罩猴在地，由罩外抓住猴的頸部，清掀網(wǎng)罩，再提取猴的手臂反背握住。2、固定方法：（1）徒手固定：將猴兩前肢反背其背后，操整理用一只手握著，用另一只手將猴兩后肢捉住即可固定。（2）固定架固定：使用“猴限制椅”或“猴固定架”進行固定。二、實驗動物被毛去除法1.拔毛法：在各種動物做后肢皮下靜脈注射或采血，特別是兔耳緣靜脈注射或采血時常用。動物固定→拇指和食指拔去所需部位毛→涂一層凡士林。2.剪毛法：動物固定→水濕潤剪毛部位→將局部皮膚繃緊→用彎頭手術(shù)剪緊貼皮膚剪毛。3.剃毛法：動物固定→肥皂水浸潤剃毛部位→順被毛方向剃毛（若用電動剃刀則逆被毛方向剃毛）。4.化學脫毛法：常用于大動物無菌手術(shù)、局部皮膚刺激性實驗、觀察動物局部血液循環(huán)或其它各種病理變化。⑴方法：動物固定→剪短脫毛部位被毛→用棉球或紗布沾取脫毛劑→在脫毛部位涂成薄層→2~3分鐘后用溫水洗滌脫下的被毛→干紗布擦干→涂一層油脂。⑵常用脫毛劑：硫化堿、硫化鈉、硫化鈣、硫化鍶、硫化鋇、三硫化二砷。⑶配方：Ⅰ、硫化鈉:肥皂粉:淀粉=3:1:7加水適量調(diào)成膏狀。Ⅱ、硫化鈉:淀粉:糖:甘油;硼砂:水=8:7:4:5:1:75調(diào)成糊狀。Ⅲ、8%的硫化鈉溶液以上脫毛劑配方適用于家兔、大鼠、小鼠等小動物脫毛。Ⅳ、硫化堿10g、生石灰15g，加水至100ml，溶解即可。此配方適用于犬等大動物的脫毛。三、實驗動物的麻醉（一）、常用的麻醉劑1、揮發(fā)性麻醉劑包括乙醚、氯仿等。2、非揮發(fā)性麻醉劑包括苯巴比妥鈉、戊巴比妥鈉、硫噴妥鈉、氨基甲酸乙脂、水合氯醛。3、中藥麻醉劑包括洋金花、氫溴酸東莨菪堿等。（二）、動物的麻醉方法

1、全身麻醉（1）、吸入麻醉：多采用乙醚做麻醉藥。把帶有乙醚的棉球放入玻璃容器內(nèi)，揮發(fā)后將動物放入容器內(nèi)4~6分鐘，動物失去運動力后立即取出動物以避免麻醉過深致死。此法多用于短期操作性實驗，乙醚麻醉的優(yōu)點是蘇醒快，但是對呼吸道刺激性大，長時間容易窒息死亡。（2）、注射麻醉：大、小鼠和豚鼠常采用腹腔注射法進行全身麻醉，犬、貓、兔等既可腹腔注射也可靜脈注射給藥。注射時，先用麻醉藥總量的2/3，密切觀察動物生命體征的變化，如已經(jīng)達到所需麻醉的程度，余下的麻醉藥則不用，避免麻醉過深抑制大腦呼吸中樞導致動物死亡。各種動物常用的全身麻醉劑的劑量及途徑注:i.p指腹腔注射,i.m指肌肉注射,s.c指皮下注射,i.v指靜脈注射2、局部麻醉（1）、表面麻醉:利用局部麻醉藥的組織穿透作用，透過粘膜，阻滯淺表的神經(jīng)末梢，稱為表面麻醉。常用利多卡因，眼部用藥點滴、鼻內(nèi)用藥涂敷、咽喉氣管用藥噴霧、尿道灌注給藥。（2）、區(qū)域阻滯麻醉：在手術(shù)區(qū)內(nèi)四周和底部注射麻醉藥阻斷疼痛的向心傳導，稱為區(qū)域阻滯麻醉。常用普魯卡因。（3）、神經(jīng)干(叢)阻滯麻醉：在神經(jīng)干(叢)的四周注射麻醉藥，阻滯其傳導，使其所支配的區(qū)域疼痛感覺消失，稱為神經(jīng)干(叢)阻滯麻醉。常用利多卡因。（4）、局部浸潤麻醉：沿手術(shù)切口逐層注射局部麻醉藥，阻滯組織中的神經(jīng)末梢，稱為局部浸潤麻醉。常用普魯卡因。3、麻醉注意事項（1）有些麻醉藥，如乙醚揮發(fā)性很強，易燃，使用時應遠離火源，平時應妥善保存。（2）應特別注意各種麻醉藥的劑量和給藥途徑，切莫因藥量過大而引起中毒或死亡。（3）注射時，一般要求緩慢注入，并隨時觀察動物肌肉的緊張性、角膜反射、呼吸頻率、疼痛反射等指標。（4）注意保溫，采取實驗桌內(nèi)裝燈、電褥、臺燈照射等。（5）萬一麻醉過量，根據(jù)不同情況采取措施，如施行人工呼吸、給予蘇醒劑或注射強心劑、咖啡因、腎上腺素、可拉明等，也可以靜脈注射5%溫熱的葡萄糖溶液。四、實驗動物給藥途徑與方法（一）、注射法給藥3.肌肉注射：一般選擇肌肉發(fā)達而且無大血管經(jīng)過的部位，犬、貓、兔多選臀部，大、小鼠多選股部。注射時針尖穿過皮膚后，再往深部刺入肌肉，此時針尖不能自由活動，回抽注射器無回血，即可注射。一般小動物選擇5或5.5號針頭，大動物選用6或6.5號針頭。注意，注射時針頭與肌肉成60。角，一次性刺入，小鼠每次注入量不超過0.1ml。4.腹腔注射：將動物固定，然后在左或右下腹皮下，將針頭向前推0.5~1.0cm，再以45。角斜穿腹肌，緩慢注入藥液。注藥之前有落空感，回抽無腸液、尿液后方可注藥。小鼠一次注射量為0.1~0.2ml/10g(體重)，大鼠為1~2ml/100(體重)。5.靜脈注射：實驗動物不同所選靜脈注射部位也不同。大、小鼠一般選用尾靜脈，兔選用耳緣靜脈，犬選用后肢小隱靜脈或前肢內(nèi)側(cè)皮下靜脈注射。一般只限于液體藥物，若是懸濁液，可能引起血管栓塞。⑴大、小鼠尾靜脈注射：尾靜脈有3條，左右兩側(cè)和背側(cè)各有1條，由于兩側(cè)靜脈比較容易固定，所以常被采用。操作時，先將動物固定在暴露尾部的固定器內(nèi)（燒杯等），除毛后，將尾部置于45℃~50℃的溫水中浸泡1~2分鐘或用75%酒精棉反復擦拭使血管擴張，以左手拇指和食指捏住尾兩側(cè)，使靜脈充盈，注射時針頭盡量采取與尾部平行的角度進針，完畢后把尾部向注射側(cè)彎曲止血。一次注射量為0.05~0.1mg/10g(體重)⑵兔耳緣靜脈注射：兔耳緣靜脈表淺易固定而常被采用。操作時，先固定兔子，而后用75%酒精棉球反復擦拭使血管充盈，左手食指、中指夾住靜脈近心端，拇指繃緊靜脈遠心端，無名指和小指墊在耳下邊，針從靜脈末端刺入并順血管方向平行刺入1cm左右，回抽有血后再用拇指固定針頭，放開食指和中指將藥液注入，拔針后用酒精棉球壓迫幾分鐘，防止流血和消毒。⑶犬的靜脈注射：多采用前肢內(nèi)側(cè)皮下靜脈或后肢小隱靜脈，在靜脈血管近心端用橡皮帶扎緊，使血管充盈，從靜脈的遠心端平行進針，回抽有血后松開橡皮帶，將藥液緩慢注入。⑷豚鼠的靜脈注射：同犬的靜脈注射方法，也可以象兔一樣采用耳緣靜脈注射。6.淋巴囊注射：主要用于蛙類。腹部淋巴囊和頭背部淋巴囊常作為蛙類給藥途徑。采用腹部淋巴囊給藥時，將針頭從蛙大腿上端刺入，經(jīng)大腿肌層入腹壁肌層，再進入腹壁皮下，然后注入藥物；采用胸淋巴囊給藥時，將針頭刺入口腔，使穿過下頜肌層入胸淋巴囊內(nèi)注射藥物，一次最大給藥劑量為1ml。蛙全身分布為咽、胸、背、腹側(cè)、腹、大腿和腳等七個淋巴囊。

（二）、經(jīng)口給藥法1.自動口服法：將藥物放入飼料或飲水中，讓動物自動攝入，方法簡單不費工夫，也不會給動物造成損傷。但很難掌握給藥量，有時藥物在常溫下還會分解。這種方法一般適用于動物疾病的防治、藥物的毒性觀察、某些與食物有關(guān)的人類疾病動物模型的復制等。2.強制灌胃給藥：就是用灌胃器將藥品直接強制灌入胃內(nèi)。這種方法能準確掌握給藥量、給藥時間，并能發(fā)現(xiàn)和記錄癥狀出現(xiàn)的時間及經(jīng)過。缺點是費時、同時給動物帶來一定的損傷和心理影響。因此，如果操作技術(shù)熟練對動物的不良影響就可以減少一些。⑴大、小鼠、豚鼠的灌胃法：左手抓住鼠背頸部皮毛將動物固定，右手持灌胃器，將灌胃針從口腔插入，沿咽后壁插入食道，使其前端達到膈肌水平，為防止插入氣管，應回抽注射器針栓，如無空氣被抽回，即可將藥液注入。小鼠進針約3~4cm、大鼠、豚鼠為4~6cm，常用灌胃量小鼠為0.2~1.0ml、大鼠為1~4ml、豚鼠為1~5ml。⑵兔、犬、貓的灌胃法：先固定動物，然后將開口器固定在動物口中，壓住舌頭，然后將灌胃管從開口器小孔插入食道，將另一端浸入水中，如有氣泡逸出，說明誤入氣管需拔出重插，插好后將藥液推入，為避免藥液殘留需再注入5ml生理鹽水。兔、貓插入為15cm左右，犬為20cm左右。一次耐受量兔為80~150ml，犬為200~500ml。各種動物一次灌胃能耐受的最大容積（三）、其他途徑給藥法⒈直腸給藥：多用于家兔，將藥物通過肛門直接注入動物直腸內(nèi)，經(jīng)直腸壁吸收，注意不要誤入陰道。⒉呼吸道給藥：以粉塵、氣體、蒸汽、霧等狀態(tài)存在的藥物或毒氣，均通過動物呼吸道給藥。⒊皮膚給藥：為了鑒定藥物或毒物經(jīng)皮膚的吸收作用、局部作用、致敏作用和光感作用等，均采用皮膚給藥。⒋脊髓腔內(nèi)給藥：此法主要用于椎管麻醉或抽取腦脊液。⒌關(guān)節(jié)腔內(nèi)給藥：主要用于大中型動物，給兔子注射時首先將兔仰臥固定，在臏韌帶附著點外上方約0.5cm處進針，針頭從前上方向下后方傾斜刺入，直至針頭遇到阻力變小為止，然后針頭稍后退，以垂直方向推進關(guān)節(jié)腔中。當有刺破薄膜的感覺時即可注入藥液。⒍腦內(nèi)給藥：常用于微生物學試驗。將病原體接種于被檢動物腦內(nèi)，然后觀察接種后的變化。⒎小腦延髓池給藥：此種給藥方法都是在動物麻醉情況下進行，而且常用于大動物如犬等，小動物很少采用。四、實驗動物用藥量及計算方法㈠給藥劑量的確定⒈先用小鼠粗略地摸索中毒劑量或致死劑量，然后用小于中毒的劑量，或取致死量的若干分之一為應用劑量，一般取1/10~1/5。⒉植物藥粗制劑的劑量多按生藥量折算。⒊化學藥品可參考化學結(jié)構(gòu)和作用都相似的藥物劑量。⒋一般情況下，在適宜的劑量范圍內(nèi)，藥物的作用常隨劑量的加大而增強。所以有條件時，最好同時用幾個劑量作實驗，以便迅速獲得關(guān)于藥物作用的較完整的資料。如實驗結(jié)果出現(xiàn)劑量與作用強度之間毫無規(guī)律時，則更應慎重分析。⒌用大動物進行實驗時，開始的劑量可采用用于鼠類劑量的2/5~1/2，以后可以根據(jù)動物的反應調(diào)整劑量。⒍根據(jù)動物的年齡大小和體質(zhì)強弱確定給藥劑量，一般說確定的給藥劑量是指成年動物的；如幼小動物，劑量應減少。如以狗為例：6個月以上的給藥量為1份時，3~6個月的狗給1/2份，45~89日齡給1/4份，20~44日齡給1/8份，10~19日齡給1/16份。⒎根據(jù)給藥途徑不同確定給藥劑量，如以口服量為100ml時，灌腸給藥量為100~200ml，皮下注射為30~50ml，肌肉注射為25~30ml，靜脈注射為25ml。㈡實驗動物間用藥量的計算方法動物實驗所用的藥物劑量，一般按mg/kg體重或g/kg體重計算，應用時須用已知藥液的濃度換算出相當于每kg體重應注射的藥液量(ml)，以便給藥。㈢人與動物及各類動物間藥物劑量的換算方法dB=dA×ＲＢ/ＲA×(WA/WB)1/3公式中:dA、dB是AB兩種動物kg體重的劑量(mg/kg)ＲA、ＲＢ是動物的體形系數(shù)。R可由表查到。WA、WB是動物體重五、實驗動物采血和采液方法（一）、采血（3）眼眶靜脈叢采血：左手拇指、食指從背部較緊地握住小鼠或大鼠的頸部（防止動物窒息），輕輕壓迫動物頸部兩側(cè)，使眶后靜脈叢充血。右手持接7號針頭的1ml注射器或長頸（3~4cm）硬質(zhì)玻璃滴管（毛細管內(nèi)徑0.5~1.0mm），使采血器與鼠面成45°夾角，由眼內(nèi)角刺入，針頭斜面先向眼球，刺入后再轉(zhuǎn)180°使斜面對著眼眶后界。刺入深度小鼠約2~3mm，大鼠約4~5mm。當有阻力時即停止推進，同時將針退出約0.1~0.5mm，邊退邊抽。若穿刺適當血液能自然流入毛細管內(nèi)，當?shù)玫剿璧难亢?，即除去加于頸部的壓力，同時將采血器拔出，防止術(shù)后穿刺口出血。體重20~25g的小鼠每次可采血0.2~0.3ml；體重200~300g大鼠每次可以采血0.5~1.0ml。（4）心臟采血：小鼠心臟小、心率快，采血困難；大鼠可以采用此法，仰臥固定，選擇心跳最明顯的部位，通常在胸骨左緣的正中作穿刺。（5）斷頭采血：左手拇指和食指以背部較緊地握住鼠頸部皮膚，并使動物頭朝下傾的姿勢。右手用剪刀猛剪鼠頸，約1/2~4/5的頸部全剪斷，讓血液自由滴入盛器。小鼠可采約0.8~1.2ml；大鼠約5~10ml。（6）頸動、靜脈采血：動物仰臥固定，切開頸部皮膚，分離皮下結(jié)締組織，充分暴露頸動、靜脈用注射器吸出血液。（7）腹主動脈采血：動物麻醉、仰臥固定，腹正中線切開腹腔，清晰暴露腹主動脈，用注射器吸出血液?；蛴脽o齒鑷子剝離結(jié)締組織，夾住動脈近心端，用尖頭手術(shù)剪刀剪斷動脈，使血液噴入盛器。（8）股動（靜）脈采血：由助手握住動物，采血者左手拉直動物下肢，使靜脈充盈；或者以搏動為指標，右手用注射器刺入血管。體重15~20g小鼠采血約0.2~0.8ml，大鼠約0.4~0.6ml。2、豚鼠采血法（1）耳緣剪口采血:用銳器割破耳緣，在切口邊緣涂抹20%檸檬酸鈉溶液以阻止血凝，血可自切口自動流出?？刹裳?.5ml左右。（2）心臟采血：選擇心跳最明顯的部位，通常在胸骨左緣的正中作穿刺。在第三、四肋間左緣3mm處垂直進針刺入心臟，血液即流入針管。成年豚鼠每周采血不超過10ml。（3）股動脈采血：動物仰臥固定，剪去腹股溝區(qū)的毛，麻醉后，局部碘酒消毒。切開長約2~3cm的皮膚暴露股動脈。用鑷子提起股動脈，遠端結(jié)扎，近端用止血鉗夾住，在動脈中央剪一個小孔。用無菌玻璃小導管或塑料管插入，放開止血鉗，血液由導管口流出。一次可采血10~20ml。（4）背中足靜脈采血：固定動物，將膝關(guān)節(jié)伸直，動物腳背面酒精消毒，找到背中足靜脈，以左手的拇指和食指拉住其趾端，右手刺入靜脈采血。3、兔采血法（1）耳靜脈采血：常用采血法之一，可反復取血。方法同耳靜脈給藥，但需逆血流方向進針，最多一次采血5~10ml。（2）耳中央動脈采血：盒式固定，左手固定兔耳，右手持注射器，在動脈的末端，沿動脈平行向心方向刺入，取血完畢后注意止血。一次可達15ml。（3）心臟采血：仰臥固定，在第三、四肋間左緣3mm處垂直進針刺入心臟，血液即流入針管。一次取血20~25ml。（4）后肢脛部皮下靜脈采血：仰臥固定，拔去脛部被毛，在脛部上端股部扎橡皮管，左手固定好靜脈，右手持注射器與皮下靜脈平行方向刺入血管，回抽有血后即可取血。一次可以取2~5ml。（5）股靜脈、頸靜脈采血：先作股靜脈和頸靜脈暴露分離手術(shù)，再采血。實驗動物的血液采集采血部位及采血量（二）、實驗動物的體液采集1.尿液的采集⑴代謝籠法：此法較常用，適用于大、小鼠、沙鼠、豚鼠、兔等中小動物。將動物放在特制的籠內(nèi)，動物排便時，可以通過籠底的大小便分離漏斗將尿液與糞便分開，達到采集尿液的目的。有的代謝籠除可以采集尿液外，還可以收集糞便及二氧化碳。⑵導尿管法：此法適用于雄性兔、犬。動物輕度麻醉后，固定于手術(shù)臺上，用導尿管（頂端用液體石蠟涂抹）經(jīng)尿道插入膀胱，可采到無污染的尿液。⑶壓迫膀胱法：將動物輕度麻醉后，用手在動物下腹部加壓，手要輕柔而有力。當外加的壓力足以使動物膀胱括約肌松弛時，尿液會自動由尿道排出。此法適用于貓、犬、兔等較大動物。⑷膀胱穿刺法：將動物麻醉后固定在手術(shù)臺上，在恥骨聯(lián)合上腹正中線剪毛，消毒后進行穿刺，入皮后針頭應稍改變角度，以避免穿刺后漏尿。⑸反射排尿法：此法適用于小鼠，因小鼠被人抓住尾巴提起時排便反射比較明顯，故需要采集少量尿液時，可采用此法。操整理應在提起動物的同時，迅速用容器接住尿液。⑹剖腹采尿法：剖腹暴露膀胱，用左手持小平鑷夾住小部分膀胱壁，右手持針在該部位直接穿刺抽取尿液。2.胸、腹水的采集⑴胸水的采集：主要采用胸膜腔穿刺術(shù)。動物立位或側(cè)臥固定→術(shù)部剪毛、消毒、局部浸潤麻醉→左手將術(shù)部皮膚向側(cè)方移動→右手持穿刺套管針沿緊靠肋骨前緣處皮膚垂直慢慢刺入→阻力消失或有落空感→抽取胸水⑵腹水的采集：主要采用腹膜腔穿刺術(shù)。動物自然站立固定→術(shù)部（恥骨前緣與臍之間，腹中線兩側(cè)）剪毛、消毒、局部浸潤麻醉→左手拇指、食指緊繃穿刺部位的皮膚→右手控制穿刺深度做垂直穿刺→腹水流出→立即固定針頭及注射器的位置連續(xù)抽吸注意：抽吸速度不要太快，腹水多時不要一次大量抽出，以免因腹壓突然下降導致動物出現(xiàn)循環(huán)功能障礙等問題。3.唾液的采集⑴直接抽吸法：在急性實驗中，可用吸管直接插入動物口腔或唾液腺導管抽吸唾液，不足在于從口腔抽吸的唾液會混入雜質(zhì)。⑵制備腮腺瘺法：用手術(shù)方法將腮腺導管開口移向體外，即以腮腺導管開口為中心，切成一直徑2~3cm的圓形粘膜片，將此粘膜片與周圍組織分開，穿過皮膚切口引到頰外，將帶有導管開口的粘膜片與周圍的皮膚縫合，腮腺分泌的唾液就流出頰外，這種方法可以收集到比較純凈的唾液。四、實驗動物的急救及處死方法（一）、實驗動物的急救措施（二）、實驗動物的處死方法（一）、實驗動物的急救措施當實驗進行中因麻醉過量、大失血、過強的創(chuàng)傷、窒息等各種原因，而使動物血壓下降甚至測不到。呼吸極慢或無規(guī)則甚至呼吸停止、角膜反射消失等臨床死亡癥狀時，應立即急救，急救的方法可根據(jù)動物的情況而定，對狗、兔、貓常用的急救措施有以下幾種。1、針刺針刺人中穴對挽救家兔效果較好；對狗用每分鐘幾百次頻率的脈沖電刺激膈神經(jīng)效果較好。2、注射強心劑可以靜脈注射0.1%腎上腺素1ml（增強心肌收縮力），必要時可直接心臟注射。當動物注射腎上腺素后，若心臟已經(jīng)搏動但極為無力時，可靜脈或心腔內(nèi)注射1%氯化鈣5ml(興奮心肌緊張力）。3、注射呼吸中樞興奮藥可靜脈注射尼可剎米(興奮延髓呼吸中心）或山梗菜堿（頸動脈化學感應器)。每只動物一次注25%尼可剎米1ml或1%山梗菜堿0.5ml。4、動脈快速注射高滲葡萄糖液一般常采用動物股動脈逆血流加壓、快速、沖擊式注入40%葡萄糖液。注射量根據(jù)動物而定，如狗可按2~3ml/kg體重計算。這樣可刺激動物血管內(nèi)感受器，反射性地引起血壓呼吸的改善。5、動脈快速輸血、輸液在作失血性休克或死亡復活等實驗時采用?？稍趧游锏墓蓜用}插一軟塑料套管，連接加壓輸液裝置。當動物發(fā)生臨床死亡時，即可加（180~200mmHg），快速從股動脈輸血和輸入低分子右旋糖酐。如實驗前動物曾用肝素抗凝，由于微循環(huán)血管中始終保持暢通，不出現(xiàn)血管中血液凝固現(xiàn)象，因此就是動物出現(xiàn)臨床死亡后數(shù)分鐘，采用此種急救措施仍易救活。6、人工呼吸可采用雙手壓迫動物胸廓進行人工呼吸，如有電動人工呼吸器，可行氣管分離插管后，再接人工呼吸器進行人工呼吸。一旦見到動物自主呼吸恢復，即可停止人工呼吸。有條件時，當動物呼吸停止，而心搏極弱或剛停止時，可用5%CO2和60%O2的混合氣體進行人工呼吸，效果更好。采用人工呼吸器時，應調(diào)整其容量：大鼠為50次/分鐘，每次8ml/kg（即400ml/kg/分鐘）；兔和貓為30次/分鐘，每次10ml/kg（即300ml/kg/分鐘）；犬為20次/分鐘，每次100ml/kg（即2000ml/kg/分鐘）（二）、實驗動物的處死方法處死實驗動物應遵循動物安樂死的基本原則，即盡可能縮短動物死亡時間，盡量減少其疼痛、痛苦。1、化學致死法此法適用于各種動物，可吸入二氧化碳、乙醚、氯仿等致死。因乙醚易引起火災，氯仿對人有較大毒性。而二氧化碳對人很安全，處死動物效果確切，故最好使用二氧化碳。也可靜脈注射一定量的氯化鉀溶液（心肌失去收縮力）、福爾馬林溶液（蛋白凝固）、士的寧、DDT致死。2、脊椎脫臼法大、小鼠常用。將動物放在鼠籠蓋或粗糙的表面上，用左手拇指與食指用力按住鼠頭，右手抓住鼠用力向后上方拉，使頸椎脫臼，鼠立即死亡。3、空氣栓塞法此法適用于犬、貓、兔、豚鼠等較大動物。向動物靜脈內(nèi)注入一定量的空氣，使之發(fā)生栓塞而死。一般兔、貓等靜脈內(nèi)注入20~40ml空氣即可致死。每條犬由前肢或后肢皮下靜脈注入80~150ml空氣，可很快致死。此法常出現(xiàn)動物長時間掙扎，從動物保護的角度出發(fā)，不提倡使用。4、急性失血法小鼠等小動物可采用頸總動脈大量失血而致死的方法。犬等大型動物先麻醉后放血，要使放血的切口保持通暢，一般在股三角區(qū)橫切約10cm的切口，切斷股靜、動脈，使之大量失血而死亡。采用此方法，動物十分安靜，對臟器無損傷，對活殺采集病理切片標本是一種較好的方法。5、擊打法此法適用于大鼠、家兔等。抓住動物尾部，提起，用力摔擊其頭部，或用小木錘用力擊打后腦部也可致死。6、斷頭法此法適用于大、小鼠等小型動物，具體方法與斷頭采血法相同。7、破壞腦脊髓法此法適用于蛙類。8、其他方法其他處死實驗動物的方法還有破壞延腦法、開放性氣胸法等。第四節(jié)影響動物實驗的因素實驗動物對動物實驗處理的反應可用如下的公式表示：R=（A+B+C）×D±E其中：R為實驗動物的總反應或演出型；A為動物種間的共同反應；B為動物品種、品系特有的反應；C為動物個體反應；D為環(huán)境因素（包括實驗處理）；E為實驗誤差。可以看出A、B、C是實驗動物的本身反應，是由遺傳因素起決定性作用，被選擇的實驗動物，在嚴格控制環(huán)境因素D或改變其中某一條件后就可能得到一個理想的實驗結(jié)果R。一、生物因素對動物實驗的影響生物因素涉及同種生物因素和異種生物因素等。1、實驗動物也存在社會地位和勢力范圍；2、實驗動物要有一定的活動面積和空間，要有合理的飼養(yǎng)密度。3、異種動物之間可產(chǎn)生相互影響，因此不同種、品系的動物應分室飼養(yǎng)。4、病原微生物對實驗動物的影響是明顯的。普通動物、SPF動物和無菌動物特點的比較二、遺傳因素對動物實驗的影響1、不同種屬的哺乳動物，其生命過程有一定的共性，這是科學實驗中可以應用實驗動物的基礎(chǔ)。但另一方面不同種屬的動物在解剖、生理生化特征和各種反應上又有個性。如犬、貓、猴對嘔吐反應敏感，兔、豚鼠不敏感，大小鼠無反應。2、同種屬不同品系的動物對同一刺激的反應有很大的差異。C3H小鼠乳腺癌97%，NOD易發(fā)糖尿病，C57BL低癌系。3、動物的解剖生理特征和反應性隨年齡而明顯變化，老年動物代謝能力低下，反應不靈敏，一般動物實驗應選成年動物進行。慢性實驗或觀察動物的生長發(fā)育，應選擇幼齡動物。在老年醫(yī)學研究中，應選用老齡動物。論文設計要保證在動物生命周期內(nèi)完成。4、不同品種和品系的實驗動物的壽命各不相同，所以選用實驗動物時應注意到實驗動物之間年齡的對應，以便進行分析比較。犬與人的年齡對應（年）5、不同性別的動物對同一藥物的敏感性不同，對同一刺激的反應也不一致。雌性動物在性周期的不同時期，懷孕和授乳時，機體的反應性差異很大。因此科研工作中一般選雄性動物或雌雄各半作實驗。三、環(huán)境因素對實驗動物的影響影響動物實驗的環(huán)境因素很多，主要有溫度、濕度、通風、光照、噪音、有害氣體、籠具和墊料等，按國家或行業(yè)標準加以控制。1、應在標準的實驗室中進行實驗。特別在進行毒性實驗時，室溫應設定在22~24℃。用大、小鼠所作的急性毒性實驗中，在不同的溫度下所作的LD50有所不同，見下表：不同室溫下幾種藥物對小鼠的半數(shù)致死量2、實驗結(jié)果表明麻醉或固定后動物體溫將下降，動物實驗中應特別注意動物正常體溫的維持。3、動物的許多機能，如體溫、血糖、基礎(chǔ)代謝率、各種內(nèi)分泌激素的水平都呈晝夜性的節(jié)律性變化，動物實驗時應注意動物的這些節(jié)律性變化，應選擇在同樣的季節(jié)，每日在同樣的時間進行，才能得到正確的實驗結(jié)果。四、實驗操作對動物實驗的影響1、動物實驗要求按照實驗室操作規(guī)范（GLP）和標準的操作程序（SOP）嚴格執(zhí)行。這些法規(guī)對實驗動物、實驗室條件、工作人員素質(zhì)、技術(shù)水平和操作方法都有明確的要求。2、實驗動物的精神、神經(jīng)因素對實驗研究有影響。當動物遭受虐待、創(chuàng)傷、粗暴對待等外部刺激時，其內(nèi)分泌系統(tǒng)、循環(huán)系統(tǒng)、機體代謝都與正常時不同。應養(yǎng)成日常善待動物，并熟練掌握捉拿、固定、注射、給藥、手術(shù)等技能，減少對動物的不良刺激。3、給藥途徑也是影響實驗的重要問題。如有些藥品在胃內(nèi)被破壞或在肝內(nèi)分解，經(jīng)口服給藥就會影響其效果。有些中藥制劑經(jīng)靜脈注射和口服其療效相差很大。有些藥的效果與給藥次數(shù)和濃度關(guān)系很大，動物和人的用藥劑量的換算也應準確。4、動物實驗后對動物的管理也非常重要，應特別保證動物的有足夠量的營養(yǎng)供給。營養(yǎng)缺乏或過剩都會影響實驗結(jié)果。5、在動物實驗中對照問題也很重要，對照的方法很多，有空白對照、實驗對照、有效對照、配對對照等。6、肯定一個結(jié)果最好采用兩種以上的動物進行比較觀察，其中之一不應是嚙齒類動物。常用選擇順序是小鼠、大鼠、犬、猴或小型豬。猴、犬、大鼠與人在藥物代謝方面的相似性比較五、實驗技術(shù)環(huán)節(jié)對動物實驗的影響1、動物選擇選擇好適合研究需要的實驗動物是獲得正確實驗結(jié)果和實驗成功的重要環(huán)節(jié)。按照不同的實驗要求選擇合適的實驗動物。2、實驗季節(jié)生物體的許多功能隨著季節(jié)產(chǎn)生規(guī)律性的變動。不同的實驗季節(jié)，動物的機體反應性有一定的改變。3、晝夜過程機體的有些功能有晝夜規(guī)律形變動。4、麻醉深度動物實驗中往往需要將動物麻醉后才能進行各種操作。要求麻醉深度要適度，而且在整個實驗過程中要保持始終恒定。5、手術(shù)技巧動物實驗中除了注意選擇合適的實驗動物，高純度的試劑，靈敏的儀器，方法準確外，還必須注意手術(shù)技巧，即操作技術(shù)的熟練。手術(shù)熟練可以減少對動物的刺激，將會提高實驗的成功率和實驗結(jié)果的準確性。6、實驗藥物（1）動物實驗中常常需要給動物體內(nèi)注入各種藥物以觀察其作用和變化。因此給藥的途徑、劑量是影響實驗中很重要的問題。（2）給藥次數(shù)對一些藥物的藥效也有影響。（3）藥物的濃度和劑量也是一個重要的問題，太高的濃度，太大的劑量都會出現(xiàn)錯誤的結(jié)果。（4）在動物實驗中常遇到的問題是動物和人用藥劑量的換算。動物和人用藥的劑量的換算以體表面積計算比以體重換算好一些，但仍需慎重處理。7、對照問題動物實驗中對照問題也是非常重要的，常有忽視或錯誤地應用對照的情況，從而造成實驗失敗。一般對照的原則“齊同對比”。對照的方法很多，有空白對照、實驗對照、有效（或標準）對照、配對對照、組間對照、歷史對照以及正常值對照等。（1）空白對照是指在不給任何處理情況下觀察動物的自發(fā)變化的規(guī)律。（2）實驗對照是采用與實驗相同操作條件的對照，如給藥實驗中的藥物溶劑、手術(shù)以及觀察撫摸等都可以對動物發(fā)生影響。（3）有效（或標準）對照常用于藥物研究。對一新藥的療效可用一已知的有效藥或能引起標準反應的藥物作對照，這樣既可考核實驗方法的可靠性，又可通過比較來了解新藥的療效和特點。(4)配對對照是同一個體在前后不同時間內(nèi)比較對照期和實驗期的差異，或同一個體的左右兩部分作對照處理和實驗處理的差異，這樣可大大減少抽樣誤差。（5）組間對照是將實驗對象分成兩組或幾組比較差異。這種對照個體差異和抽樣誤差比較大。組間可用交叉對照法以減少誤差。如觀察某藥物的療效可用兩組犬分別做一次實驗和對照，再互相交換，以原實驗作為對照組，原對照組作為實驗組重復第一次實驗所觀察的療效或影響，而且檢查的指標和條件要等同。（6）歷史對照和正常值對照，這種對照要十分謹慎，必須要條件、背景、指標、技術(shù)方法相同才可以進行對比，否則將會得出不恰當?shù)纳踔铃e誤的結(jié)論。（7）實驗的重復和肯定選用動物一方面要數(shù)量合適，不造成浪費，另一方面也應做必要的重復實驗。有些實驗單做一種動物還不夠，應當重復幾種動物。這不僅可以比較不同動物的差異，而且可以在不同的動物實驗中發(fā)現(xiàn)新問題，提供使用不同指標的線索。

動物實驗技術(shù)三、分類：1.按機體水平：整體實驗和離體實驗。具體分為亞細胞、細胞、組織、器官、整體動物和無損傷動物等水平的實驗。2.時間：急性實驗（2天以內(nèi)）、亞急性實驗（1~4周）、慢性實驗（2~6個月或更長時間甚至整個生命期）四、方法：生理學、病理生理學、藥理學、病理解剖學、組織學、微生物學、免疫學的動物實驗方法等等。第二節(jié)動物實驗前的準備（二）實驗單位隨機分為三組分組情況（二）耳緣剪孔法：是在動物的耳邊緣剪出不同的缺口或打成不同的小孔進行標記的方法。為防止孔、口愈合，一般在打孔后用消毒的滑石粉涂抹在孔、口局部。由打孔或剪切的位置和孔數(shù)代表編號，一般在耳內(nèi)按上、中、下打孔，分別代表1、2、3，在相應位置剪缺口代表4、5、6，剪兩個缺口代表7、8、9，無孔或缺口為10。本法規(guī)定右耳代表個位數(shù)、左耳代表十位數(shù)。（三）烙印法：用烙印鉗將號碼烙印在犬等大中型動物無體毛或明顯部位。大、小鼠等小動物可用刺針在動物耳上刺號，然后用棉簽蘸著溶在酒精中的黑墨在針刺處涂抹。烙印前,最好對烙印的部位預先用酒精消毒，操作時要注意防止感染。（四）號牌法：用特制的金屬號牌固定在實驗動物的耳上，大動物可系于頸項部，固定號牌時要注意避開血管。（五）籠子編號法：不在動物身體上作標記而把裝動物的籠子進行編號，也叫替代法。第三節(jié)動物實驗的基本操作一、實驗動物的抓取與固定二、實驗動物被毛去除法三、實驗動物的麻醉四、實驗動物給藥途徑與方法五、實驗動物采血和采液方法3、手術(shù)固定法：用乙醚等麻醉藥品麻醉后，用長20~30cm的線繩分別系在四肢上，再把系在四肢的線繩分別系在固定板四角的釘子上，并且在頭部上顎切齒的地方牽一根線繩達到完全固定。4、在尾靜脈給藥時，先根據(jù)小鼠的大小選擇合適的固定器，打開鼠筒蓋，把小鼠放在里面，只露出尾巴；或者用倒放的燒杯將鼠扣住，尾巴自燒杯凹口處露出，并壓住，即可進行操作。（二）、大鼠的抓取與固定1、抓取方法：4~5周齡以內(nèi)的大鼠同小鼠；周齡較大的大鼠其尾部皮膚容易被剝脫，所以用左手從背部中央到胸部捏起來抓住。抓取時最好帶防護手套，但手套不宜過厚。2、手固定法：抓取大鼠的方法類似小鼠，即用左手的拇指、食指和中指抓住頸背部皮膚，小指和無名指挾住尾部牢牢固定；或左手按住抓起大鼠的時候，把食指放在頸背部，拇指及其他三指放在肋部，食指和中指挾住左前肢，分開兩前肢帶起來，右手按住后肢固定；還有一種方法，張開虎口，迅速將拇指、食指插入腹下，虎口向前，其余三指及掌心握住大鼠身體中段，并保持仰臥體位，然后調(diào)整左手拇指位置，緊抵在下頜骨上進行實驗操作。3、手術(shù)固定法：同小鼠。4、尾靜脈給藥或采血時同小鼠。（三）、豚鼠的抓取與固定1、抓取方法：抓取幼小豚鼠時，用手捧起來；成熟的大豚鼠，用手大把抓起胸肋部即可。注意不能粗野，更不能抓取腰腹部，這樣容易造成肝破裂而死亡。2、手固定法：⑴將左手的食指和中指放在豚鼠頸背部兩側(cè)，拇指和無名指放在肋部，分別用手指夾住左右前肢抓起來。⑵反轉(zhuǎn)左手，用右手的拇指和食指夾住右后肢，用中指和無名指夾住左后肢是豚鼠整體伸直成一條直線。⑶一個人固定操作時，坐在椅子上，用右手拿著豚鼠的后肢夾在兩腿之間，用大腿代替右手夾住。3、手術(shù)固定法：同大、小鼠。（四）、家兔的抓取與固定1、抓取方法：用一只手大把抓住頸背部皮膚提起來，另一只手托住其臀部，讓其重心落在托其臀部的手上，運送時，可抓住頸肩部皮膚抱著兔子運送。2、手固定法：在灌胃給藥時，人坐在椅子上，用一只手抓住頸背部皮膚，另一只手抓住兩后肢放在兩腿之間，大腿夾住兔子的下半身，用空著的手抓住兩前肢固定之，抓住頸背部的手同時捏著兩只耳朵，不讓頭部轉(zhuǎn)動。3、固定器固定法：耳靜脈給藥或采血時用盒式固定法；從頸動脈采血或手術(shù)實驗時用此固定法。（1）盒式固定法：把兔子放在盒子里，只露出頭部，用轉(zhuǎn)扭擰固定器固定家兔。（2）臺式固定法：將麻醉的兔子仰臥，用紗布條依次將四肢捆綁固定于固定臺的兩側(cè)，然后把頭部放在金屬制的首枷和咀環(huán)上固定。（五）、犬的抓取與固定1、抓取方法：先給犬帶上系有鐵鏈條的脖套，對于性情兇猛的犬，要用特制的鉗式長柄犬夾夾住犬頸部將犬按倒后，再系脖套和鏈條。2、手固定法：首先綁住犬嘴，方法是飼養(yǎng)員或犬主人從側(cè)面靠近并輕輕撫摸其頸部皮毛，然后迅速用布帶綁住犬嘴，布帶從下頜繞到上頜打一個結(jié)，再繞到下頜打一個結(jié)，然后將布帶繞到頭后頸，在頸后部再打一個結(jié)，最后打一個活結(jié)，對于未經(jīng)馴服的犬，可用長柄犬夾夾住犬頸部按倒后強制綁嘴。3、手術(shù)臺固定法：麻醉后，松開布帶，將犬仰臥在手術(shù)臺上，先固定四肢，再固定頭部。（六）、貓的抓取與固定1、抓取方法：先輕聲呼喚，慢慢將手伸入貓籠，輕輕撫摸貓頭、頸及背部，然后一只手抓住其背部皮毛，另一只手抓其腰背部。如遇兇暴的貓不讓接觸時，可用網(wǎng)套抓取。2、固定方法：同兔臺式固定法。貓頭可用一根粗棉繩，一端拉住貓的兩只門齒