豬生長激素開釋肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)elisa試劑盒使用說明書Elisakit規(guī)格：48孔配置/96孔配置標準品稀釋液：1.5ml×1瓶酶標試劑：3ml×1瓶（48）/6ml×1瓶（96）【豬生長激素開釋肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)elisa試劑盒】本試劑僅供研究使用計算：以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在座標紙上繪出標準曲線，依據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實質濃度。試劑盒構成：封板膜:2片（48）/2片（96）說明書:1份密封袋:1個標準品：2700ng/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保留酶標包被板:1×481×962-8℃保留樣品稀釋液:3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保留顯色劑A液:3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保留顯色劑B液:3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保留停止液:3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保留濃縮清洗液:（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保留實驗原理：本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中豬生長激素開釋肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)水平。用純化的豬生長激素開釋肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中挨次加入生長激素開釋肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)，再與HRP標志的生長激素開釋肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)抗體聯合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過完全清洗后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉變成藍色，并在酸的作用下轉變成最后的黃色。顏色的深淺和樣品中的生長激素開釋肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)呈正有關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），經過標準曲線計算樣品中豬生長激素開釋肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)濃度。目的：本試劑盒用于測定豬血清，血漿及有關液體樣本中生長激素開釋肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)的含量。服務許諾：供貨期：款到發(fā)貨。工作時間內免費的技術咨詢和指導。請來電咨詢?yōu)榭蛻艄┙o來樣檢測服務，最大限度實驗結果的有效性(免費代測)。保留條件及有效期：試劑盒保留：2-8℃|有效期：6個月【豬生長激素開釋肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)elisa試劑盒】樣本辦理及要求：1.血清：室溫血液自然凝結10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。認真采集上1清，保留過程中如出現積淀，應再次離心。2.血漿：應依據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混淆10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。認真采集上清，保留過程中若有積淀形成，應當再次離心。尿液：用無菌管采集，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。認真采集上清，保留過程中若有積淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照推行。4.細胞培育上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管采集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。認真采集上清。檢測細胞內的成份時，用PBS（）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。經過頻頻凍融，以使細胞損壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。認真采集上清。保留過程中若有積淀形成，應再次離心。組織標本：切割標本后，稱取重量。加入必定量的PBS，PH7.4。用液氮快速冷凍保留備用。標本消融后仍舊保持2-8℃的溫度。加入必定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。認真采集上清。分裝后一份待檢測，其他冷凍備用。標本采集后盡早進行提取，提取按有關文件進行，提取后應趕快進行實驗。若不可以立刻進行試驗，可將標本放于-20℃保留，但應防止頻頻凍融.不可以檢測含NaN3的樣品，因NaN3克制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。操作步驟1.標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10孔，在第一、第二孔中分別加標準品100μl，而后在第一、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；而后從第一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻；而后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為1800ng/L，1200ng/L，600ng/L，300ng/L，150ng/L）。2.加樣：分別設空白孔（空白比較孔不加樣品及酶標試劑，其他各步操作同樣）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，而后再加待測樣品10μl（樣品最后稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不涉及孔壁，輕輕晃動混勻。3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液：將30（48T的20倍）倍濃縮清洗液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。5.清洗：當心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿清洗液，靜置30秒后棄去，這樣重復5次，拍干。加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。溫育：操作同3。清洗：操作同5。顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.停止：每孔加停止液50μl，停止反響（此時藍色立轉黃色）。11.測定：以空白空調零，450nm波長依序丈量各孔的吸光度（OD值）。測定應在加停止液后15分鐘之內進行?！矩i生長激素開釋肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)elisa試劑盒】注意事項：21．試劑盒從冷藏環(huán)境中拿出應在室溫均衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保留。2．濃清洗液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，清洗時不影響結果。3．各步加樣均應使用加樣器，并常常校正其正確性，以防止試驗偏差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內，如標本數目多，介紹使用排槍加樣。4．請每次測定的同時做標準曲線，最好做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋必定倍數（n倍）后再測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數（×n×5）。5．封板膜只限一次性使用，以防止交錯污染。6．底物請避光保留。7．嚴格依據說明書的操作進行