ICs13·100CCsC50江蘇省地方標(biāo)準(zhǔn)DB32/T4468一2023人體血清中11種農(nóng)藥殘留量測定氣相色譜-三重四級桿質(zhì)譜Determinationof11pesticidesresiduesinhumanserum一Gaschromatography-triplequadrupolemasspectrometry2023-03-23發(fā)布2023-04-23實施江蘇省市場監(jiān)督管理局中國標(biāo)準(zhǔn)出版社發(fā)布IDB32/T4468—2023前言本本文件按GB/T1.1—2020《照標(biāo)化工作導(dǎo)則第1部分:照標(biāo)化本文的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定本本文的某些內(nèi)容可能涉及專利。本本文的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本本文由江蘇省衛(wèi)生照標(biāo)化技術(shù)委員會提出并歸口。本本文起草單位:南京醫(yī)科大學(xué)、江蘇省疾病預(yù)防控制中心、無錫市疾病預(yù)防控制中心。1DB32/T4468一2023人體血清中11種農(nóng)藥殘留量測定氣相色譜-三重四級桿質(zhì)譜1范圍本文件規(guī)定了人體血清中氯苯胺靈、五氯苯甲醚、野麥畏、乙烯菌核利、殺瞑硫磷、粉銹寧、二甲戊靈、毒蟲畏、丁草胺、腈菌唑和莎稗磷11種農(nóng)藥殘留量氣相色譜-三重四級桿質(zhì)譜測定方法。本文件適用于人體血清中氯苯胺靈、五氯苯甲醚、野麥畏、乙烯菌核利、殺瞑硫磷、粉銹寧、二甲戊靈、毒蟲畏、丁草胺、腈菌唑和莎稗磷11種農(nóng)藥殘留量的測定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中,注日期的引用文件,僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法GB/T16126生物監(jiān)測質(zhì)量保證規(guī)范3術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。4原理試樣經(jīng)飽和硫酸銨沉淀蛋白,提取上清液經(jīng)固相萃取柱凈化,富集濃縮后,用氣相色譜-三重四級桿質(zhì)譜儀測定,外標(biāo)法定量。5試劑和材料除另有規(guī)定外,所有試劑均為分析純,水為符合GB/T6682規(guī)定的一級水。5.1試劑5.1.1甲醇(CH3OH)。5.1.2二氯甲烷(CH2C12)。5.1.3正己烷(C6H14)。5.1.4甲苯(C7H8)。5.1.5二氯甲烷-甲醇混合溶液:用二氯甲烷和甲醇按4:1體積比混合。5.1.6無水硫酸銨[(NH4)2SO4]。5.1.7飽和硫酸銨溶液:稱取過量無水硫酸銨,用100mL水溶解至有晶體析出。5.1.8胎牛血清。2DB32/T4468—20235.2標(biāo)準(zhǔn)品農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì):純度大于或等于95%或有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),11種檢測農(nóng)藥中文名稱及方法定量限見附錄A。5.3標(biāo)準(zhǔn)溶液配制5.3.1標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液(0.5mg/mL):分別準(zhǔn)確稱取12.5mg(精確至0.1mg)各標(biāo)準(zhǔn)品,用甲苯溶解并轉(zhuǎn)移至25mL容量瓶中,定容至刻度,配制成濃度為0.5mg/mL的各農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液,于-18℃避光保存,可穩(wěn)定3個月。5.3.2標(biāo)準(zhǔn)使用溶液標(biāo)準(zhǔn)使用溶液(25以g/mL):分別移取250以L各農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液于5mL容量瓶中,用甲苯定容至刻度,配制成濃度為25以g/mL的標(biāo)準(zhǔn)使用溶液。臨用現(xiàn)配。5.3.3標(biāo)準(zhǔn)工作曲線準(zhǔn)確吸取適量的標(biāo)準(zhǔn)使用溶液于空白基質(zhì)(胎牛血清)中,配制成目標(biāo)農(nóng)藥參考濃度分別為0以g/L、0.5以g/L、1.0以g/L、5.0以g/L、10.0以g/L和100.0以g/L的系列標(biāo)準(zhǔn),采用與待測樣本相同的前處理方法(見第8章),最后形成濃度水平為0以g/L、12.5以g/L、25.0以g/L、125.0以g/L、250.0以g/L和2500.0以g/L基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)序列。臨用現(xiàn)配。5.4材料5.4.1十八烷基硅烷鍵合固相萃取柱:3mL,200mg或相當(dāng)者。5.4.2非抗凝管。5.4.3聚丙烯離心管:1.5mL。6儀器和設(shè)備6.1氣相色譜-三重四級桿質(zhì)譜儀:配有電子轟擊源(EI)。6.2電子天平:感量0.0001g。6.3固相萃取裝置。6.4氮吹濃縮裝置。6.5高速離心機(jī):轉(zhuǎn)速可達(dá)12000r/min。6.6渦旋振蕩器。7試樣采集使用非抗凝管采集不少于2mL外周靜脈血,室溫靜置30min,3000r/min離心15min,取上清液轉(zhuǎn)移至1.5mL離心管中備用。試樣采集耗材、環(huán)境和人員應(yīng)符合GB/T16126的要求。3DB32/T4468—20238測定步驟8.1提取準(zhǔn)確移取0.5mL血清于1.5mL離心管中,加人500以L飽和硫酸銨溶液,渦旋振蕩30s,12000r/min離心15min,吸取上清液至另一離心管中。8.2凈化8.2.1固相萃取柱依次用甲醇、水各3mL活化。取上清液過柱,待樣品自然流盡后加人1mL水淋洗,淋洗液流盡后負(fù)壓抽干15min。8.2.2依次用4mL二氯甲烷-甲醇混合溶液、3mL正己烷洗脫,收集洗脫液,于40℃氨吹至干。加人200以L二氯甲烷,渦旋振蕩1min后,轉(zhuǎn)移至250以L內(nèi)襯管中,自然揮干,加人20以L甲苯復(fù)溶,渦旋振蕩1min后用于氣相色譜-三重四級桿質(zhì)譜測定。8.3測定8.3.1氣相色譜-三重四級桿質(zhì)譜參考條件8.3.1.1色譜條件色譜條件包括:a)載氣:高純氦氣,流速1mL/min。b)色譜柱:苯基亞芳基聚合物色譜柱,30mx0.25mmx0.25以m;或性能相當(dāng)者。c)進(jìn)樣方式:不分流進(jìn)樣。d)進(jìn)樣體積:2以L。e)進(jìn)樣口溫度:270℃。f)柱溫:初始溫度100℃,持續(xù)1min;30℃/min升溫至200℃保持1min;5℃/min升溫至210℃保持2min;10℃/min升溫至260℃;20℃/min,升溫至300℃,保持5min。8.3.1.2三重四級桿質(zhì)譜條件三重四級桿質(zhì)譜條件包括:a)碰撞氣:高純氬氣,流速1mL/min;b)離子源溫度:300℃;c)傳輸線溫度:300℃;d)掃描模式:SRM;e)電離電壓:70eV;f)發(fā)射電流:50以A;g)掃描寬度:3.0s;h)掃描時間:0.043s;i)電離方式:EI;i)選擇離子監(jiān)測:每種化合物分別選擇一個定量離子對,一個定性離子對。所有需要檢測的離子依據(jù)出峰順序,分時段分別檢測。每種化合物的保留時間、定量離子對及定性離子對見附錄B,化合物的選擇離子流色譜圖見附錄C。4VDB32/T4468—2023V8.3.2定性測定被測試樣中目標(biāo)農(nóng)藥色譜峰的保留時間與相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)色譜峰的保留時間相比較,相對誤差應(yīng)在士2.5%之內(nèi)。在相同實驗條件下進(jìn)行樣品測定時,如果檢出的色譜峰的保留時間與標(biāo)準(zhǔn)樣品相一致,并且在扣除背景后的樣品質(zhì)譜圖中,目標(biāo)化合物的質(zhì)譜定量和定性離子均出現(xiàn),而且同一檢測批次,對同一化合物,樣品中目標(biāo)化合物的定性離子和定量離子的相對豐度比與質(zhì)量濃度相當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)工作溶液相比,其允許偏差不超過表1規(guī)定的范圍,則可判斷樣品中存在目標(biāo)農(nóng)藥。如果不能確證,應(yīng)重新進(jìn)樣,以掃描方式(有足夠靈敏度)或采用增加其他確證離子的方式或用其他靈敏度更高的分析儀器來確證。表1定性測定時相對離子豐度的最大允許偏差相對離子豐度/%>5020~50(含)10~20(含)≤10允許相對偏差/%士20士25士30士508.3.3定量測定本方法通過工作曲線法進(jìn)行定量測定,標(biāo)準(zhǔn)曲線的上機(jī)濃度范圍為:12.5以g/L~2500.0以g/L,樣品經(jīng)過提取與凈化后進(jìn)行測定,根據(jù)得到的目標(biāo)物定量離子的峰面積,采用工作曲線法進(jìn)行定量,計算樣本中11種農(nóng)藥的含量。8.4平行試驗按步驟8.1~8.3的規(guī)定對同一試樣進(jìn)行平行試驗測定。8.5空白試驗除不加試樣外,其他操作步驟均按步驟8.1~8.3的規(guī)定進(jìn)行。9結(jié)果計算樣本中各農(nóng)藥的含量按照公式(1)計算,計算結(jié)果需扣除空白值。C×V sCs=C×V s式中:Cs—樣本中各農(nóng)藥濃度,單位為微克每升(以g/L);C—從工作曲線得對應(yīng)的各農(nóng)藥的濃度,單位為微克每升(以g/L);V—樣本檢測定容體積,單位為微升(以L);Vs—樣本取樣體積,單位為微升(以L)。10方法的定量限和準(zhǔn)確度10.1定量限血清取樣量為0.5mL,定容體積為20以L時,11種農(nóng)藥的定量限見附錄A。10.2準(zhǔn)確度胎牛血清中11種農(nóng)藥添加濃度均為1以g/L時,回收率為76.5%~133%;添加濃度均為10以g/L時,回收率為81.4%~123%。1.0以g/L、10.0以g/L添加濃度下各農(nóng)藥相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為17%~35%。5DB32/T4468—2023附錄A (規(guī)范性)11種檢測農(nóng)藥中文名稱及方法定量限11種檢測農(nóng)藥中文名稱及方法定量限見表A.1。表A.111種檢測農(nóng)藥中文名稱及方法定量限序號中文名稱定量限/(以g/L)1氯苯胺靈0.52五氯苯甲醚0.53野麥畏0.54乙烯菌核利0.55殺蜓硫磷0.56粉銹寧0.57二甲戊靈0.58毒蟲畏0.59丁草胺0.510腈菌唑0.511莎稗磷0.56DB32/T4468一2023附錄B (資料性)11種檢測農(nóng)藥參考保留時間、定量離子對和定性離子對11種檢測農(nóng)藥參考保留時間、定量離子對和定性離子對見表B.1。表B.111種檢測農(nóng)藥參考保留時間、定量離子對和定性離子對序號CAS號中文名稱英文名參考保留時間/min定量離子對定性離子對質(zhì)核比m/x碰撞能量/eV質(zhì)核比m/x碰撞能量/eV1101-21-3氯苯胺靈Ch1orpropham7.05213.1/127.112127.0/65.12021825-21-4五氯苯甲醚7.81279.9/236.920264.8/236.9832303-17-5野麥畏Tria1ate8.75270.0/185.916268.0/183.96450471-44-8乙烯菌核利Vinc1ozo1in9.54212.0/145.020178.1/115.1185122-14-5殺蜓硫磷Fenitrothion10.26277.0/109.012125.0/79.06643121-43-3粉銹寧Triadimefon10.96208.0/111.020181.0/127.16740487-42-1二甲戊靈Pendimetha1in11.57252.1/162.114162.1/161.1108470-90-6毒蟲畏Ch1orfenvinphos11.78269.0/161.014267.0/159.012923184-66-9丁草胺Butach1or12.56176.1/147.112160.1/130.1261088671-89-0腈菌唑Myc1obutani113.31179.0/90.030150.0/123.016116