發(fā)酵分析高效液相色譜技術(shù)第1頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四高效液相色譜法它是在經(jīng)典液相色譜實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，引入氣相色譜的理論。以液體作為流動(dòng)相的色譜法。在技術(shù)上采用高壓輸液泵，高效固定相和高靈敏的檢測(cè)器，而發(fā)展起來的快速分離分析技術(shù)。第2頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四HPLC和經(jīng)典液相色譜法的比較

高效液相色譜法經(jīng)典液相色譜法色譜柱柱長(zhǎng)/cm10～2510～200色譜柱柱內(nèi)徑/mm2～10（不銹鋼管）10～50（玻璃管）固定相粒度（粒徑μm）3～5075～600流動(dòng)相流動(dòng)方式高壓輸液泵壓入靠重力流入溶液的傳質(zhì)、擴(kuò)散速度快緩慢色譜柱入口壓力/MPa2～200.001～0.1色譜柱柱效/（理論塔板數(shù)/m）2*103～5*1042～50進(jìn)樣量/（g）10-6

～10-21～10分析時(shí)間/h0.05～1.01～20第3頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四HPLCvsGC分析對(duì)象流動(dòng)相工作條件氣相色譜法氣體和沸點(diǎn)較低的化合物，僅占有機(jī)物總數(shù)的20％

惰性氣體溫度較高高效液相色譜法高極性、高分子量、離子型的物質(zhì)，占有機(jī)物總數(shù)近80％

液體可在室溫下工作第4頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四

特點(diǎn)：高壓、高效、高速、高靈敏高沸點(diǎn)、熱不穩(wěn)定有機(jī)及生化試樣的高效分離分析方法。

LC＜＞GC互補(bǔ)性第5頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四高效液相色譜法的特點(diǎn)（1）分離效能高：柱效可達(dá)5000~30000塊/米（2）選擇性高：通過流動(dòng)相的控制來改善分離過程的選擇性（3）檢測(cè)靈敏度高：

UV—最小檢出量可以達(dá)到10-9g

FD--最小檢出量可以達(dá)到10-12g（4）分析速度快:采用了高壓泵第6頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四HPLC液-固吸附液-液分配正相色譜反相色譜一般反相色譜離子對(duì)色譜離子抑制色譜離子交換色譜一般離子交換色譜離子色譜氨基酸分析空間排斥色譜凝膠滲透色譜凝膠過濾色譜假相色譜膠束色譜環(huán)糊精色譜親合色譜，手性色譜，毛細(xì)管電泳第7頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四結(jié)構(gòu)流程高效液相色譜儀第8頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四高壓輸液系統(tǒng)：儲(chǔ)液罐、吸濾器、高壓輸液泵、脫氣裝置及梯度洗脫裝置進(jìn)樣系統(tǒng)：進(jìn)樣器，進(jìn)樣閥分離系統(tǒng)：色譜柱，恒溫箱檢測(cè)系統(tǒng)：檢測(cè)器記錄系統(tǒng)：記錄裝置、色譜工作站第9頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四色譜柱進(jìn)樣閥流動(dòng)相檢測(cè)器高壓泵脫氣裝置第10頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四1、流動(dòng)相和儲(chǔ)液罐（1）儲(chǔ)液罐

材質(zhì)：玻璃、不銹鋼、氟塑料或特種塑料聚醚醚酮（PEEK）

棕色玻璃瓶會(huì)避免藻類的生長(zhǎng)

容積：0.5~2.0L

放置位置：高于泵體，保持一定的輸液靜壓差

注意：密封、過濾

一、高壓輸液系統(tǒng)第11頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四液相色譜的流動(dòng)相1.流動(dòng)相特性（1）流動(dòng)相組成改變，極性改變，可顯著改變組分分離狀況。（2）親水性固定液常采用疏水性流動(dòng)相，即流動(dòng)相的極性小于固定相的極性，正相，極性柱也稱正相柱。（3）若流動(dòng)相的極性大于固定液的極性，則稱為反相液相色譜，非極性柱也稱為反相柱。組分在兩種類型分離柱上的出峰順序相反。第12頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四正相色譜反相色譜時(shí)間時(shí)間時(shí)間正、反相色譜中極性和保留時(shí)間的關(guān)系待測(cè)物極性：A>B>C第13頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四2.流動(dòng)相類別

按流動(dòng)相組成分：?jiǎn)谓M分和多組分；按極性分：極性、弱極性、非極性；按使用方式分：固定組成淋洗和梯度淋洗。常用溶劑：己烷、四氯化碳、甲苯、乙酸乙酯、乙醇、乙腈、水。采用二元或多元組合溶劑作為流動(dòng)相可以靈活調(diào)節(jié)流動(dòng)相的極性或增加選擇性，以改進(jìn)分離或調(diào)整出峰時(shí)間。第14頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四3.流動(dòng)相選擇

在選擇溶劑時(shí)，溶劑的極性是選擇的重要依據(jù)。

常用溶劑的極性順序：

水(最大)>甲酰胺>乙腈>甲醇>乙醇>丙醇>丙酮>二氧六環(huán)>四氫呋喃>甲乙酮>正丁醇>乙酸乙酯>乙醚>異丙醚>二氯甲烷>氯仿>溴乙烷>苯>四氯化碳>二硫化碳>環(huán)己烷>己烷>煤油(最小)第15頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四避免使用對(duì)不銹鋼有腐蝕性的溶劑。例：硝酸、硫酸、鹽酸、鹵化物，四氯化碳與異丙醇或四氫呋喃的混合物，含強(qiáng)絡(luò)合劑的溶液等。過濾——用濾膜過濾或垂熔漏斗過濾脫氣——采用超聲或過濾的方法注意流動(dòng)相使用前沖洗使用含酸、堿、緩沖液的流動(dòng)相后，必須用不含鹽的有機(jī)溶劑-水沖洗！第16頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四（2）流動(dòng)相----過濾流動(dòng)相過濾的目的

過濾去除可能存在的微小固體顆粒

保護(hù)色譜高壓泵和色譜柱流動(dòng)相過濾方法

在線溶劑過濾抽真空過濾第17頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四溶劑吸濾器:Ni合金，孔約0.45

m，防止顆粒物進(jìn)行泵內(nèi)。第18頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四流動(dòng)相在線過濾：

清潔方法：1、用水沖洗殘留溶劑后，將過濾器放在約35％濃硝酸里浸一小時(shí)2、用二次蒸餾水徹底沖洗過濾器3、將過濾器重新裝好。4、定期清洗溶劑過濾器及溶劑瓶（每1～3個(gè)月至少清洗一次）不能用超聲波清洗第19頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四流動(dòng)相抽真空過濾過濾用膜：水系和有機(jī)，孔徑：0.22μm和0.45μm第20頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四流動(dòng)相脫氣的目的使色譜泵的輸液準(zhǔn)確輸液均勻準(zhǔn)確，并且脈動(dòng)減小保留時(shí)間及色譜峰面積的重現(xiàn)性提高提高檢測(cè)的性能防止氣泡引起的尖峰基線穩(wěn)定，信噪比增加溶劑的紫外吸收本底降低保護(hù)色譜柱減少死體積防止填料的氧化（2）流動(dòng)相----脫氣第21頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四常用的脫氣方法有：抽真空脫氣法：特點(diǎn)：可以一次完成過濾和脫氣任務(wù)注意：抽真空會(huì)引起混合溶劑組分的變化，適合單一溶劑體系超聲波脫氣法簡(jiǎn)單，但效果不理想第22頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四使用新鮮配制的流動(dòng)相，特別是水溶劑或鹽緩沖液建議不超過兩天，最好每天更換流動(dòng)相：water/methanol/trifluoroaceticacid(50/50/0.1)a:freshb:afterthreehoursc:aftereighthours第23頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四主要部件之一，壓力：150～350×105Pa。應(yīng)具有壓力平穩(wěn)、脈沖小、流量穩(wěn)定可調(diào)、耐腐蝕等特性2、高壓泵第24頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四活塞型往復(fù)泵——液相色譜儀中使用最廣泛的恒流泵第25頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四第26頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四第27頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四第28頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四雙柱塞往復(fù)式串聯(lián)泵示意圖第29頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四3、梯度洗脫裝置：為什么要進(jìn)行梯度洗脫？

使保留值相差很大的多種成分在合理的時(shí)間內(nèi)全部洗脫并達(dá)到相互分離梯度洗脫：在分離過程中逐漸改變流動(dòng)相組成，如溶劑的極性、離子強(qiáng)度、pH值等。第30頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四梯度洗脫裝置

梯度洗脫技術(shù)可以提高柱效、縮短分析時(shí)間，改善檢測(cè)器的靈敏度，它類似于GC種使用的程序升溫技術(shù)

影響梯度洗脫的主要因素有：溶劑的純度、溶劑的互溶性、檢測(cè)器的種類

第31頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四高壓梯度：用于二元梯度，用兩個(gè)泵分別按設(shè)定的比例輸送A和B兩溶液至混合器

第32頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四低壓梯度：只用一個(gè)高壓泵，在泵前安裝了一個(gè)比例閥，混合就在比例閥中完成。

第33頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四四元低壓梯度系統(tǒng)第34頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四四元高壓梯度系統(tǒng)第35頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四泵壓力不正常的主要原因：

氣泡，主動(dòng)閥故障，出口閥故障，密封墊或柱塞桿磨損，滲漏或堵塞，比例閥故障，傳感器故障，使用比例閥混合時(shí)鹽濃度太高

第36頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四二、進(jìn)樣裝置六通閥進(jìn)樣裝置第37頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四第38頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四六通閥進(jìn)樣裝置正面第39頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四一定不能使用尖針！它會(huì)嚴(yán)重刮壞轉(zhuǎn)子墊圈進(jìn)樣針第40頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四六通閥進(jìn)樣裝置反面連接第41頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四自動(dòng)進(jìn)樣器樣品瓶置于進(jìn)樣針下方第42頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四進(jìn)樣針穿過墊圈進(jìn)入瓶中第43頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四注射器抽取所設(shè)定的樣品體積第44頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四進(jìn)樣針收回第45頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四轉(zhuǎn)入針端口使之并成為流路的一部分第46頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四進(jìn)樣注意點(diǎn)進(jìn)樣閥的廢液出口端高度必須與進(jìn)樣針在同一水平位置，以免虹吸作用，使樣品向針筒方向回流，或從廢液口流出。使用前后，要用流動(dòng)相（不含酸堿等緩沖液）或甲醇或水沖洗針孔，用針孔清洗器）。第47頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四進(jìn)樣方法整個(gè)定量圈體積進(jìn)樣——為獲得好的精密度，進(jìn)樣量應(yīng)大于定量圈量的2-5倍以上。由于層流影響，需要有過量的樣品液來取代管壁上的流動(dòng)相。SampleMobilephase第48頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四例20l定量圈，進(jìn)樣體積不能超過10l。否則，部分樣品將會(huì)從出口流失。這是因?yàn)橛捎趯恿鞯年P(guān)系，樣品流經(jīng)管中心的速度是平均速度的兩倍。進(jìn)樣前應(yīng)用流動(dòng)相沖洗進(jìn)樣孔，以除去前一針留下的樣品。注射針必須清洗干凈。部分定量圈體積進(jìn)樣——當(dāng)樣品量少時(shí)，采用部分體積進(jìn)樣，進(jìn)樣量由微量注射器手動(dòng)控制，要求：不得超過定量圈體積的1/2量第49頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四三、分離系統(tǒng)-色譜柱

柱材料和規(guī)格

﹠不銹鋼管

﹠柱管的內(nèi)徑：0.5～

4.6mm﹠填料粒度：3～

10μm﹠柱長(zhǎng)度：10～

25

cm常用色譜柱有：ODS柱、氰基柱、氨基柱等第50頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四色譜柱使用注意點(diǎn)：pH范圍2-11.5。使用有機(jī)緩沖液，濃度以10-50mM為好。在中高pH下避免使用磷酸鹽，碳酸鹽緩沖液，最高操作溫度60℃，最佳溫度﹤40℃。分離堿性物質(zhì)，所用流動(dòng)相pH值應(yīng)高于被測(cè)物pKa一個(gè)單位。第51頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四

柱pH范圍最高溫度

SBC18

90℃C860℃C360℃

苯基60℃

腈基60℃XDB60℃Extend-C1860℃123456789101112ZORBAXRP-HPLC系列柱的使用條件第52頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四保存色譜柱時(shí)用100%甲醇或乙腈，柱兩端必須用接頭密封。停用數(shù)天后最使用時(shí)，應(yīng)先用低流速甲醇沖洗1h左右，然后再換上流動(dòng)相，否則直接用流動(dòng)相，柱效會(huì)下降，峰形不好。新柱使用前應(yīng)用甲醇或乙腈沖洗（0.5ml/min）。第53頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四1、要求：粒徑小、顆粒分布均勻傳質(zhì)快、滲透壓小機(jī)械強(qiáng)度高、能耐高壓化學(xué)穩(wěn)定性好HPLC的固定相第54頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四液-固吸附分離固定相

種類：硅膠、氧化鋁、分子篩、聚酰胺等。結(jié)構(gòu)類型：全多孔型和薄殼型；粒度：5～10μm。

第55頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四

2.液-液分配及離子對(duì)分離固定相（1）全多孔型擔(dān)體

氧化硅、氧化鋁、硅藻土等制成的多孔球體；早期采用100μm的大顆粒，表面涂漬固定液，性能不佳已不多見?，F(xiàn)采用10μm以下的小顆粒，化學(xué)鍵合制備柱填料。

（2）表面多孔型擔(dān)體

（薄殼型微珠擔(dān)體）

30～40μm的玻璃微球，表面附著一層厚度為1～2μm的多孔硅膠。第56頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四（3）化學(xué)鍵合固定相

化學(xué)鍵合固定相：以硅膠為載體，借化學(xué)反應(yīng)方法將有機(jī)分子以共價(jià)鍵連接在硅醇基上

a.硅氧碳鍵型：≡Si—O—C

b.硅氧硅碳鍵型：≡Si—O—Si—C

穩(wěn)定，耐水，耐光，耐有機(jī)溶劑，應(yīng)用最廣。

c.硅碳鍵型：≡Si—C第57頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四化學(xué)鍵合固定相的特點(diǎn)：（1）傳質(zhì)快，表面無深凹陷。（2）壽命長(zhǎng)，化學(xué)鍵合，無固定液流失，耐流動(dòng)相沖擊；耐水，耐光，耐有機(jī)溶劑，穩(wěn)定。（4）選擇性好，可鍵合不同官能團(tuán)，提高選擇性。（5）有利于梯度洗脫。第58頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四化學(xué)鍵合固定相非極性鍵合相：十八烷基鍵合相（ODS，C18）中等極性鍵合相：醚基鍵合相極性鍵合相：氨基、氰基鍵合相第59頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四反相鍵合相色譜法（RPBPC）

固定相：采用極性較小的鍵合固定相，如硅膠-C18H37（ODS，C18）、硅膠-苯基等流動(dòng)相：

采用極性較強(qiáng)的溶劑，如甲醇、乙睛-水、水和無機(jī)鹽的緩沖溶液等。第60頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四

分離機(jī)理——疏溶劑作用理論非極性的烷基鍵合相——硅膠表面的十八烷基“分子毛”——較強(qiáng)的疏水特性。第61頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四分子中非極性部分——疏水烷基

——締合作用，分子保留分子極性部分——極性流動(dòng)相

——離開固定相，減小保留兩種作用力之差，決定分子在色譜中的保留行為流動(dòng)相——極性溶劑分離物——極性官能團(tuán)有機(jī)物第62頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四改變流動(dòng)相配比可分離極性化合物用水和無機(jī)鹽的緩沖液為流動(dòng)相可分離易離解的樣品有機(jī)酸、有機(jī)堿等。

主要用于分離非極性至中等極性的各類有機(jī)化合物

用途

第63頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四固定相：極性的有機(jī)基團(tuán)，CN、NH2。雙羥基等鍵合在硅膠表面流動(dòng)相：非極性或極性小的溶劑（如正已烷）中加入適量極性溶劑（如氯仿、醇等）

分離機(jī)理：范德華力、誘導(dǎo)力或氫鍵力用途：多用于分離極性或中等極性化合物正相鍵合相色譜法（NPBPC）第64頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四其它固定相離子交換固定相：離子交換樹脂、鍵合型離子交換樹脂空間排阻色譜固定相：凝膠手性固定相：手性官能團(tuán)鍵合或天然手性物質(zhì)固著在載體上如環(huán)糊精親合色譜固定相：生物專一性配基+載體第65頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四5、檢測(cè)器主要作用：監(jiān)測(cè)經(jīng)色譜柱分離后的組分濃度變化，并由工作站記錄數(shù)據(jù)，定性、定量分析。

第66頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四

紫外檢測(cè)器示差折光檢測(cè)器

熒光檢測(cè)器光電二極管陣列檢測(cè)器第67頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四

a.紫外檢測(cè)器基于被分析組分對(duì)特定波長(zhǎng)紫外光或可見光的選擇性吸收，應(yīng)用最廣，對(duì)大部分有機(jī)化合物有響應(yīng)。

靈敏度高；線性范圍寬；流通池可做得很小(1mm×10mm，容積8μL)；對(duì)流動(dòng)相的流速和溫度變化不敏感；波長(zhǎng)可選，易于操作；可用于梯度洗脫。第68頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四紫外-可見光檢測(cè)器光路示意圖第69頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四可變波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器﹠

選用氘燈作為光源，在190—600nm范圍內(nèi)可連續(xù)調(diào)節(jié)，選擇不同的波長(zhǎng)檢測(cè)第70頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四b.光電二極管陣列檢測(cè)器（DAD）

紫外檢測(cè)器的重要進(jìn)展；光電二極管陣列檢測(cè)器：1024個(gè)二極管陣列，各檢測(cè)特定波長(zhǎng)，計(jì)算機(jī)快速處理，三維立體譜圖。第71頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四第72頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四DAD檢測(cè)器的主要特點(diǎn)

①可以同時(shí)得到多個(gè)波長(zhǎng)的色譜圖，可以計(jì)算不同波長(zhǎng)處的相對(duì)吸收比②可以在色譜分離同時(shí)，對(duì)色譜峰的指定位置實(shí)時(shí)記錄吸收光譜圖，并得到最大吸收波長(zhǎng)③在色譜運(yùn)行期間，可以逐點(diǎn)進(jìn)行光譜掃描，得到時(shí)間—波長(zhǎng)—吸收值為坐標(biāo)的三維圖形第73頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四第74頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四三維：光譜-色譜圖第75頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四c.示差折光檢測(cè)器

（Differentialrefractiveindexdetector）

除紫外檢測(cè)器之外應(yīng)用最多的檢測(cè)器。可連續(xù)檢測(cè)參比池和樣品池中流動(dòng)相之間的折光指數(shù)差值。差值與濃度成正比。

通用型檢測(cè)器（每種物質(zhì)具有不同的折光指數(shù)）。靈敏度低，對(duì)溫度敏感，不能用于梯度洗脫。

第76頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四光源調(diào)零光學(xué)零參比樣品平面鏡透鏡光電轉(zhuǎn)換記錄儀放大器遮光板溶劑相和樣品+溶劑相對(duì)光的折射率不同，造成兩束光強(qiáng)度差變化，差示信號(hào)放大記錄代表樣品濃度通用型檢測(cè)器，靈敏度為10-7g/ml

對(duì)溫度變化敏感，且不適于梯度淋洗第77頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四d.熒光檢測(cè)器

（Fluorescencedetector）

高靈敏度，高選擇性。對(duì)多環(huán)芳烴，維生素B，黃曲霉素，卟啉類化合物，農(nóng)藥，藥物，氨基酸，甾類化合物等有響應(yīng)。第78頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四檢測(cè)器梯度

主要特點(diǎn)紫外-可見光可對(duì)流速和溫度變化敏感；池體積可制作得很小；對(duì)溶質(zhì)的響應(yīng)變化大。熒光可選擇性和靈敏度高；易受背景熒光、消光、溫度、pH和溶劑的影響。化學(xué)發(fā)光困難靈敏度高；發(fā)光試劑受限；受流動(dòng)相和脈動(dòng)的影響。電導(dǎo)不可是離子性物質(zhì)的通用檢測(cè)器；受溫度和流速影響；不能用于有機(jī)溶劑體系。電化學(xué)困難選擇性高；受流動(dòng)相pH值和雜質(zhì)的影響；穩(wěn)定性差。蒸發(fā)光散射可可檢測(cè)所有物質(zhì)。示差折光不可檢測(cè)所有物質(zhì)；不適合微量分析；對(duì)溫度變化敏感質(zhì)譜可主要用于定性和半定量。原子吸收光譜可選擇性高。ICP發(fā)射光譜可可進(jìn)行多元素同時(shí)檢測(cè)。火焰離子化可柱外峰展寬。第79頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四數(shù)據(jù)處理和計(jì)算機(jī)控制系統(tǒng)色譜工作站在線顯示自動(dòng)采集處理儲(chǔ)存自動(dòng)控制第80頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四HPLC的建立與應(yīng)用一、建立HPLC分析方法的一般步驟

1、根據(jù)被分析樣品的特性選擇適用于樣品分析的一種HPLC分離方式。材料來源、濃度范圍組分特性、結(jié)構(gòu)、分子量、溶解性等第81頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四

第82頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四2、選擇合適的分析方法適用的色譜柱：柱的規(guī)格（柱內(nèi)徑及柱長(zhǎng)）和選用固定相（粒徑及孔徑）流動(dòng)相檢測(cè)器樣品預(yù)處理第83頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四3.分析條件的優(yōu)化流動(dòng)相種類與配比梯度溫度流速檢測(cè)波長(zhǎng)進(jìn)樣量第84頁，共93頁，2023年，2月20日，星期四4、由獲得的色譜圖進(jìn)行定性分析和定