第一章

蛋白質(zhì)的化學(xué)4/7/20231蛋白質(zhì)存在于所有的生物細(xì)胞中，是構(gòu)成生物體最基本的結(jié)構(gòu)物質(zhì)和功能物質(zhì)。蛋白質(zhì)是生命活動的物質(zhì)基礎(chǔ)，它參與了幾乎所有的生命活動過程。4/7/20232

蛋白質(zhì)是生物體內(nèi)必不可少的重要成分人體45%細(xì)菌50%-80%真菌14%-52%酵母菌14%-50%

蛋白質(zhì)占干重4/7/20233內(nèi)容蛋白質(zhì)的化學(xué)組成蛋白質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)蛋白質(zhì)的營養(yǎng)價值學(xué)習(xí)目標(biāo)?4/7/20235第一節(jié)

蛋白質(zhì)的分子組成4/7/20236

一、蛋白質(zhì)的元素組成碳(C)50%氫(H)6%氧(O)19%－24%氮(N)16%硫(S)0%－3%少量的磷(P)，鐵(Fe)，銅(Cu),鋅(Zn)和碘(I)等4/7/20237二、蛋白質(zhì)的基本組成單位－氨基酸（一）氨基酸的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：1.組成蛋白質(zhì)的氨基酸都是α－氨基酸氨基酸的結(jié)構(gòu)通式為：CαRH2NHCOOH非解離形式4/7/20239二、蛋白質(zhì)的基本組成單位－氨基酸CαRH2NHCOOH非解離形式CαRH3N+HCOO-兩性離子形式（一）氨基酸的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：氨基酸的結(jié)構(gòu)通式：同一碳原子上連－COOH－NH24/7/202310二、蛋白質(zhì)的基本組成單位－氨基酸CαHH2NHCOOH氨基酸的命名：系統(tǒng)命名：α－氨基乙酸通俗名稱：甘氨酸4/7/202311（二）基本氨基酸的分類20種編碼氨基酸各種氨基酸的不同在于R側(cè)鏈各不相同二、蛋白質(zhì)的基本組成單位－氨基酸4/7/202313（二）基本氨基酸的分類4類非極性或疏水性氨基酸：R無極性，疏水性極性中性氨基酸：在生理條件下不帶電荷的極性氨基酸極性酸性氨基酸：在生理條件下帶負(fù)電荷的極性氨基酸極性堿性氨基酸：在生理條件下帶正電荷的極性氨基酸二、蛋白質(zhì)的基本組成單位－氨基酸4/7/202314非極性疏水性氨基酸7

特點(diǎn)：烷基、苯環(huán)、雜環(huán)丙氨酸（Ala）纈氨酸（Val）亮氨酸（Leu）異亮氨酸（Ile）苯丙氨酸（Phe）脯氨酸（Pro）甘氨酸（Gly）二、蛋白質(zhì)的基本組成單位－氨基酸4/7/202315極性酸性氨基酸2特點(diǎn)：羧基谷氨酸（Glu）天冬氨酸（Asp）二、蛋白質(zhì)的基本組成單位－氨基酸R-基有COOH(COO-)帶負(fù)電荷

4/7/202317極性堿性氨基酸3特點(diǎn)：氨基、胍基、咪唑基賴氨酸（Lys）精氨酸（Arg）組氨酸（His）二、蛋白質(zhì)的基本組成單位－氨基酸R-基有NH2(NH3+)

帶正電荷

4/7/202318極性堿性氨基酸3二、蛋白質(zhì)的基本組成單位－氨基酸精氨酸（Arg）組氨酸（His）咪唑基4/7/202319極性氨基酸4/7/202321帶電荷的氨基酸4/7/202322（三）氨基酸的理化性質(zhì)1.物理性質(zhì)氨基酸為白色晶體，離子晶格，熔點(diǎn)高，200℃以上。水中的溶解度不同。二、蛋白質(zhì)的基本組成單位－氨基酸4/7/202323等電點(diǎn)：在一定的pH值溶液中，氨基酸解離的程度和趨勢相等，凈電荷為零，在電場中既不向陰極移動也不向陽極移動，此時溶液的pH值叫該氨基酸的等電點(diǎn)，常用pI表示。P10CHH3N+HCOO-4/7/202325pH<pI凈電荷為正pH>pI凈電荷為負(fù)CHRCOOHNH3++H++OH-+H++OH-CHRCOO-NH2電泳：移向陰極

pH=pI

凈電荷=0CHRCOO-NH3+CHRH2NCOOH電泳：移向陽極電泳：不移動，此時溶解度最小4/7/202326第二節(jié)

蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能4/7/202329第二節(jié)蛋白質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)二級結(jié)構(gòu)三級結(jié)構(gòu)四級結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)一級結(jié)構(gòu)空間結(jié)構(gòu)4/7/2023301.肽鍵和肽鏈p11

一個氨基酸的氨基與另一個氨基酸的羧基之間失水形成的酰胺鍵稱為肽鍵，所形成的化合物稱為肽。

一、肽鍵和肽鍵平面OH+H2N4/7/202331肽鍵肽鍵鍵長為0.132nm;

單鍵鍵長為0.147nm雙鍵鍵長為0.123nm特點(diǎn)：不能自由旋轉(zhuǎn)一、肽鍵和肽鍵平面4/7/202332+HOC

O

CH2

NH2

H

C

丙氨酸

苯丙氨酸肽鍵CH2

NH2

H

C

C

O

HOCH3

H

C

NH

－C

O

丙苯氨丙氨酸（二肽）C

O

HOCH3

NHH

C

H+H2O4/7/202333肽鍵中的Ｃ＝Ｏ和Ｃ－Ｎ均不能自由旋轉(zhuǎn)肽鍵(-CO-NH-)中的４個原子和２個α碳原子(Cα)被約束在一個剛性平面(即肽鍵平面)4/7/202334多肽鏈可以看成由無數(shù)個酰胺平面被Cα串聯(lián)起來組成的；4/7/202335（一）肽與多肽

肽：氨基酸通過肽鍵鏈接起來形成的化合物p11。例如：七肽多肽：十肽以上CysMetPhe

Lys

Ser

Thr

Val

NH2

COOH

蛋白質(zhì)和肽沒有明確的界限，比如：促腎上腺皮質(zhì)激素39個氨基酸殘基組成，為多肽胰島素51個氨基酸殘基組成，為蛋白質(zhì)二、肽、多肽、活性肽4/7/202336多肽鏈的結(jié)構(gòu)式:

氨基酸殘基N端氨基末端C端羧基末端兩端:N端→C端絲氨酰纈氨酰酪氨酰天冬氨酰谷氨酰胺4/7/202337名稱：絲氨酰甘氨酰酪氨酰丙氨酰亮氨酸(5肽，4個肽鍵)寫法：ＮSer-Gly-Try-Ala-Leu或ＳＧＹＡＬ，（*反過來寫是另外的肽）4/7/202338（二）生物活性肽：具有生物活性的低分子量的肽。1、谷胱甘肽Glu—Cys—Gly（GSH）紅細(xì)胞中的巰基緩沖劑，維持血紅蛋白和紅細(xì)胞中其它蛋白質(zhì)或酶的半胱氨酸殘基（巰基）處于還原狀態(tài)；2GSHGS—SG（氧化型谷胱甘肽）二、肽、多肽、活性肽GSHPXH2O2+2GSH2H2O+GS—SG體內(nèi)重要的還原劑，清除內(nèi)源性過氧化物和自由基。4/7/2023392、肽類激素（牛催產(chǎn)素、牛加壓素、舒緩激肽）3、短桿菌肽S（抗生素）4/7/2023401.一級結(jié)構(gòu)的概念指不同種類和數(shù)量的氨基酸按照特定的排列順序通過肽鍵相連形成的多肽鏈。存在形式：鏈狀維系鍵：肽鍵（-CO-NH-，主）二硫鍵（-S-S-，次）

三、蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)CysMetPhe

Lys

Ser

Thr

Val

NH2

COOH

肽鍵4/7/202341多肽鏈的結(jié)構(gòu)式:N端氨基末端C端羧基末端兩端:N端→C端絲氨酸纈氨酸酪氨酸天冬氨酸谷氨酰胺4/7/202342N末端C末端牛核糖核酸酶4/7/2023434/7/2023442.一級結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)組成蛋白質(zhì)的氨基酸的數(shù)目多肽鏈的氨基酸種類順序多肽鏈內(nèi)或鏈間二硫鍵的數(shù)目和位置決定空間結(jié)構(gòu)，是功能的基礎(chǔ)三、蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)4/7/202345四、蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)

是指蛋白質(zhì)內(nèi)各原子圍繞某些共價鍵的旋轉(zhuǎn)而形成的各種空間排步及相互關(guān)系。4/7/2023461.二級結(jié)構(gòu)的概念在一級結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上通過氫鍵的作用，多肽鏈主鏈骨架由于折疊、盤曲而形成的空間結(jié)構(gòu)。主要有α-螺旋、β折疊、β-轉(zhuǎn)角、無規(guī)卷曲。維系鍵：氫鍵四、蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)－二級結(jié)構(gòu)4/7/2023472.二級結(jié)構(gòu)的主要形式－α螺旋α－螺旋：由肽鍵平面盤旋形成的螺旋狀構(gòu)象。p14二、蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)－二級結(jié)構(gòu)4/7/202348α－螺旋特點(diǎn)p141）肽鍵平面為單位，右手螺旋(穩(wěn)定)4/7/202349α－螺旋特點(diǎn)p142）每圈螺旋約3.6個a.a殘基；螺距：0.54nm；4/7/2023503）肽鍵的酰基氧與亞氨基氫間形成若干氫鍵，氫鍵的取向幾乎與中心軸平行,是α－螺旋穩(wěn)定的主要次級鍵1234α－螺旋特點(diǎn)4/7/2023514）氨基酸殘基側(cè)鏈向外；α－螺旋特點(diǎn)4/7/2023524/7/2023532.二級結(jié)構(gòu)的主要形式－β片層β－折疊：兩條或多條幾乎完全伸展的多肽鏈（或同一肽鏈的不同肽段）側(cè)向聚集在一起，相鄰肽鏈主鏈上的N－H和C=O之間形成氫鏈，這樣的多肽構(gòu)象就是β-折疊片。二、蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)－二級結(jié)構(gòu)4/7/202354

（二）.β-折疊

特點(diǎn)：（1）多肽主鏈呈鋸齒狀折疊構(gòu)象；側(cè)鏈R基交替分布在片層平面的兩側(cè)。4/7/202355

（二）.β-折疊

特點(diǎn)：（2）相鄰肽鏈主鏈上的N－H和C=O之間形成氫鏈,氫鍵與肽鏈的長軸接近垂直；氫鍵穩(wěn)定因素4/7/202356

（二）.β-折疊

特點(diǎn)：（3）從能量上看，逆向平行比順向平行更穩(wěn)定，前者的氫鍵NH---O幾乎在一條直線上，此時氫鍵最強(qiáng)。4/7/202357-折疊384/7/2023582.二級結(jié)構(gòu)的主要形式－U型轉(zhuǎn)折/β轉(zhuǎn)角肽鏈主鏈出現(xiàn)180°回折的轉(zhuǎn)角處結(jié)構(gòu)。（見圖P10）二、蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)－二級結(jié)構(gòu)4/7/2023594/7/2023602.二級結(jié)構(gòu)的主要形式－無規(guī)則卷曲用來闡述沒有確定規(guī)律性的那部分肽鏈結(jié)構(gòu)。

H2N

COOH

4/7/202361超二級結(jié)構(gòu)p16:由若干個相鄰的二級結(jié)構(gòu)單元（主要是α-螺旋和β-折疊）組合在一起，彼此相互作用，形成有規(guī)則的、在空間上能夠辨認(rèn)的二級結(jié)構(gòu)組合體或二級結(jié)構(gòu)串。3種基本組合形式：αα、βαβ和ββ。二、蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)－二級結(jié)構(gòu)4/7/202362超二級結(jié)構(gòu)αα

βαβ單元

βαβαβ4/7/202363(二)蛋白質(zhì)的三級結(jié)構(gòu)p16

在二級結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上，因R側(cè)鏈基團(tuán)的相互作用，肽鏈進(jìn)一步盤曲折疊形成空間排布維系鍵：氫鍵、鹽鍵、

疏水鍵、二硫鍵、范德華力N端C端4/7/202364b.鹽鍵a.氫鍵c.疏水鍵d.二硫鍵4/7/202365b氫鍵c疏水相互作用力e二硫鍵d范德華力a鹽鍵（離子鍵）f肽鍵4/7/202366結(jié)構(gòu)域：在二級結(jié)構(gòu)或超二級結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上，多肽鏈進(jìn)一步卷曲折疊，組裝成幾個相對獨(dú)立的、緊密球狀實(shí)體的三級結(jié)構(gòu)的局部折疊區(qū)。通常是功能活性部位4/7/202367(三)蛋白質(zhì)的四級結(jié)構(gòu)

由兩個或兩個以上具有獨(dú)立三級結(jié)構(gòu)的多肽借次級鍵締合而成的復(fù)雜空間結(jié)構(gòu)。

每一個三級結(jié)構(gòu)也稱為一個亞基或亞單位。維系鍵：疏水鍵、范德華力、二硫鍵、鹽鍵、氫鍵、

四級結(jié)構(gòu)的單個亞基無生物活性。4/7/202368血紅蛋白四級結(jié)構(gòu)由4個亞基組成

常見的四級結(jié)構(gòu)4/7/202369蛋白質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)－小結(jié)一級結(jié)構(gòu)→二級結(jié)構(gòu)→三級結(jié)構(gòu)→四級結(jié)構(gòu)基本單位－氨基酸4/7/202370一級結(jié)構(gòu)：二級結(jié)構(gòu)：三級結(jié)構(gòu)：四級結(jié)構(gòu)：維系蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)的鍵肽鍵（主）、二硫鍵氫鍵疏水鍵、氫鍵、鹽鍵、范德華力、二硫鍵疏水鍵、范德華力、氫鍵、鹽鍵、二硫鍵蛋白質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)－小結(jié)4/7/202371

三、蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能關(guān)系一級結(jié)構(gòu)是空間結(jié)構(gòu)的物質(zhì)基礎(chǔ)，是功能最根本的基礎(chǔ)。一級結(jié)構(gòu)改變，功能改變或喪失?？臻g結(jié)構(gòu)決定生物學(xué)功能。結(jié)構(gòu)改變，則功能改變甚至喪失4/7/2023724/7/202373血紅蛋白（亞鐵離子）（亞鐵血紅素）珠蛋白4/7/202374與有缺陷的血紅蛋白有關(guān)的疾病血紅蛋白病，如鐮刀狀細(xì)胞貧血病地中海貧血4/7/202375正常紅細(xì)胞鐮刀型紅細(xì)胞這樣的紅細(xì)胞容易破裂，使人患溶血性貧血，嚴(yán)重時會導(dǎo)致死亡。攜帶氧能力降低。致死性疾病。鐮刀形紅細(xì)胞貧血是典型的氨基酸序列決定二、三、四級結(jié)構(gòu)及生物學(xué)功能的例子。4/7/202376Hb-（正常人）纈-組-亮-蘇-脯-谷-谷-賴…Hb-S（患者）纈-組-亮-蘇-脯-纈-谷-賴…基因:CAC基因:CTC

4/7/202377討論課：圍繞蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能的關(guān)系來分析：“鐮刀形紅細(xì)胞貧血是典型的氨基酸序列決定二、三、四級結(jié)構(gòu)及生物學(xué)功能”。4/7/202378地中海貧血是一種遺傳性疾病,最早是在地中海沿岸的意大利、希臘等地區(qū)發(fā)現(xiàn)的,所以稱為“地中海貧血”。地中海貧血是一種遺傳性疾病，在我國多見于南方沿海地區(qū)——兩廣、湖南、湖北、四川、浙江、福建和臺灣地區(qū)，地中海貧血基因攜帶者高達(dá)20％。這種疾病是由于紅細(xì)胞內(nèi)的血紅蛋白數(shù)量和質(zhì)量的異常造成紅細(xì)胞壽命縮短的一種先天性貧血。此病目前尚無特殊根治方法。只有間斷輸血或輸濃縮的紅細(xì)胞以補(bǔ)充紅細(xì)胞的不足。地中海貧血的患者由于長期貧血，導(dǎo)致機(jī)體缺氧和其他營養(yǎng)成分缺乏，機(jī)體免疫力低下，容易發(fā)生各種感染性疾病。4/7/2023794/7/2023804/7/202381

天然狀態(tài)，有催化活性

尿素、β-巰基乙醇

去除尿素、β-巰基乙醇非折疊狀態(tài)，無活性核糖核酸酶4/7/202382瘋牛病中的蛋白質(zhì)構(gòu)象改變由朊病毒蛋白(PrP)引起的人和動物神經(jīng)退行性病變的一種疾病。正常的PrP富含α-螺旋，稱為PrPc。PrPc在某種未知蛋白質(zhì)的作用下可轉(zhuǎn)變成全為β-折疊的PrPsc，從而致病。PrPcα-螺旋PrPscβ-折疊正常瘋牛病4/7/202383PrPcPrPSc

4/7/202384復(fù)習(xí)1．在具有四級結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)分子中，每個具有三級結(jié)構(gòu)的多肽鏈?zhǔn)且粋€亞基。（）3．一個蛋白質(zhì)分子中有兩個半胱氨酸存在時，它們之間可以形成兩個二硫鍵。（）4．具有四級結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)，它的每個亞基單獨(dú)存在時仍能保存蛋白質(zhì)原有的生物活性。（）5．蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性是靠鏈內(nèi)氫鍵維持的，肽鏈上每個肽鍵都參與氫鍵的形成。（）6.所有蛋白質(zhì)都有一、二、三、四級結(jié)構(gòu)。（）7.蛋白質(zhì)是生物大分子，但并不都具有四級結(jié)構(gòu)(

)?！獭痢痢痢痢?/7/202385第三節(jié)蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)二、蛋白質(zhì)的變性一、蛋白質(zhì)的兩性電離和等電點(diǎn)三、高分子性質(zhì)四、蛋白質(zhì)的沉淀五、蛋白質(zhì)的呈色反應(yīng)六、紫外吸收特征4/7/202386一、蛋白質(zhì)的兩性電離和等電點(diǎn)PrHH2NHCOOH-NH2＋H2O-NH3＋＋OH－

陽離子,堿性-COOH

COO－

＋H＋陰離子,酸性兩性電離PrHH3N+HCOO-4/7/202387等電點(diǎn)：蛋白質(zhì)解離成的正、負(fù)離子的趨勢相等，凈電荷為零（呈電中性，為兩性離子）時溶液的pH稱為該蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)，常用pI表示。PrHH3N+HCOO-4/7/202388pH<pI凈電荷為正pH>pI凈電荷為負(fù)PrCOOHNH3++H++OH-+H++OH-PrCOO-NH2電泳：移向陰極

pH=pI

凈電荷=0PrCOO-NH3+PrH2NCOOH電泳：移向陽極電泳：不移動，此時溶解度最小4/7/202389等電點(diǎn)分別是pI=9.54、pI=4.0、pI=7.0的三種蛋白質(zhì),在pH=7.0的溶液中，分別帶___電、_____電和_____；電泳時分別移向_____、______和______極。4/7/202390醋酸纖維薄膜電泳裝置示意圖濾紙橋2.電泳槽3.醋酸纖維素薄膜4.電泳槽膜支架5.電極室中央隔板4/7/202391凝膠電泳槽4/7/20239222KD14.4KD116KD18.4KD25KD45KD4/7/202393二、蛋白質(zhì)的變性p211、概念：蛋白質(zhì)受到物化學(xué)因素的影響，導(dǎo)致空間結(jié)構(gòu)破壞，從而使蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)發(fā)生改變和生物功能喪失稱為蛋白質(zhì)的變性作用。4/7/202394蛋白質(zhì)的變性4/7/202395變性本質(zhì)：空間結(jié)構(gòu)破壞（次級鍵破壞），一級結(jié)構(gòu)不變（肽鍵完整）。4/7/2023962、引起蛋白質(zhì)變性的因素：物理因素：加熱，紫外線，超聲波，劇烈震蕩,X-射線等?；瘜W(xué)因素：強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、重金屬離子、尿素、丙酮、乙醇等。4/7/2023973、變性作用的特征（1）生物活性喪失（2）某些理化性質(zhì)改變

變性蛋白的溶解度減小、粘度增加（3）變性蛋白質(zhì)容易消化4/7/202398天然狀態(tài)，有催化活性尿素、β-巰基乙醇去除尿素、β-巰基乙醇非折疊狀態(tài)，無活性核糖核酸酶4/7/202399

4、應(yīng)用舉例臨床：消毒、滅菌(酒精、高溫高壓、紫外線消毒等)防止蛋白質(zhì)變性是有效保存蛋白質(zhì)制劑（如疫苗等）的必要條件。

4/7/20231001、具有膠體溶液特征：Pr在水溶液中形成1-100nm的顆粒。2、蛋白質(zhì)膠體穩(wěn)定性的因素：帶同種電荷，互相排斥；表面極性基團(tuán)與水形成“水化膜”。三、高分子性質(zhì)4/7/20231013、生理作用：利于血漿膠體滲透壓的形成、血液與組織之間的物質(zhì)交換。4/7/2023102透析工作圖半透膜原理4/7/2023103血液透析4/7/2023104四、蛋白質(zhì)的沉淀蛋白質(zhì)分子聚集而從溶液中析出的現(xiàn)象.方法：中性鹽沉淀反應(yīng)有機(jī)溶劑沉淀加熱沉淀反應(yīng)重金屬鹽沉淀反應(yīng)生物堿試劑沉淀反應(yīng)4/7/2023105

(一)中性鹽沉淀反應(yīng)常用的中性鹽：硫酸銨、硫酸鈉、氯化鈉性質(zhì)：鹽析:加高濃度中性鹽，蛋白質(zhì)溶解度減小鹽溶:加少量中性鹽，蛋白質(zhì)溶解度增加

特點(diǎn)：蛋白質(zhì)沉淀但不變性。

4/7/2023106(二)有機(jī)溶劑沉淀試劑：乙醇、甲醇、丙酮等有機(jī)溶劑對水的親和力大，破壞蛋白質(zhì)的水化膜。特點(diǎn)：蛋白質(zhì)沉淀且變性（故低溫下快速進(jìn)行）。4/7/2023107Pr＋重金屬離子Pr-重金屬離子↓原理:加重金屬離子:Cu2+,Hg2+,Ag+,Pb2

等。用途：解除重金屬中毒（三）重金屬鹽沉淀反應(yīng)特點(diǎn)：常使蛋白質(zhì)變性失活。4/7/2023108Pr＋＋苦味酸－

Pr-苦味酸↓原理:加生物堿試劑：鎢酸、苦味酸等。用途：除去或檢查血液、中藥注射液中的雜蛋白（四）生物堿試劑沉淀反應(yīng)特點(diǎn)：常使蛋白質(zhì)變性失活。4/7/2023109（五）加熱沉淀反應(yīng)幾乎所有的蛋白質(zhì)都可因加熱變性而凝固，少量鹽可促進(jìn)蛋白質(zhì)加熱凝固。如煮雞蛋、點(diǎn)鹵豆腐等特點(diǎn)：當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)處于等電點(diǎn)時，加熱凝固最完全迅速。4/7/20231101.雙縮脲反應(yīng)（蛋白質(zhì)和肽）肽鍵＋硫酸銅△稀堿溶液紫色或紅色化合物生成的顏色深淺與肽鍵數(shù)量成正比。雙縮脲反應(yīng)可用來檢測蛋白質(zhì)水解程度。五、蛋白質(zhì)的顯色反應(yīng)4/7/20231112、茚三酮反應(yīng)蛋白質(zhì)與茚三酮的丙酮溶液在pH5－7的溶液一起加熱可呈現(xiàn)藍(lán)紫色反應(yīng)。五、蛋白質(zhì)的顯色反應(yīng)4/7/2023112

酚試劑

（磷鎢酸－磷鉬酸化合物）蛋白質(zhì)分子中的

酪氨酸、色氨酸殘基3、酚試劑反應(yīng)（福林反應(yīng)）＋藍(lán)色化合物用于蛋白質(zhì)的含量測定（藍(lán)色越深，含量越高）4/7/2023113六.紫外吸收特征

含苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸等氨基酸的蛋白質(zhì)，在波長280nm處有特征性的最大吸收峰。可用于蛋白質(zhì)的定量測定。4/7/2023114蛋白質(zhì)的含量測定方法1、凱氏定氮法：測氮量2、福林－酚試劑法4/7/2023115第五節(jié)蛋白質(zhì)的分離純化（略）(一)鹽析和有機(jī)溶劑沉淀(二)電泳(三)透析和超濾(四)層析(五)超速離心4/7/2023116

電泳

前處理粗分離細(xì)分離生物組織

無細(xì)胞提取液破碎、溶解、差速離心選擇性沉淀法親和層析離子交換層析精制后的蛋白質(zhì)凝膠過濾疏水層析吸附層析一、蛋白質(zhì)的提取4/7/20231171、前處理：①將組織和細(xì)胞破碎動物組織和細(xì)胞：電動搗碎機(jī)、勻漿器、超聲波處理；植物組織和細(xì)胞：石英砂+提取液研磨或用纖維素酶處理；細(xì)菌：超聲波震蕩、與砂研磨、高壓擠壓、溶菌酶處理（分解肽聚糖）②如果所要蛋白質(zhì)集中在某一細(xì)胞組分，用差速離心法收集細(xì)胞的某一組分；4/7/20231182、粗分