第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法教學(xué)目的、要求掌握各種顯微鏡的用途、幾種細(xì)胞組分的主要分析方法的原理及技術(shù)了解電子顯微鏡的觀察方法，細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞工程及顯微操作技術(shù)的基本原理?，F(xiàn)在是1頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三本章內(nèi)容提要第一節(jié)細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)的觀察方法第二節(jié)細(xì)胞組分的分析方法第三節(jié)細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞工程與顯微操作技術(shù)第四節(jié)用于細(xì)胞生物學(xué)研究的模式生物(自學(xué))現(xiàn)在是2頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三

第一節(jié)

細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)的觀察方法現(xiàn)在是3頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三顯微鏡是觀察細(xì)胞的主要工具。根據(jù)光源不同，可分為光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡兩大類(lèi)。光學(xué)顯微鏡以可見(jiàn)光（紫外線顯微鏡以紫外光）為光源。電子顯微鏡以電子束為光源?，F(xiàn)在是4頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三普通光學(xué)顯微鏡熒光顯微鏡

激光共聚焦掃描顯微鏡相差顯微鏡

微分干涉差顯微鏡倒置顯微鏡

—、光學(xué)顯微鏡技術(shù)現(xiàn)在是5頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三普通生物顯微鏡由三部分構(gòu)成：照明系統(tǒng)光學(xué)放大系統(tǒng)機(jī)械裝置原理：經(jīng)物鏡形成倒立實(shí)像，經(jīng)目鏡進(jìn)一步放大成像。（一）普通復(fù)式光學(xué)顯微鏡現(xiàn)在是6頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三分辨率N=介質(zhì)折射率；α=鏡口角（標(biāo)本對(duì)物鏡鏡口的張角鏡口角總是要小于180?，所以sina/2的最大值必然小于1。分辨力數(shù)值不會(huì)小于0.2μm，人眼的分辨力為0.2mm,因此顯微鏡的最大設(shè)計(jì)倍數(shù)為1000X。指顯微鏡能分辨物體最小間隔的能力。0.61λ分辨率DN.sin（α/2）=現(xiàn)在是7頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三樣品的制作制片：固定（甲酫）、包埋（石蠟）切成厚約5μm的薄片以便觀察。染色：伊紅和美藍(lán)特異地與不同蛋白質(zhì)結(jié)合，品紅特異地顯示DNA的所在部位。現(xiàn)在是8頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三（二）熒光顯微鏡Fluorescencemicroscope特點(diǎn)：光源為短波光(紫外光)；有兩個(gè)特殊的濾光片；用一定波長(zhǎng)的光激發(fā)標(biāo)本發(fā)射熒光現(xiàn)在是9頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三現(xiàn)在是10頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三原理:利用一定波長(zhǎng)的光,照射被檢樣品,激發(fā)熒光物質(zhì)發(fā)出可見(jiàn)的熒光,視場(chǎng)中所見(jiàn)像主要是樣品的熒光映像.自發(fā)熒光:生物體內(nèi)有些物質(zhì)受激發(fā)光照射后可直接發(fā)出的熒光.木質(zhì)素,葉綠素次發(fā)熒光:標(biāo)本本身不發(fā)熒光，經(jīng)熒光染料處理后,那些對(duì)熒光染料有選擇性吸收的部分經(jīng)激發(fā)后發(fā)出的熒光.常用熒光物質(zhì)：酸性品紅，甲基綠，中性紅，EB等?，F(xiàn)在是11頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三現(xiàn)在是12頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三（三）激光共聚焦掃描顯微境

Laserconfocalscanningmicroscope,LCSM用激光作光源，逐點(diǎn)、逐行、逐面快速掃描。能顯示細(xì)胞樣品的立體結(jié)構(gòu)。分辨力是普通光學(xué)顯微鏡的3倍。用途類(lèi)似熒光顯微鏡，但能掃描不同層次，形成立體圖像。激光共聚焦掃描顯微鏡既可以用于觀察細(xì)胞形態(tài)，也可以用于細(xì)胞內(nèi)生化成分的定量分析、光密度統(tǒng)計(jì)以及細(xì)胞形態(tài)的測(cè)量。現(xiàn)在是13頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三現(xiàn)在是14頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三現(xiàn)在是15頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三現(xiàn)在是16頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三（四）、相差顯微鏡

相差顯微鏡（phasecontrastmicroscope）由P．Zernike于1932年發(fā)明，并因此獲1953年諾貝爾物理獎(jiǎng)。這種顯微鏡最大的特點(diǎn)是可以觀察未經(jīng)染色的標(biāo)本和活細(xì)胞。現(xiàn)在是17頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三現(xiàn)在是18頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三相差顯微鏡的基本原理把透過(guò)標(biāo)本的可見(jiàn)光的光程差變成振幅差，從而提高了各種結(jié)構(gòu)間的對(duì)比度，使各種結(jié)構(gòu)變得清晰可見(jiàn)。光線透過(guò)標(biāo)本后發(fā)生折射，偏離了原來(lái)的光路，同時(shí)被延遲了1/4λ（波長(zhǎng)），如果再增加或減少1/4λ，則光程差變?yōu)?/2λ，兩束光合軸后干涉加強(qiáng)，振幅增大或減小，提高反差?，F(xiàn)在是19頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三（六）微分干涉差顯微鏡Differentialinterferencecontrastmicroscope（DIC）1952年Nomarski發(fā)明，利用兩組平面偏振光的干涉，加強(qiáng)影像的明暗效果，能顯示結(jié)構(gòu)的三維立體投影。標(biāo)本可略厚一點(diǎn)，折射率差別更大，故影像的立體感更強(qiáng)。更適合研究活細(xì)胞中較大的細(xì)胞器?，F(xiàn)在是20頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三組成和普通顯微鏡一樣，只不過(guò)物鏡與照明系統(tǒng)顛倒，前者在載物臺(tái)之下，后者在載物臺(tái)之上，用于觀察培養(yǎng)的活細(xì)胞，具有相差物鏡。（七）、倒置顯微鏡現(xiàn)在是21頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三(八)、當(dāng)代顯微鏡的發(fā)展趨勢(shì)進(jìn)入20世紀(jì)80年代以來(lái)，光學(xué)顯微鏡的設(shè)計(jì)和制作又有了很大的發(fā)展，其發(fā)展趨勢(shì)主要表現(xiàn)在，注重實(shí)用性和多功能方面的改進(jìn)。在裝配設(shè)計(jì)上趨于采用組合方式，集普通光鏡加相差、熒光、暗視野、DIC、攝影裝置于一體，從而操作靈活，使用方便。自動(dòng)化與電子化現(xiàn)在是22頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三二、電子顯微鏡技術(shù)透射電子顯微鏡掃描電子顯微鏡現(xiàn)在是23頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三1.原理：以電子束作光源，電磁場(chǎng)作透鏡。電子束波長(zhǎng)與加速電壓(通常50~120KV)的平方根成反比。由電子照明系統(tǒng)、電磁透鏡成像系統(tǒng)、真空系統(tǒng)、記錄系統(tǒng)、電源系統(tǒng)等5部分構(gòu)成。分辨力0.2nm，放大倍數(shù)可達(dá)百萬(wàn)倍。用于觀察超微結(jié)構(gòu)（小于0.2μm）。用于電鏡的標(biāo)本須制成厚度約50nm左右的超薄切片。（一）、透射電子顯微鏡現(xiàn)在是24頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三現(xiàn)在是25頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三電子顯微鏡與光學(xué)顯微鏡的基本區(qū)別

分辨本領(lǐng)光源透鏡真空成像原理

利用樣品對(duì)波長(zhǎng)的吸光學(xué)0.2μm左右可見(jiàn)光收形成明暗反差和顏顯微鏡放大倍數(shù)1000×400-700nm玻璃不要求色變化100nm紫外光電子利用樣品對(duì)電子的顯微鏡0.1-0.2nm電子束

0.01-0.9nm

電磁要求

散射和透射形成明暗反差電鏡需要真空的原因:1.如果含有其他分子,會(huì)與電子發(fā)生碰撞,使電子散射,影響成像質(zhì)量,2.碰撞也會(huì)使電子束不穩(wěn)定,產(chǎn)生閃爍現(xiàn)象,3.灼熱的燈絲遇氣體易腐蝕和斷裂.現(xiàn)在是26頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三2、制樣技術(shù)超薄切片負(fù)染技術(shù)冰凍蝕刻現(xiàn)在是27頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三電子束穿透力很弱，用于電鏡觀察的標(biāo)本須制成厚度僅50nm的超薄切片，用超薄切片機(jī)ultramicrotome）制作。通常以鋨酸和戊二醛固定樣品，丙酮逐級(jí)脫水，環(huán)氧樹(shù)脂包埋，以熱膨脹或螺旋推進(jìn)的方式切片，重金屬（鈾、鉛）鹽染色。超薄切片現(xiàn)在是28頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三現(xiàn)在是29頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三Page59超薄切片技術(shù)主要包括取材、固定、包埋、切片、染色等步驟?，F(xiàn)在是30頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三Electronmicrographofaroot-tipcellstainedwithosmiumandotherheavymetalions.Thecellwall,nucleus,vacuoles,mitochondria,endoplasmicreticulum,Golgiapparatus,andribosomesareeasilyseen.現(xiàn)在是31頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三負(fù)染技術(shù)用重金屬鹽(如磷鎢酸)染色；吸去染料干燥后，樣品凹陷處鋪了一層重金屬鹽，而凸出地方?jīng)]有染料沉積，從而出現(xiàn)負(fù)染效果，分辨力可達(dá)1.5nm左右。NegativeStainedArchaebacteria現(xiàn)在是32頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三NegativeStainedActin現(xiàn)在是33頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三冷凍蝕刻freeze-etching標(biāo)本置于干冰（-78.5攝氏度）或液氮（-196攝氏度）中冰凍。用冷刀驟然將標(biāo)本斷開(kāi)，然后升溫，冰升華，暴露斷面結(jié)構(gòu)。向斷面噴涂一層蒸汽鉑和碳。然后用次氯酸鈉將組織溶掉，把鉑和碳的膜剝下來(lái)，此膜即為復(fù)膜（replica）。Page61現(xiàn)在是34頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三酵母細(xì)胞現(xiàn)在是35頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三掃描電子顯微鏡（scanningelectronmicroscope，SEM）于20世紀(jì)60年代問(wèn)世，用來(lái)觀察標(biāo)本的表面結(jié)構(gòu)。（二）、掃描電子顯微鏡現(xiàn)在是36頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三工作原理

用一束極細(xì)的電子束掃描樣品，在樣品表面激發(fā)出次級(jí)電子，次級(jí)電子的多少與電子束入射角有關(guān)，也就是說(shuō)與樣品的表面結(jié)構(gòu)有關(guān)，次級(jí)電子由探測(cè)體收集，并在那里被閃爍器轉(zhuǎn)變?yōu)楣庑盘?hào)，再經(jīng)光電倍增管和放大器轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?hào)來(lái)控制熒光屏上電子束的強(qiáng)度，顯示出與電子束同步的掃描圖像。圖像為立體形象，反映了標(biāo)本的表面結(jié)構(gòu)。為了使標(biāo)本表面發(fā)射出次級(jí)電子，標(biāo)本在固定、脫水后，要噴涂上一層重金屬微粒，重金屬在電子束的轟擊下發(fā)出次級(jí)電子信號(hào)。現(xiàn)在是37頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三現(xiàn)在是38頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三現(xiàn)在是39頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三現(xiàn)在是40頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三現(xiàn)在是41頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三

三、掃描隧道顯微鏡

掃描隧道顯微鏡（scanningtunnelingmicroscope，STM）

由Binnig等1981年發(fā)明，根據(jù)量子力學(xué)原理中的隧道效應(yīng)而設(shè)計(jì)。

利用掃描隧道顯微鏡直接觀察生物大分子，如DNA、RNA和蛋白質(zhì)等分子的原子布陣和某些生物結(jié)構(gòu)，如生物膜、細(xì)胞壁等的原子排列

現(xiàn)在是42頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三原理：根據(jù)隧道效應(yīng)而設(shè)計(jì)，當(dāng)原子尺度的針尖在不到一個(gè)納米的高度上掃描樣品時(shí)，此處電子云重疊，外加一電壓（2mV~2V），針尖與樣品之間形成隧道電流。電流強(qiáng)度與針尖和樣品間的距離有函數(shù)關(guān)系，將掃描過(guò)程中電流的變化轉(zhuǎn)換為圖像，即可顯示出原子水平的凹凸形態(tài)。分辨率：橫向?yàn)?.1~0.2nm，縱向可達(dá)0.001nm。用途：三態(tài)（固態(tài)、液態(tài)和氣態(tài)）物質(zhì)均可進(jìn)行觀察。現(xiàn)在是43頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三STMimageofaDNAmolecule現(xiàn)在是44頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三第二節(jié)細(xì)胞組分的分析方法一、細(xì)胞離心技術(shù)二、細(xì)胞組分顯示方法三、特異蛋白抗原的定位與定性四、特異核酸序列的定位與定性五、放射自顯影技術(shù)六、定量細(xì)胞化學(xué)分析技術(shù)現(xiàn)在是45頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三一、離心技術(shù)是分離細(xì)胞器及各種大分子基本手段。轉(zhuǎn)速為10~25kr/min的離心機(jī)稱(chēng)為高速離心機(jī)。轉(zhuǎn)速>25kr/min，離心力>89Kｇ者稱(chēng)為超速離心機(jī)。超速離心機(jī)的最高轉(zhuǎn)速可達(dá)100000r/min，離心力超過(guò)500Kg。現(xiàn)在是46頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三1.差速離心Differentialcentrifugation特點(diǎn)：介質(zhì)密度均一；速度由低向高，逐級(jí)離心。用途：分離大小相差懸殊的細(xì)胞和細(xì)胞器。沉降順序：核——線粒體——溶酶體與過(guò)氧化物酶體——內(nèi)質(zhì)網(wǎng)與高爾基體——核蛋白體?？蓪⒓?xì)胞器初步分離，常需進(jìn)一步通過(guò)密度梯離心再進(jìn)行分離純化?，F(xiàn)在是47頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三LowspeedHighspeedDifferentialcentrifugation現(xiàn)在是48頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三2.密度梯度離心用介質(zhì)在離心管內(nèi)形成一連續(xù)或不連續(xù)的密度梯度，將細(xì)胞混懸液或勻漿置于介質(zhì)的頂部，通過(guò)離心力場(chǎng)的作用使細(xì)胞和細(xì)胞成分分層、分離。類(lèi)型：速度沉降、等密度沉降。常用介質(zhì)：氯化銫、蔗糖、多聚蔗糖?，F(xiàn)在是49頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三

速度沉降velocitysedimentation

用途：分離密度相近而大小不等的細(xì)胞或細(xì)胞器。特點(diǎn)：介質(zhì)密度較低，介質(zhì)的最大密度應(yīng)小于被分離生物顆粒的最小密度。原理：介質(zhì)密度梯度平緩，分離物按各自的沉降系數(shù)以不同的速度沉降而達(dá)到分離?，F(xiàn)在是50頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三等密度沉降isopycnicsedimentation用途：分離密度不等的顆粒。特點(diǎn)：介質(zhì)密度高，陡度大，介質(zhì)最高密度大于被分離組分的最大密度。力場(chǎng)比速率沉降法大10~100倍，需要高速或超速離心。原理：樣品各成分在連續(xù)梯度的介質(zhì)中經(jīng)過(guò)一定時(shí)間的離心則沉降到與自身密度相等的介質(zhì)處，并停留在那里達(dá)到平衡，從而將不同密度的成分分離。現(xiàn)在是51頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三Velocity(A)andEquilibrium(B)sedimentation現(xiàn)在是52頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三二、細(xì)胞組分顯示方法組織化學(xué)或細(xì)胞化學(xué)染色（histochemicalorcytochemicalstaining）是利用染色劑可同細(xì)胞的某種成分發(fā)生反應(yīng)而著色的原理，對(duì)某種成分進(jìn)行定性或定位研究的技術(shù)。利用這種方法對(duì)細(xì)胞的各種成分幾乎都能顯示，包括有機(jī)物、醛、蛋白質(zhì)、糖類(lèi)、脂類(lèi)、核酸、酶等?，F(xiàn)在是53頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三1.固定物理固定：血膜空氣快速干燥、冷凍干燥。化學(xué)固定：如甲醇、乙醇、丙酮、甲醛、戊二醛和鋨酸等試劑。顯示多糖常用乙醇固定，顯示酶類(lèi)多用甲醛丙酮緩沖液固定。

步驟：現(xiàn)在是54頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三2.顯示方法金屬沉淀法：如磷酸酶分解磷酸酯底物后，反應(yīng)產(chǎn)物最終生成CuS或PbS有色沉淀，而顯示出酶活性。Schiff反應(yīng)：細(xì)胞中的醛基可使Schiff試劑中的無(wú)色品紅變?yōu)榧t色。用于顯示糖和脫氧核糖核酸（Feulgen反應(yīng)）。聯(lián)苯胺反應(yīng)：過(guò)氧化酶分解H202。產(chǎn)生新生氧，后者再將無(wú)色聯(lián)苯胺氧化成聯(lián)苯胺藍(lán)，進(jìn)而變成棕色化合物。脂溶染色法：借蘇丹染料溶于脂類(lèi)而使脂類(lèi)顯色。茚三酮反應(yīng)：顯示蛋白質(zhì)?，F(xiàn)在是55頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三金屬沉淀法Schiff反應(yīng)聯(lián)苯胺反應(yīng)脂溶染色法現(xiàn)在是56頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三E.茚三酮反應(yīng)：顯示蛋白質(zhì)。F.米倫（Millon）染色：顯示蛋白質(zhì)（紅色）酪氨酸殘基與氮汞試劑反應(yīng)現(xiàn)在是57頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三三、特異蛋白抗原的定位和定性1.免疫熒光技術(shù)Immunofluorescencetechnique：抗原-抗體特異結(jié)合與熒光標(biāo)記技術(shù)相結(jié)合用于研究特異蛋白抗原在細(xì)胞內(nèi)分布的方法。用Alexa488標(biāo)記的抗人α-tubulin抗體染色顯示微管(綠色);細(xì)胞核:紅色,DAPI染色(常規(guī)熒光顯微鏡照片，ShiQinghua等)現(xiàn)在是58頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三用抗α-tubulin抗體染色顯示微管(綠色);細(xì)胞核:紅色,DAPI染色(激光共聚焦顯微鏡照片)現(xiàn)在是59頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三2.免疫電鏡技術(shù)Immuneelectronmicroscopy：通過(guò)對(duì)分泌蛋白的定位，可以確定某種蛋白的分泌動(dòng)態(tài)；胞內(nèi)酶的研究；膜蛋白的定位與骨架蛋白的定位等用免疫電鏡方法,觀察到寇氏隱甲藻的多條凝集染色體和細(xì)胞中的金顆粒,并且細(xì)胞核內(nèi)、核膜上的金顆粒簇集相對(duì)于胞質(zhì)中相對(duì)集中,指示了ACA抗CJFD2003

現(xiàn)在是60頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三四、細(xì)胞內(nèi)特異核酸序列的定位與定性通常用*原位雜交：指用標(biāo)記的核酸探針通過(guò)分子雜交確定特異核苷酸序列在染色體上或者在細(xì)胞中的位置的方法?，F(xiàn)在是61頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三五、放射自顯影術(shù)用于研究標(biāo)記化合物在機(jī)體、組織和細(xì)胞中的分布、定位、排出以及合成、更新、作用機(jī)理、作用部位等等。原理：將放射性同位素標(biāo)記的化合物導(dǎo)入生物體內(nèi)，經(jīng)過(guò)一段時(shí)間后，制取切片，涂上鹵化銀乳膠，經(jīng)放射性曝光，使乳膠感光。一般用14C和3H標(biāo)記。常用3H-TDR來(lái)顯示DNA，用3H-UDR顯示RNA；用3H氨基酸研究蛋白質(zhì)，用3H甘露糖、3H巖藻糖研究多糖。14C半衰期為5730年，3H為12.5年。現(xiàn)在是62頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三1.流式細(xì)胞技術(shù)用途：對(duì)單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行快速定量分析與分選的一門(mén)技術(shù)。原理：包在鞘液中的細(xì)胞通過(guò)高頻振蕩控制的噴嘴，形成包含單個(gè)細(xì)胞的液滴，在激光束的照射下，這些細(xì)胞發(fā)出散射光和熒光，經(jīng)探測(cè)器檢測(cè)，轉(zhuǎn)換為電信號(hào)，送入計(jì)算機(jī)處理，輸出統(tǒng)計(jì)結(jié)果，并可根據(jù)這些性質(zhì)分選出高純度的細(xì)胞亞群，分離純度可達(dá)99%。包被細(xì)胞的液流稱(chēng)為鞘液，所用儀器稱(chēng)為流式細(xì)胞計(jì)（flowcytometer）。六、定量細(xì)胞化學(xué)分析技術(shù)現(xiàn)在是63頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三現(xiàn)在是64頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三2.顯微光譜分析技術(shù)細(xì)胞中有一些成分具有特定的吸收光譜，核酸、蛋白質(zhì)、細(xì)胞色素、維生素等都有自己特征性的吸收曲線?？衫蔑@微分光光度計(jì)對(duì)某些成分進(jìn)行定位、定性和定量測(cè)定?，F(xiàn)在是65頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三第三節(jié)細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞工程與顯微操作技術(shù)一、細(xì)胞培養(yǎng)二、細(xì)胞工程現(xiàn)在是66頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三一、細(xì)胞培養(yǎng)(一)、細(xì)胞培養(yǎng)的基本概念(二)、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)(三)、植物細(xì)胞培養(yǎng)(四)非細(xì)胞體系在細(xì)胞生物學(xué)研究的作用現(xiàn)在是67頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三(一)、細(xì)胞培養(yǎng)的基本概念選用最佳生存條件對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)和研究的技術(shù)。動(dòng)物細(xì)胞的生存環(huán)境與植物細(xì)胞差別很大，因而二者的培養(yǎng)方法很不相同?，F(xiàn)在是68頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三(二)、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)1.基本概念原代細(xì)胞(primaryculturecell)

從動(dòng)物機(jī)體取出的進(jìn)行培養(yǎng)的細(xì)胞群。有人也把培養(yǎng)的第2代細(xì)胞與傳10代以?xún)?nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱(chēng)為原代培養(yǎng)細(xì)胞。有限細(xì)胞系(finitecellline)從原代細(xì)胞群中篩選出的仍保持原來(lái)染色體的二倍體數(shù)量及接觸抑制性，能夠繁殖40-50代左右的傳代細(xì)胞?，F(xiàn)在是69頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三永生細(xì)胞系(infinitecellline)

細(xì)胞發(fā)生遺傳突變，并帶有癌細(xì)胞的特點(diǎn)，可能在培養(yǎng)條件下無(wú)限制地傳代下去，這種傳代細(xì)胞稱(chēng)為永生細(xì)胞系。如：HeLa細(xì)胞系、BHK21細(xì)胞系、Vero細(xì)胞系、CHO細(xì)胞系細(xì)胞株：具有特殊遺傳標(biāo)記或性質(zhì)的細(xì)胞群體。現(xiàn)在是70頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三（二）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)2.體外培養(yǎng)細(xì)胞的類(lèi)型：原代培養(yǎng)細(xì)胞傳代細(xì)胞：適應(yīng)在體外持續(xù)傳代培養(yǎng)的細(xì)胞3.細(xì)胞培養(yǎng)的類(lèi)型單層細(xì)胞培養(yǎng)懸浮培養(yǎng)4.細(xì)胞的形態(tài)：成纖維樣細(xì)胞、上皮樣細(xì)胞現(xiàn)在是71頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三原代培養(yǎng)現(xiàn)在是72頁(yè)\一共有83頁(yè)\編輯于星期三（二）植物細(xì)胞培養(yǎng)植物細(xì)胞培養(yǎng)主要有如下幾種技術(shù)：原生質(zhì)體培養(yǎng)單倍體細(xì)胞