原生質(zhì)Protoplasts是有組織的生活物質(zhì)是細(xì)胞生命活動的物質(zhì)基礎(chǔ)全部的原生質(zhì)有相像的基本組成成分和特性原生質(zhì)體是由原生質(zhì)特化而來細(xì)胞內(nèi)由原生質(zhì)組成的各種結(jié)構(gòu)統(tǒng)稱為原生質(zhì)體它們彼此聯(lián)系相互影響而構(gòu)成一個有機(jī)整體擔(dān)負(fù)著細(xì)胞的全部生命活動【1】。[1]R.V.Muralidhar;T.Panda.Fungalprotoplastfusion.BioprocessEngineering,2000,22:429-431原生質(zhì)體技術(shù)的關(guān)鍵是對細(xì)胞壁進(jìn)行消化以形成大量的原生質(zhì)體并使原生質(zhì)體能高頻率的再生細(xì)胞壁回復(fù)到正常細(xì)胞狀態(tài)當(dāng)細(xì)胞壁去除后原生質(zhì)體具有以下特征一是無細(xì)胞壁障礙可對膜和細(xì)胞器進(jìn)行基礎(chǔ)討論同時可進(jìn)行遺傳操作二是具有全能性能在人工條件掌握下進(jìn)行大量快速繁殖三是可誘導(dǎo)融合形成雜種細(xì)胞為體細(xì)胞雜交供應(yīng)試驗材料⑵，因此原生質(zhì)體技術(shù)無論在理論上或?qū)嵺`上都日益受到重視[2]林學(xué)政，沈繼紅,李光友.海藻原生質(zhì)體融合及雜交技術(shù)的討論進(jìn)展.海洋科^,2000,24(8):1-3人們曾探究使用研磨等機(jī)械方法和超聲波等物理方法來制備原生質(zhì)體效果都不抱負(fù)目前制備原生質(zhì)體大都是采用酶解法脫去細(xì)胞壁原生質(zhì)體技術(shù)作為基因工程的手段之，它可以直接作為外源DNA的導(dǎo)入、質(zhì)粒轉(zhuǎn)移、病毒傳遞等的受體以表達(dá)外源基因，具有無比的優(yōu)越性。近年來，與人類健康有親密關(guān)系的生理菌一乳桿菌在分子生物學(xué)領(lǐng)域的討論相對滯后，在國內(nèi)尤其如此。本討論旨在通過對保加利亞乳桿菌原生質(zhì)體的制備與回復(fù)的研討，為乳桿菌的基因工程方面的討論供應(yīng)技術(shù)條件和試驗基礎(chǔ)。原生質(zhì)體技術(shù)包括原生質(zhì)體誘變、融合、轉(zhuǎn)化等多項內(nèi)容，在菌種特性改良和提高產(chǎn)量等方面取得了一系列成果⑶陳勁春，尉渤，潘乃燧.原生質(zhì)體技術(shù)在工業(yè)微生物育種中的應(yīng)用［JJ.工業(yè)微生物，1997,27(4):34—36.原生質(zhì)體制備和再生是各項原生質(zhì)體技術(shù)得以應(yīng)用的基礎(chǔ)和前提。各種微生物細(xì)胞壁的組成和結(jié)構(gòu)不同，因而不同菌種原生質(zhì)體制備和再生的條件也不相同⑷5】。［4］孫劍秋，周東坡.微生物原生質(zhì)體技術(shù)口】.生物學(xué)通報,2002,37(7):9—11..5,周東坡，平文祥.微生物原生質(zhì)體融合【M】.哈爾濱：黑龍江科學(xué)技術(shù)出版杜.1990.本試驗討論了影響納豆菌原生質(zhì)體制備和再生的諸多因素，并確定了最佳條件，為進(jìn)一步選育優(yōu)良菌種和納豆菌生物學(xué)功能的開發(fā)奠定了基礎(chǔ)。目前，針對納豆菌的原生質(zhì)體制備和再生，國內(nèi)外尚未見有相關(guān)報道摘要目的：通過刈保加利亞乳桿菌的生質(zhì)體的制備和回復(fù)的方法學(xué)研討，為乳桿菌的基因操作和其相關(guān)討論供應(yīng)技術(shù)思路和試驗條件.方法：用酶濃度分別為Ifg/nil.4g/I11L10Fg/nilMutanolysin(變?nèi)芫?對保加利亞乳桿菌進(jìn)行處理，脫去細(xì)胞壁以研討其原生質(zhì)體形成與時間和酶濃度的關(guān)系；并選用較為相宜的酶濃度制備其原生質(zhì)體，在自制的雙層再生培育基上觀看其原生質(zhì)體在一般培育、COe培育、厭氧培育時的回復(fù)生長狀況結(jié)果：保加利亞乳桿菌對Mu［anolysin較敏感，酶濃度為Ig/nil時只需40min大部分菌體形成原生質(zhì)體.經(jīng)Ip.g/mlMutanolysii3處理后制得的保加利亞乳桿菌原生質(zhì)體傾人自制的雙層再生培育基中，置于co,和厭氧環(huán)境條件下培育能很好的回復(fù)生長。結(jié)論：本文的討論為乳桿菌的基因工程方面的討論供應(yīng)了卡日關(guān)的技術(shù)條件和試驗基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞：保加利亞乳桿菌；原生質(zhì)體；制備；再生中圖分類號：Q939文獻(xiàn)標(biāo)識碼：AStudiesofprotoplastsformationandregenerationinLactobacillusbulgar&usZHANGLibyan.CHEIin.ZHAGDe—chun(GuangdongProzrin~'ia/People1SHospital,(;uangzkou510080,China)Abstract:Objective:Thetechniqueofthisarticlecouldprovideacorrespondingmethodologytogeneticengi—neerofLJLcillus.Methods:Fheprcx.tuctionofLzwt{?acillusbulgaricusofprotoplastsWaSperfomledlyticen—zymescontainingI/xg/mls4/Ig/ml、10tig/mlMutanolysinrmpectively.Wealsoinvestigatedregenerationofpro—toplaStsofLobacillusbulKari~HSindifferentcultureenviromnentsResults:Theresultsobtainedinthestudyindicatedthatprotoplastsfommtionin?c(cillusbu:garicushavebeenSuccessfullyperformedbyusingMu一tanolysin.Moreoverztherateofregenerationofprotoplasts"washighwhenitwereculturedinaandanaerobicconditionsbydouble-layerregenerationreedium