基因治療行業(yè)發(fā)展概況

基因治療行業(yè)發(fā)展概況（一）基因治療概念基因治療也稱為細胞和基因治療（CellandGeneTherapy，簡稱CGT，不包括未經(jīng)基因修飾的干細胞等廣義的細胞療法），是一種利用基因治療載體將外源的治療性基因轉導至細胞，再通過外源基因的轉錄和翻譯，改變細胞原有基因表達以治療疾病的方法。其作用方式一般包括：①用正常基因替代致病基因；②使致病基因失活；③導入新的或經(jīng)過改造的基因?；蛑委熕幬镏饕ɑ蛑委熭d體產(chǎn)品、基因修飾的細胞產(chǎn)品，以及具有特定功能的溶瘤病毒產(chǎn)品。目前臨床試驗階段的基因治療產(chǎn)品主要針對惡性腫瘤、罕見遺傳性疾病等適應癥。（二）基因治療優(yōu)勢1、基因治療為難治性疾病治療提供新選擇CGT療法為某些傳統(tǒng)療法無效且難治的疾病提供了新的治療選擇。以急性淋巴細胞白血?。ˋLL）為例，ALL是一種起源于T系淋巴祖細胞的惡性腫瘤性疾病，原始細胞在骨髓異常增生聚集并抑制正常造血，導致貧血、血小板減少和中性粒細胞減少；原始細胞也可侵及髓外組織，引起相應病變。化療通常是ALL的第一步，旨在迅速、最大限度殺傷白血病細胞，恢復骨髓正常造血功能。目前，聯(lián)合化療方案是治療ALL的主要方法之一，盡管多數(shù)患者可以達到較好治療效果，但仍有少部分患者化療無效或化療后復發(fā)患者。一般而言，對于復發(fā)難治性ALL患者缺乏治療手段。2017年，F(xiàn)DA批準了諾華研發(fā)的藥物Kymriah，成為全球首個獲批的CAR-T產(chǎn)品，用于治療難治或復發(fā)性B細胞前體急性淋巴細胞白血病，為化療無效或復發(fā)的患者提供了新的治療選擇。2、基因治療從根源治療疾病，單次治療帶來長期療效在生物體內，遺傳信息的標準傳遞通常沿著DNA→RNA→蛋白質而逐級傳遞。基因表達的產(chǎn)物通常是蛋白質，大多數(shù)疾病發(fā)生時也多表現(xiàn)為蛋白質水平的異常。傳統(tǒng)化藥和大分子抗體藥物旨在通過調節(jié)蛋白質的功能來治療疾病，但CGT療法往往直接靶向DNA，通過對DNA的調控來改變蛋白質的性狀，實現(xiàn)從源頭上對疾病的治療，這使得徹底根治遺傳性疾病成為可能。從根源治療疾病也能實現(xiàn)單次治療帶來的長期療效。3、基因治療獨特作用機制促成研發(fā)優(yōu)勢不同于傳統(tǒng)小分子藥物和抗體藥物在蛋白質水平進行調控，CGT直接靶向DNA并發(fā)揮作用，因此對于致病基因清晰而蛋白質水平難以成藥的靶點具有獨特優(yōu)勢，例如在頭頸鱗癌、結直腸癌和胰腺癌等許多惡性腫瘤中KRAS基因突變比例較高，但因KRAS表面光滑，完全位于胞內、與底物親和力高、不同亞型同源性高等特征，導致靶向KRAS的藥物進展緩慢，而對KRAS基因突變位點的研究將可以解決KRAS蛋白難以成藥這一難題。此外，核酸序列的設計與合成相對于傳統(tǒng)小分子藥物和抗體藥物難度較小，在開發(fā)出安全高效的如載體優(yōu)化遞送系統(tǒng)之后，CGT開發(fā)難度降低，研發(fā)成功率更高。（三）基因治療發(fā)展歷史基因治療與分子生物學、基因組學和基因編輯技術等基礎科學的發(fā)展關聯(lián)十分密切。自1953年DNA雙螺旋結構模型提出后，相關理論研究和技術取得了巨大進步，為基因的研究及應用奠定了基礎。1972年，F(xiàn)riedmann和Roblin首次提出基因治療的概念；2003年，全球首個基因治療藥物重組人p53腺病毒注射液（商品名：今又生/Gendicine）在中國獲批；2005年，由腺病毒改造而來的溶瘤病毒治療產(chǎn)品安柯瑞（Oncorine）在中國獲批；2012年，基于AAV的基因治療藥物Glybera獲EMA批準；2015年，Amgen的黑色素瘤治療藥物Imlygic成為FDA和EMA批準的首款溶瘤病毒治療產(chǎn)品。2017年，美國SparkTherapeutics的基因療法Luxturna獲批，成為FDA批準的首款基于AAV的基因療法；2017年，諾華的Kymriah成為全球首個獲FDA批準的CAR-T產(chǎn)品；2017年至今，Yescarta、Tecartus、Breyanzi以及Abecma等多款藥物獲FDA批準。NMPA亦于2021年6月和9月批準中國首款CAR-T產(chǎn)品奕凱達?，以及中國首個1類新藥CAR-T產(chǎn)品倍諾達?。2022年6月，美國基因治療企業(yè)KrystalBiotech向FDA遞交了全球首個以HSV-1為載體的非溶瘤病毒類基因治療產(chǎn)品VYJUVEKTM（KB103，bercolagenetelserpavec/B-vec）的生物制品許可申請，用于治療營養(yǎng)不良型大皰性表皮松解癥，該產(chǎn)品此前已獲得FDA授予的再生醫(yī)學先進療法資格、快速通道資格和孤兒藥資格以及歐洲EMA授予的快速審批和孤兒藥資格。其Ⅲ期臨床試驗結果顯示，在治療6個月時，與安慰劑相比（22%），67%的KB103組受試者創(chuàng)口完全愈合；在治療3個月時，與安慰劑相比（20%），71%的KB103組受試者創(chuàng)口完全愈合；安全性方面，局部注射耐受性良好，大多數(shù)不良事件為輕度或重度，無藥物相關的嚴重不良事件。2022年8月FDA已受理該申請。近年來，隨著基礎生命科學和前沿生物科技進步，全球創(chuàng)新藥行業(yè)的發(fā)展逐步達到新的臨界點。以基因療法為代表的新一代精準醫(yī)療快速興起，發(fā)展趨勢明晰，對以小分子和大分子藥物為主的創(chuàng)新藥市場起到了重要的補充、迭代和開拓作用。近年來，部分重要的基因治療藥物已納入美國、英國和日本等多個發(fā)達國家的醫(yī)保體系。如同小分子藥物和抗體藥物引領生物醫(yī)藥的前兩次產(chǎn)業(yè)變革，基因治療將引領生物醫(yī)藥的第三次產(chǎn)業(yè)變革?；蛑委熜袠I(yè)產(chǎn)業(yè)鏈分析基因治療產(chǎn)業(yè)鏈可分為上游，中游和下游。上游是病毒載體的生產(chǎn)廠商。病毒載體的生產(chǎn)步驟包括：目的基因制備，病毒載體構建，重組病毒培養(yǎng)，重組病毒純化，質量控制等環(huán)節(jié)，各環(huán)節(jié)涉及多種設備及試劑耗材。中游是基因治療的制藥企業(yè)，包括基因增補，基因編輯兩類藥企。下游則是各類罕見病/遺傳病患者。包括2型先天性黑蒙癥（LCA），脊髓性肌肉萎縮癥（SMA），β-地中海貧血（TDT），A/B型血友病，遺傳性視網(wǎng)膜病變等?；蛑委熜袠I(yè)中國市場未來發(fā)展方向目前，基因治療主要針對罕見病與腫瘤治療。此后，基因治療也將逐漸向其他疾病擴展適應癥。例如，2020年2月，基因治療公司Genprex宣布與匹茲堡大學達成一項糖尿病基因治療技術的獨家許可協(xié)議，將對胰腺細胞進行重新編程，以恢復其補充胰島素的功能，從而治療1型和2型糖尿病。目前糖尿病尚無根治的治療手段，主要干預方式依然是注射胰島素以控制血糖水平。如果這一細胞和基因治療產(chǎn)品能夠研發(fā)成功，將對糖尿病的治療及慢性病領域產(chǎn)生重大影響。隨著基因治療研究的深入，未來的療法將不再局限于處理人類基因組中的單個基因缺陷，構建合適的載體獲得多個外源基因的高效轉移與表達將對存在多個基因缺陷的疾病有重大意義。目前，應用最為廣泛的載體當屬腺相關病毒載體、慢病毒載體等。近年來，溶瘤病毒作為免疫療法的新生力量，引起廣泛關注，其相關研究也取得巨大進展，皰疹病毒、痘病毒、腺病毒成為目前研究較多的溶瘤病毒毒株。隨著基因治療研發(fā)的深入，病毒載體將更為多樣化，不斷提高導入效率以及安全穩(wěn)定性。此外，非病毒載體例如裸露DNA、脂質體、納米載體等因具有成本低、制備簡單、便于大規(guī)模生產(chǎn)、安全性高、外源基因長度不受限制等優(yōu)點也將成為重要研發(fā)領域。CDMO企業(yè)多樣化的服務內容和積累的基因治療基礎研究與開發(fā)改造經(jīng)驗可以為基因治療企業(yè)提供包括細胞與載體選擇與優(yōu)化服務、細胞系與載體構建和病毒包裝服務、質量檢測服務、臨床階段小規(guī)模生產(chǎn)服務以及后期商業(yè)化生產(chǎn)服務，節(jié)省研發(fā)成本和時間，提高成功率。相關研發(fā)生產(chǎn)平臺齊全，可提供多樣化的選擇，并減少藥企試錯成本；專業(yè)的QA/QC人員和全過程的嚴格監(jiān)管，可確保滿足載體生產(chǎn)符合國家GMP質量標準。此外，一些CGTCDMO公司還可提供一站式新藥臨床試驗申請（IND）和新藥上市申請（NDA）等法規(guī)相關服務，進一步幫助藥企加快研發(fā)進度。因此，基因治療產(chǎn)業(yè)發(fā)展將帶動CDMO的市場規(guī)模不斷擴張。基因治療對于罕見病和惡性腫瘤的治療效果以及近年來醫(yī)保對于基因治療支付的積極探索，促進基因治療商業(yè)化進展。以治療SMA的Zolgensma為例，盡管其價格高昂，但在2019年獲批后成為SMA的重磅療法，美國商業(yè)保險機構Cigna對其全額藥價覆蓋，2020年銷售額達到9億美元。面臨高昂價格的爭議，CGT企業(yè)積極與各國政府及醫(yī)保體系進行基于價值的多元化支付模式探索。這些支付模式的探索為CGT商業(yè)化逐步鋪平道路，預計未來對于基因治療多元化的創(chuàng)新支付模式將惠及更多患者?，F(xiàn)已有CGT產(chǎn)品例如CAR-T細胞治療已經(jīng)取得臨床成功，未來有著巨大的市場潛力，將持續(xù)成為熱點研發(fā)方向。研發(fā)人員在進一步優(yōu)化技術與臨床療效的同時，也在降低研發(fā)及治療的成本。未來病毒載體優(yōu)化及生產(chǎn)、CAR-T細胞等技術的逐漸成熟將帶來成本的下降，基因治療將擴展應用到更多患者治療中?；蛑委熜袠I(yè)上游上游是病毒載體的生產(chǎn)廠商。病毒載體的生產(chǎn)步驟包括：目的基因制備，病毒載體構建，重組病毒培養(yǎng)，重組病毒純化（層析&過濾等），質量控制等環(huán)節(jié)，各環(huán)節(jié)涉及多種設備及試劑耗材。海外企業(yè)例如賽默飛，思拓凡等基本覆蓋了病毒載體生產(chǎn)的全流程，我國基因治療產(chǎn)業(yè)發(fā)展時間較短，但發(fā)展速度快，企業(yè)創(chuàng)新活躍度不斷加強，整體產(chǎn)業(yè)鏈完整度不高，目前產(chǎn)品多集中在中游藥物研發(fā)領域創(chuàng)新，對產(chǎn)業(yè)鏈上游的核心把控不強。國內企業(yè)在各環(huán)節(jié)上有所側重，例如主營病毒載體構建的企業(yè)包括和元生物，藥明生基，金斯瑞，諾唯贊等，重組病毒培養(yǎng)與純化的企業(yè)包括宜明細胞等。上游的難點不僅僅在于基因開發(fā)，病毒載體的生產(chǎn)面臨諸多工藝壁壘及人才壁壘。病毒載體生產(chǎn)的上游（USP）難點包括：質粒是AAV的主要成本來源，如何減少瞬時轉染所需的質粒數(shù)量以及提高轉染效率；如何提高細胞培養(yǎng)密度，擴大產(chǎn)能。下游（DSP）主要難點在層析純化環(huán)節(jié)，目前病毒載體DSP整體收率僅20-30%，難點在于USP中存在的空殼病毒（不含有治療基因但會引起免疫反應），如何降低空殼率。正是由于病毒載體的工藝開發(fā)難度大，國內具備良好病毒經(jīng)驗、工藝背景和豐富生產(chǎn)管理經(jīng)驗的復合型人才極度稀缺。病毒載體的生產(chǎn)有很高的資金壁壘。CGTCDMO需重資產(chǎn)投入（數(shù)億美元），才能建立符合cGMP標準的廠房及設備。病毒載體生產(chǎn)的各環(huán)節(jié)需要的各類設備及試劑耗材，設備包括生物反應器，離心機，層析柱等，試劑耗材包括質粒、培養(yǎng)基、HEK293細胞等。我國基因治療上游產(chǎn)業(yè)鏈環(huán)節(jié)創(chuàng)新較弱，雖有上海和元、北京五加和等基因治療載體研發(fā)企業(yè)實現(xiàn)創(chuàng)新突破。然而，病毒載體生產(chǎn)所需的設備和試劑耗材基本依靠進口（這和其他IVD領域以及細胞治療領域面臨著同樣的難題），成本更為高昂?；蛑委煵糠炙幬锷鲜袣v史2003年中國國家食品藥品管理局（SFDA）批準一種重組腺病毒載體表達p53治療頭頸癌的基因療法藥物今又生（Gendicine）。今又生被認為是第一款商品化的基因治療藥物。2005年SFDA批準用于治療鼻咽癌的第一款溶瘤病毒藥物Oncorine（重組人5型腺病毒注射液H101）。遲疑和懷疑伴隨著Gendicine和Oncorine的使用，但是來自中國的這兩款基因治療藥物仍然獲得世界的認可。此后數(shù)年內歐美和中國都無基因治療產(chǎn)品獲批，直至2012年EMA批準首款基因療法Glybera，開啟基因治療的元年?；蛑委熜袠I(yè)概念基因支持著生命的基本構造和性能。其有兩個重要的屬性，一個是基因的物質性，另一個重要屬性是信息性，信息的屬性離不開傳遞，而一旦傳遞中途發(fā)生變故，誤差的基因會導致生物體不能適應環(huán)境或者導致自身的毀壞?；蛑委煟╣enetherapy）實際上就是DNA分子中核苷酸種類、數(shù)量和順序的改變，導致遺傳信息的改變而致病。由于癌變及遺傳性疾病等是因體內某種基因缺乏、缺陷或突變引起的，因此對這種基因進行替代、修復和增補，就能治療這些疾病，從而控制這些疾病的發(fā)生，故稱基因治療?；蛑委熓侵笇⒄５幕蛘哂兄委熥饔玫耐庠椿虿迦氲桨屑毎?，修復靶細胞中有缺陷的基因，或者替代有缺陷的基因，從而達到治療疾病目的的生物醫(yī)學技術?；蛑委煻x有廣義和狹義之分，狹義的概念是指用具有正常功能的基因置換或增補患者體內有缺陷的基因，從而達到治療的目的。廣義的概念指把某些遺傳物質轉移到患者體內，使其在患者體內表達，最終達到治療某種疾病的方法。隨著科學家對遺傳物質的作用機理的了解，科學家開始考慮如何人為干預遺傳和表達的過程，基于基因技術發(fā)展，現(xiàn)已可以在分子水平對基因進行改造和修正。常規(guī)治療一般是針對基因異常而導致的各種癥狀，治標不治本，而基因治療是針對遺傳疾病的根源-異常的基因本身，基因的異常是遺傳疾病的本質，將異常的基因修正，或者用正?；蛉〈腥毕莸幕?，那么外在的癥狀也將迎刃而解。目前，基因治療根據(jù)治療途徑可以分為體外基因治療和體內基因治療。具體表現(xiàn)為基因增補和基因編輯?；蛟鲅a：利用遞送載體，將外源基因導入病變細胞，其表達產(chǎn)物能修飾缺陷細胞的功能或加強原有功能?；蚴桥c相應的基因結合，影響原有基因的功能。是目前獲批上市和臨床在研階段產(chǎn)品中，最主要的基因療法技術路徑?；蚓庉嫞壕_修飾特定目標基因，從而破壞有害基因或修復變異基因，包括ZFNs，TALEN以及2020年獲諾貝爾化學獎的CRISPR/Cas9技術。以CRISPR/Cas9技術為例，Cas9蛋白在sgRNA的導向下，通過堿基互補配對，到達不同的靶部位，通過切割靶基因，對目標基因進行定點精確編輯，從而實現(xiàn)對患者原有基因組錯誤基因的改變與修正?；蚓庉嬒到y(tǒng)向臨床的轉化正處于早期階段，目前尚無產(chǎn)品上市?；蛑委熜袠I(yè)編輯技術定向精準，功能強大前述已經(jīng)介紹基因編輯技術的技術路徑以及發(fā)展歷程。目前，在基因編輯領域，研發(fā)管線集中于CRISPR/Cas9技術。CRISPR/Cas9的三位發(fā)明者奠定其成為基因編輯領域三巨頭的基礎，EmmanuelleCharpentier教授，JenniferDoudna教授，以及張鋒教授，分別創(chuàng)立全球領先的基因編輯公司CRISPR，Intellia，Editas。國內基因編輯管線整體仍處于臨床早期階段。進展最快的是博雅輯因的體外療法ET-01，處于臨床1期，體外療法還有瑞風生物的RM001。體內療法包括本導基因的BD111，北京中因的ZVS203e，以及輝大基因的HG-203。博雅輯因的ET-01產(chǎn)品用于治療輸血依賴性β地中海貧血癥（TDT）?；蛑委熜袠I(yè)市場情況前述提及基因治療，基因治療包括基因增補和基因編輯兩大技術路徑。目前，基因增補技術相對成熟，已有數(shù)款產(chǎn)品獲FDA/EMA批準上市，為罕見病患者的治療提供希望，在研管線也非常豐富，海外不少產(chǎn)品已進入擬上市/上市申請或臨床后期階段。基因編輯，作為定向精準且功能更為強大的技術，目前向臨床的轉化大多處于早期階段，尚無產(chǎn)品上市，但多個臨床試驗正在進行中，且臨床效果良好。Gendicine被認為是第一款商品化的基因治療藥物，由深圳市賽百諾公司研發(fā)，主要用于治療頭頸部鱗狀細胞癌，是全球首個抗腫瘤基因治療產(chǎn)品。通過攜帶有野生型p53基因的重組復制缺陷型人5型腺病毒，可通過表達抑癌基因p53，刺激機體產(chǎn)生特異性抗腫瘤免疫反應，上調多種抗癌基因和下調多種癌基因活性，從而增強抑癌作用，特異地引起腫瘤細胞程序性死亡，從而實現(xiàn)殺傷腫瘤的目的。目前，全球獲批的基因治療產(chǎn)品達到20余種，市場價格高昂，藍鳥公司的基因療法Zynteglo（定價210萬美元），諾華公司的Zolgensma更是開出高達280萬美元的價格，我國已上市的CAR-T產(chǎn)品定價分別是120萬（益基利侖賽注射液）與129萬人民幣（基奧侖賽注射液），但為罕見和遺傳性疾病以及無法治愈疾病帶來巨大的希望。從2012年至2021年，F(xiàn)DA批準2款產(chǎn)品，EMA批準6款產(chǎn)品（2款是FDA先批準）。FDA批準的2款產(chǎn)品，均基于腺相關病毒AAV載體。2017年批準的Spark公司的Luxturna產(chǎn)品，用于治療雙等位RPE65基因突變導致的2型先天性黑蒙癥LCA，以及2019年批準的諾華的Zolgensma產(chǎn)品，用于治療2歲以下的脊髓性肌肉萎縮癥SMA。EMA批準了6款產(chǎn)品。除FDA率先批準的上述兩款產(chǎn)品，還有2012批準的uniQure公司的Glybera產(chǎn)品，也是基于AAV載體，是EMA批準的首款基因治療產(chǎn)品，用于治療脂蛋白脂肪酶缺乏癥LPLD。目前海外基因增補產(chǎn)品的在研管線豐富。2022年即將有3款擬上市產(chǎn)品，以及6款擬提交上市申請BLA的產(chǎn)品，以及十幾款已經(jīng)進入臨床3期的在研管線?？v觀海外基因增補技術的在研管線，產(chǎn)品以體內基因治療為主，且基于AAV載體；體外治療大多基于LV載體。國內基因增補管線整體進展較慢，多處于臨床1期，適應癥集中于眼科遺傳病和血友病。縱觀國內基因增補技術的在研管線，產(chǎn)品基本為體內途徑，且基于AAV載體，僅本導基因基于LV平臺有相關管線。數(shù)家國內研發(fā)藥企的管線獲得FDA的孤兒藥認定（ODD），包括紐福斯生物的NR082用于治療Leber遺傳性視神經(jīng)病變，天澤云泰的VGB-R04用于治療先天性凝血因子IX缺乏引起的血友病B，北京中因的ZVS101e用于治療結晶樣視網(wǎng)膜色素變性?；蛑委熜袠I(yè)技術路徑與機制基因編輯技術主要經(jīng)歷了三代發(fā)展，從重組核酸酶介導的技術向以RNA引導的基因編輯技術發(fā)展，成本逐步降低，周期縮短，靶向修飾效率不斷提高。ZFNs技術是第一代基因組編輯技術，是由天然DNA轉錄因子衍生而來，其功能實現(xiàn)基于特異性識別DNA的鋅指蛋白（ZFP）和FokI內切酶的核酸酶結構域組成。每個鋅指蛋白可識別3個堿基序列，研究者可通過鋅指蛋白的排列組合進行不同靶向指定編輯。通常使用的鋅指蛋白篩選手段是噬菌體展示，以達到高通量篩選的目的。從2001年開始，ZFN開始被陸續(xù)用于不同物種的基因編輯。但是由于技術研發(fā)成本較高、專利壟斷嚴重，造成以技術平臺發(fā)展緩慢，直接導致應用和普及的滯后。特別是在第二、第三代基因編輯技術被開發(fā)出來之后，鋅指蛋白的研究和臨床使用頻率大為減少。TALENs是與ZFNs結構類似但更加靈活和高效的第二代靶向編輯技術，核心蛋白由AvrBs3蛋白衍生而來。與ZFNs不同的是，該技術使用兩個氨基酸組合來識別單個堿基序列，從而大大減少ZFNs容易脫靶的問題。得益于其低脫靶率，TALEN技術常被細胞治療平臺用于體外細胞堿基的編輯，特別是在嵌合抗原受體T細胞治療平臺開發(fā)中?？墒且廊桓甙旱难邪l(fā)費用限制該技術的大規(guī)模應用。CRISPR/Cas技術是基于原核生物抵御外來病毒及質粒DNA的一種適應性免疫系統(tǒng)開發(fā)而來的第三代基因編輯技術。通過人工設計的sgRNA（guideRNA）來識別目的基因組序列，并引導Cas蛋白酶進行有效切割DNA雙鏈，最終達到對基因組DNA進行修飾的目的。其中Cas9蛋白和Cpf1蛋白是最為常用的蛋白酶。作為當今最為廣泛使用的基因編輯技術，CRISPR/Cas平臺有著ZFNs和TALENs無法匹敵的低價格、高靈活性、多靶向等優(yōu)勢。這些優(yōu)勢促使該產(chǎn)品從科研到臨床的快速轉化。當今，CRISPR/Cas技術廣泛應用于體外分子診斷、基因標記、單堿基編輯等領域。以CrisprTherapeutics和EditasMedicine為代表的一大批新型醫(yī)藥公司正在傳染病、罕見病癌癥等領域進行大量基于此技術的臨床試驗。CRISPR/Cas作為革命性的基因編輯技術，優(yōu)勢明顯；相較于ZFNs和TALENs，CRISPR/Cas的開發(fā)周期更短，成本較低，靶向效率更高：①低廉的開發(fā)價格、較短的開發(fā)周期、簡便的開發(fā)過程加速了基因編輯技術的迭代，促成CRIPSR/Cas技術的廣泛使用。②簡易的多重編輯、高靶向效率使CRIPSR/Cas成為基因工程研究的加速器，為臨床轉化奠定基礎。自2012首次應用以來，CRIPSR/Cas已然成為基因編輯在科研和臨床應用上的不二選擇。除常見的遺傳疾病領域的應用，CRISPR/Cas也在其他疾病領域有豐富的在研臨床試驗。CRISPR/Cas可編輯線粒體DNA、胚胎和RNA，在表觀遺傳標記和基因阻截中也有廣泛應用。基因增補目前的技術路徑主要通過各類載體的遞送?；蛟鲅a過程主要為將正常功能的基因片段插入到異常的細胞中。目前基因增補手段主要依賴核酸藥物，核酸藥物按照種類又可劃分為DNA藥物（裸質粒等）、RNA藥物[干擾RNA（RNAi）等]及反義寡核苷酸藥物以及重組病毒類藥物，其作用原理是借助一定載體將核酸藥物傳送進細胞內并進行復制轉錄繼而從基因層面起到治療效果；基因增補的技術難題體現(xiàn)在遞送方式，當然這也是整個基因治療的技術難題?；蛑委煹难邪l(fā)優(yōu)勢，體現(xiàn)在一旦解決遞送方式，研發(fā)難度反而較傳統(tǒng)藥物更低。無論是在體外還是體內進行基因改造，基因治療的三大共性步驟包括：核酸序列的設計與合成、將目標序列遞送至細胞中（體內或體外）和工業(yè)化生產(chǎn)。其中，核酸序列的設計與合成難度較小分子靶向藥