梅毒的實驗室檢查與技術(shù)規(guī)范朱穗蘭2013年3月2日主要內(nèi)容梅毒概述uu梅毒血清學(xué)檢測方法梅毒檢測技術(shù)規(guī)范u梅毒概述（一）?

性接觸是主要的傳染途徑l

未經(jīng)治療的患者在感染后的1年內(nèi)最具有傳染性l

隨著病期的延長，傳染性越來越小l

到感染后2年，通過性接觸一般無傳染性?

母

嬰

傳

播在妊娠7周時，梅毒螺旋體即可通過胎盤傳染未經(jīng)治療者，雖已無性傳播（病期>2年），但妊娠時仍可傳染給胎兒,病期越長，傳染性越小;梅毒概述（二）n

一期梅毒硬下疳和(或)腹股溝淋巴結(jié)腫大n

二期梅毒可有一期梅毒史，病期在2年以內(nèi)有多形性皮疹、扁平濕疣等n

三期（晚期）梅毒可有一期或二期梅毒史，病期在2年以上皮膚黏膜損害等，包括神經(jīng)梅毒、心血管梅毒n

隱性（潛伏）梅毒早期：病期在2年以內(nèi)；晚期：病期在2年以上。無任何梅毒性的癥狀和體征n

胎傳（先天）梅毒早期：在2歲前發(fā)生；晚期：在2歲以后發(fā)病。胎傳隱性梅毒：無臨床表現(xiàn)梅毒概述（三）疑似病例、確證病例診斷依據(jù)：?

病史?

癥狀?

實驗室檢查梅毒的實驗室檢查結(jié)果對診斷有決定性意義梅毒實驗室檢測技術(shù)?病原學(xué)檢測?血清學(xué)檢測梅毒血清學(xué)檢測方法梅毒血清學(xué)檢測分類(1)非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗（非特異性梅毒抗體）(2)梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗（特異性梅毒抗體）兩類方法。為什么梅毒實驗室診斷需要兩類血清學(xué)檢測方法？非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗原理l人體感染了梅毒螺旋體后，組織受到破壞，釋放出來的一種類脂成分，與梅毒螺旋體結(jié)合形成完全抗原，刺激機體在3周-4周產(chǎn)生類脂質(zhì)抗體（反應(yīng)素）。主要是IgM和IgG混合抗體。n抗體的作用ln無保護作用，治療監(jiān)測。未經(jīng)治療的病人，其血清內(nèi)的反應(yīng)素可長期存在。經(jīng)正規(guī)治療后，反應(yīng)素可以逐漸減少至轉(zhuǎn)為陰性。臨床上非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗為什么有定性和定量兩種檢測法？非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗所有非梅毒螺旋體抗原血清試驗的抗原基本成分都是一樣方法包括：ll（1）快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗

(RPR)（2）甲苯胺紅不加熱血清試驗（TRUST）（3）性病研究實驗室試驗

(VDRL)等?；境煞质切牧字?/p>

卵磷脂和膽固醇lll抗原抗體結(jié)合形成復(fù)合物，凝集成網(wǎng)狀沉淀顆粒被肉眼所見上述方法的敏感性和特異性都基本相似試驗特點原理和成分與試驗相同血清不需要滅活不需要顯微鏡觀測結(jié)果可作定量試驗nnnnnnn有現(xiàn)成的試劑盒攜帶方便操作簡單價格便宜操作要點1.儀器：水平旋轉(zhuǎn)儀。2.定性實驗n

加樣：吸取50ul血清(漿)放在卡片圈中，并均勻地涂布在整個圈內(nèi)n

加抗原：將抗原輕輕搖勻，用9號針頭加1滴抗原n

反應(yīng)：將卡片置水平旋轉(zhuǎn)儀旋轉(zhuǎn)8分鐘，立即在亮光下觀察結(jié)果3.定量試驗n

稀釋夜準備：在圈內(nèi)加入50uL生理鹽水（根據(jù)需要確定稀釋度），勿將鹽水涂開。n

加樣：吸取50uL血清（漿）與各圈中鹽水作系列稀釋，并涂布整個圈內(nèi)。n

下同定性試驗。非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗結(jié)果判斷RPRTRUST非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗臨床意義早期梅毒硬下疳出現(xiàn)1周-2周后，血清可呈陽性。uu經(jīng)治療后血清滴度可下降并轉(zhuǎn)陰性，故可作為療效觀察、判愈、復(fù)發(fā)或再感染的指征。?

為什么要做定量檢測？非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗臨床意義一期梅毒1年后轉(zhuǎn)為陰性u二期梅毒2年后轉(zhuǎn)為陰性。uu晚期梅毒

治療后血清滴度下降緩慢，2年后約50%病人血清反應(yīng)仍為陽性。TRUST結(jié)果解釋示意圖假陽性問題假陽性：非梅毒患者的血清反應(yīng)呈陽性①技術(shù)性假陽性–

由于標本的保存不當（如細胞污染或溶血）、試劑質(zhì)量差或過期、或?qū)嶒炇也僮麇e誤所造成。②生物學(xué)假陽性–

是由于患者有其他疾病或生理狀態(tài)發(fā)生變化，使梅毒血清試驗出現(xiàn)陽性?某些疾?。航Y(jié)核、瘧疾、肝病、紅斑狼瘡、流感、肺炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕性心臟病、風(fēng)疹、系統(tǒng)性硬化癥等，疾病發(fā)展過程中釋放心磷脂到血液中呈假陽性。老年人。?生理機能發(fā)生變化：少數(shù)孕婦也可發(fā)生生物學(xué)假陽性。梅毒假陽性反應(yīng)的處理技術(shù)性假陽性反應(yīng)一般是由于操作錯誤引起的假陽性反應(yīng)，經(jīng)過重復(fù)試驗即可除外。uu對生物學(xué)假陽性反應(yīng)，應(yīng)做TPHA（TPPA）等試驗進行排除。前帶現(xiàn)象指非梅毒螺旋體抗原血清試驗中，有時血清中存在高濃度的抗體時出現(xiàn)的弱陽性、不典型或陰性反應(yīng)的結(jié)果，而臨床上又象二期梅毒，此時將血清稀釋后再進行試驗，出現(xiàn)l了陽性的結(jié)果，該現(xiàn)象稱為前帶現(xiàn)象。處理：將血清稀釋后再進行試驗。l耐血清性（血清固定）指經(jīng)抗梅毒治療后，非梅毒螺旋體抗原血清試驗在一定時期內(nèi)不陰轉(zhuǎn)。早期的耐血清性常與治療量不足或不規(guī)則治療、復(fù)發(fā)、再感染或有神經(jīng)系統(tǒng)梅毒等因素有關(guān)。l梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗方法梅毒螺旋體顆粒凝集試驗

(TPPA)u梅毒螺旋體血球凝集試驗

(TPHA)u梅毒酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）u梅毒免疫層析法-梅毒快速檢測

(RT)u熒光螺旋體抗體吸收試驗（FTA-ABS）u化學(xué)發(fā)光免疫分析法（CLIA）u梅毒螺旋體蛋白印跡試驗（WB）uTPPATPPA試驗用梅毒螺旋體致敏明膠顆粒，此致敏顆u粒與人血清中的抗梅毒螺旋體抗體結(jié)合，產(chǎn)生可見的凝集反應(yīng)，具有較高的敏感性和特異性。TPPA是目前WHO認可的梅毒抗原血清學(xué)試驗的“金標準”，常用于新方法、新試劑評價的參照標準。uTPPA(TPHA)試驗原理示意圖梅毒螺旋體抗原血清試驗的臨床意義一般情況下，一旦梅毒患者梅毒螺旋體抗原血清試驗呈陽性，即使經(jīng)過正規(guī)有效治療治，仍將終身陽性。所以TPPA等試驗不能作為療效觀察的指標。u作為非梅毒螺旋體抗原血清試驗初篩陽性標本的確證試驗。uuTPPA等陽性不能區(qū)分既往感染和現(xiàn)癥感染，應(yīng)結(jié)合非梅毒螺旋體抗原血清試驗結(jié)果進行診斷。TPPA結(jié)果解釋示意圖梅毒血清學(xué)試驗結(jié)果解釋梅毒檢測技術(shù)規(guī)范簡介全國梅毒檢測技術(shù)規(guī)范第一章

梅毒檢測樣品的采集和處理第二章

梅毒血清學(xué)檢測llllll第三章

梅毒病原體顯微鏡檢測第四章

梅毒病原體核酸檢測第五章

實驗室生物安全第六章

梅毒檢測實驗室質(zhì)量管理第一章

樣品的采集和處理?

血清、血漿、全血及腦脊液:梅毒血清學(xué)檢測或核酸檢測?

皮損部位組織液、淋巴穿刺液:梅毒病原體檢測或核酸檢測。梅毒血清學(xué)試驗適用范圍第二章

梅毒血清學(xué)檢測檢測目的:臨床診斷、血液篩查、流行病學(xué)監(jiān)測?

以臨床診斷為目的的檢測是為了確定梅毒感染的狀況。?

以血液篩查為目的的檢測是為了防止梅毒的經(jīng)血傳播。?

以流行病學(xué)監(jiān)測為目的的檢測是為了調(diào)查梅毒血清學(xué)感染率和發(fā)病率。梅毒實驗室檢測策略選擇根據(jù)目的選擇檢測方法及檢測策略。uu可采用任何一類梅毒血清學(xué)檢測方法作為篩查試驗。以臨床診斷為目的檢測策略一以臨床診斷為目的檢測策略二策略一和策略二比較第三章

梅毒體病原學(xué)檢測檢測方法?

暗視野顯微鏡檢查?鍍銀染色檢查第四章

梅毒核酸檢測可對血漿、血清、皮損部位組織液、淋巴穿刺液及腦脊液等標本的梅毒螺旋體核酸檢測nnn在早期梅毒、神經(jīng)梅毒和先天梅毒等診斷，以及螺旋體現(xiàn)癥感染和既往感染鑒別診斷中具有一定的價值可應(yīng)用于梅毒螺旋體的耐藥性監(jiān)測、菌株流行病學(xué)分型。第五章

實驗室生物安全梅毒的生物危害nn梅毒螺旋體屬第三類病原微生物，一般情況下對人、動物或者環(huán)境不構(gòu)成嚴重危害，傳播風(fēng)險有限，實驗室感染后很少引起嚴重疾病，是有有效治療和預(yù)防方法的致病微生物梅毒相關(guān)檢測的生物安全級別nn為了保證安全，對臨床和現(xiàn)場未知樣本的梅毒血清學(xué)檢測應(yīng)在符合Ⅱ級生物安全實驗室（BSL-2）要求的實驗室中進行。如有艾滋病檢測實驗室，可以在艾滋病抗體檢測實驗室中進行。第六章

實驗室質(zhì)量管理質(zhì)量保證?質(zhì)量評估?試劑評價?質(zhì)量保證檢測方法和試劑的選擇用于臨床診斷的檢測方法應(yīng)使用經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊批準的試劑，應(yīng)選擇敏感性高、特異性好的試劑。性病參比實驗室和省級性病中心實驗室應(yīng)定期組織開展梅毒診斷試劑的臨床質(zhì)量評價和新方法與技術(shù)的評估。質(zhì)量評價所有梅毒檢測實驗室應(yīng)參加外部質(zhì)量評價省級中心實驗