微生物包含哪五類：病毒細菌放線菌真菌原生動物特點：結構都相當簡單,多數(shù)個體十分微小(<o.1mm)生物總稱。通常要用光學顯微鏡或電子顯微鏡才能看到，有甚至沒有細胞結構.且體內普通不含有葉綠素.不能進行光合作用.

原核

原生生物界真菌界病毒界真核微生物的培養(yǎng)基一專家講座第1頁微生物的培養(yǎng)基一專家講座第2頁病毒

微生物的培養(yǎng)基一專家講座第3頁SARS病毒禽流感病毒微生物的培養(yǎng)基一專家講座第4頁朊病毒（蛋白質病毒）微生物的培養(yǎng)基一專家講座第5頁真菌微生物的培養(yǎng)基一專家講座第6頁如圖是酵母菌電子顯微鏡下形態(tài)結構酵母菌和霉菌青霉微生物的培養(yǎng)基一專家講座第7頁

了解相關培養(yǎng)基基礎知識，進行無菌技術操作，進行微生物培養(yǎng)。

一、課題目標：

掌握培養(yǎng)基制備、高壓蒸氣滅菌和平板劃線法等基本操作技術，熟練、規(guī)范地進行無菌操作，成功地培養(yǎng)微生物。無菌技術操作。二、課題重點和難點：三、技能目標：微生物的培養(yǎng)基一專家講座第8頁（2）按培養(yǎng)基物理形態(tài)分：液體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基一基礎知識:（3）按培養(yǎng)基功效分：P12基礎培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基判別培養(yǎng)基（1）按培養(yǎng)基化學成份分：·天然培養(yǎng)基·合成培養(yǎng)基·半合成培養(yǎng)基閱讀書本P8第三段分別說出它們優(yōu)點、缺點。微生物的培養(yǎng)基一專家講座第9頁各種培養(yǎng)基詳細配方不一樣，但普通都包含哪些成份？答：不論哪種培養(yǎng)基，普通都含有水、碳源、和氮源、無機鹽等營養(yǎng)物質。

注：另外還需要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質,比如:生長因子(即細菌生長必需，而本身不能合成化合物,如維生素、一些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧氣、二氧化碳、滲透壓等要求。

微生物的培養(yǎng)基一專家講座第10頁微生物的培養(yǎng)基一專家講座第11頁二無菌技術：無菌操作泛指在培養(yǎng)微生物操作中，全部預防雜菌污染方法。閱讀P8---P9說出消毒和滅菌有何不一樣？1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min2、巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或80℃下煮15min3、化學藥劑消毒法:用75%酒精、新潔爾滅等進行皮膚消毒;氯氣消毒水源4、紫外線消毒……(1)慣用消毒方法：微生物的培養(yǎng)基一專家講座第12頁1、灼燒滅菌:2、干熱滅菌：160-170℃下加熱1-2h。3、高壓蒸氣滅菌：100kPa、121℃下維持15-30min.(2)慣用滅菌方法：微生物的培養(yǎng)基一專家講座第13頁分類定義方法滅菌法殺滅一切微生物物理法：熱力、輻射、微波、等離子體化學法：醛類、烷化劑高效消毒法殺滅一切致病微生物紫外線、含氯劑、臭氧、復配劑等中效消毒法殺滅除芽孢外致病微生物超聲波、碘類、醇類、酚類低效消毒法殺滅細菌繁殖體、親脂病毒單鏈季胺鹽、雙胍類、中草藥、金屬離子無菌技術：微生物的培養(yǎng)基一專家講座第14頁常

識1．無菌技術包含：（1）對試驗操作空間、操作者衣著和手進行清潔和消毒；（2）將培養(yǎng)器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進行

滅菌

；（3）為防止周圍微生物污染，試驗操作應在酒精燈火焰附近

旁進行；（4）防止已滅菌處理材料用具與

周圍物品

相接觸。2．消毒方法：（1）日常生活經慣用到是

煮沸消毒法；（2）對一些不耐高溫液體，則使用

巴氏

消毒法（作簡明介紹）；（3）對接種室、接種箱或超凈工作臺首先噴灑石炭酸或煤酚皂等溶液以增強消毒效果，然后使用

紫外線進行物理消毒。（4）試驗操作者雙手使用酒精進行消毒；（5）飲水水源用氯氣進行消毒。3．滅菌方法：（1）接種環(huán)、接種針、試管口等使用

灼燒

滅菌法；（2）玻璃器皿、金屬用具等使用干熱滅菌法，所用器械是

干熱滅菌箱；（3）培養(yǎng)基、無菌水等使用高壓蒸汽

滅菌法，所用器械是

高壓蒸汽滅菌鍋。（4）表面滅菌和空氣滅菌等使用

紫外線滅菌法，所用器械是紫外燈。微生物的培養(yǎng)基一專家講座第15頁三、試驗操作1.制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（用于培養(yǎng)細菌）微生物的培養(yǎng)基一專家講座第16頁【補充】培養(yǎng)基配制標準：①目標要明確：依據(jù)培養(yǎng)微生物種類、培養(yǎng)目標等確定培養(yǎng)基類型和配制量。②營養(yǎng)要協(xié)調：培養(yǎng)基中各種營養(yǎng)物質濃度和百分比要適宜。比如：碳氮比4∶1時，谷氨酸棒狀桿菌大量繁殖而產生谷氨酸少；碳氮比為3∶1時，菌體繁殖受抑制而谷氨酸合成量大增。③pH要適宜：細菌培養(yǎng)基pH中性或偏堿性，霉菌培養(yǎng)基呈酸性。微生物的培養(yǎng)基一專家講座第17頁1．配制：計算、稱量、熔化2．調整pH：用3%HCI/NaOH調整

pH7．0---7．23．分裝：分裝過程中注意不要使培養(yǎng)基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引發(fā)污染。分裝三角燒瓶量以不超出三角燒瓶容積二分之一為宜。4．包扎：操作步驟:微生物的培養(yǎng)基一專家講座第18頁5．滅菌:

將50ml培養(yǎng)基用玻棒轉移至三角錐瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮紙，再放入高壓蒸氣滅菌鍋，在壓力為100kPa、溫度為121℃，滅菌15～30min。將培養(yǎng)皿用舊報紙包裹，放入干熱滅菌箱內，在160～170℃下滅菌2h。

6．倒平板:

待培養(yǎng)基冷卻到50℃左右時，在酒精燈附近倒平板。2d后觀察平板，無雜菌污染才可用來接種.7．無菌檢驗：將滅菌培養(yǎng)基放入37℃溫室中培養(yǎng)24—48小時，以檢驗滅菌是否徹底。微生物的培養(yǎng)基一專家講座第19頁倒平板:微生物的培養(yǎng)基一專家講座第20頁菌種保留1、暫時保藏：接種到固體斜面培養(yǎng)基，菌落長成后置于4℃冰箱保留。

2、長久保留：甘油冷凍管藏法微生物的培養(yǎng)基一專家講座第21頁1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50℃左右時，才能用來倒平板。你用什么方法來預計培養(yǎng)基溫度？問題討論

答：能夠用手觸摸盛有培養(yǎng)基錐形瓶，感覺錐形瓶溫度下降到剛才不燙手時，就能夠進行倒平板了。2.為何需要使錐形瓶瓶口經過火焰？

答：經過灼燒滅菌，預防瓶口微生物污染培養(yǎng)基。注意:微生物的培養(yǎng)基一專家講座第22頁3.平板冷凝后，為何要將平板倒置？4.在倒平板過程中，假如不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為何？

答：平板冷凝后，皿蓋上會凝結水珠，凝固后培養(yǎng)基表面濕度也比較高，將平板倒置，既能夠使培養(yǎng)基表面水分更加好地揮發(fā)，又能夠預防皿蓋上水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。

答：空氣中微生物可能在皿蓋與皿底之間培養(yǎng)基上滋生，所以最好不要用這個平板培養(yǎng)微生物。微生物的培養(yǎng)基一專家講座第23頁選擇培養(yǎng)基加入青霉素培養(yǎng)基:

分離酵母菌、霉菌等真菌加入高濃度食鹽培養(yǎng)基:

分離金黃色葡萄球菌不加氮源無氮培養(yǎng)基:

分離固氮菌不加含碳有機物無碳培養(yǎng)基:

分離自養(yǎng)型微生物加入青霉素等抗生素培養(yǎng)基:

分離導入了目標基因受體細胞加入氨基喋呤、次黃嘌呤和胸腺嘧啶核苷培養(yǎng)基:

分離雜交瘤細胞微生物的培養(yǎng)基一專家講座第24頁2、純化大腸桿菌:接種方法有：平板劃線法和稀釋涂布平板法

平板劃線法:經過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)畫線操作,將聚集菌鐘逐步稀釋分散到培養(yǎng)基表面.

在數(shù)次畫線后,能夠分離到由一個細胞繁殖而來肉眼可見子細胞群體,這就是菌落.微生物接種技術微生物的培養(yǎng)基一專家講座第25頁微生物的培養(yǎng)基一專家講座第26頁劃線后培養(yǎng)一段時間后微生物的培養(yǎng)基一專家講座第27頁微生物恒溫培養(yǎng)微生物的培養(yǎng)基一專家講座第28頁微生物恒溫培養(yǎng)微生物的培養(yǎng)基一專家講座第29頁問題討論

1.為何在操作第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結束時，依然需要灼燒接種環(huán)嗎？為何？

答：操作第一步灼燒接種環(huán)是為了防止接種環(huán)上可能存在微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結束后，接種環(huán)上殘留菌種，使下一次劃線時，接種環(huán)上菌種直接起源于上次劃線末端，從而經過劃線次數(shù)增加，使每次劃線時菌種數(shù)目逐步降低，方便得到菌落。劃線結束后灼燒接種環(huán)，能及時殺死接種環(huán)上殘留菌種，防止細菌污染環(huán)境和感染操作者。微生物的培養(yǎng)基一專家講座第30頁

2.在灼燒接種環(huán)之后，為何要等其冷卻后再進行劃線？答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。

3.在作第二次以及其后劃線操作時，為何總是從上一次劃線末端開始劃線？

答：劃線后，線條末端細菌數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線末端開始，能使細菌數(shù)目伴隨劃線次數(shù)增加而逐步降低，最終能得到由單個細菌繁殖而來菌落。微生物的培養(yǎng)基一專家講座第31頁四、課題結果評價

（一）培養(yǎng)基制作是否合格假如未接種培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1～2d后無菌落生長，說明培養(yǎng)基制備是成功，不然需要重新制備。（二）接種操作是否符合無菌要求假如培養(yǎng)基上生長菌落顏色、形狀、大小基本一致，并符合大腸桿菌菌落特點，則說明接種操作是符合要求；假如培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其它菌落，則說明接種過程中，無菌操作還未到達要求，需要分析原因，再次練習。（三）是否進行了及時細致觀察與統(tǒng)計培養(yǎng)12h與24h后大腸桿菌菌落大小會有顯著不一樣，及時觀察統(tǒng)計同學會發(fā)覺這一點，并能觀察到其它一些細微改變。這一步要求主要是培養(yǎng)學生良好科學態(tài)度與習慣。微生物的培養(yǎng)基一專家講座第32頁本課題知識小結:微生物的培養(yǎng)基一專家講座第33頁【典例解析】

例1．關微生物營養(yǎng)物質敘述中，正確是:A.是碳源物質不可能同時是氮源B.凡碳源都提供能量C.除水以外無機物只提供無機鹽D.無機氮源也能提供能量

解析：不一樣微生物，所需營養(yǎng)物質有較大差異，要針對微生物詳細情況分析。對于A、B選項，它表示是不完整。有碳源只能是碳源，如二氧化碳；有碳源可同時是氮源，如NH4HCO3；有碳源同時是能源，如葡萄糖；有碳源同時是氮源，也是能源，如蛋白胨。對于C選項，除水以外無機物種類繁多，功效也多樣。如二氧化碳，可作為自養(yǎng)型微生物碳源；NaHCO3，可作為自養(yǎng)型微生物碳源和無機鹽；而NaCl則只能提供無機鹽。對于D選項，無機氮源提供能量情況還是存在，如NH3可為硝化細菌提供能量和氮源。答案：D微生物的培養(yǎng)基一專家講座第34頁例2．下面對發(fā)酵工程中滅菌了解不正確是:A.預防雜菌污染B.毀滅雜菌C.培養(yǎng)基和發(fā)酵設備都必須滅菌D.滅菌必須在接種前答案：B

解析：滅菌是微生物發(fā)酵過程一個主要步驟。A說是滅菌目標，因為發(fā)酵所用菌種大多是單一純種，整個發(fā)酵過程不能混入其它微生物（雜菌），所以是正確；B是錯誤，因為滅菌目標是預防雜菌污染，但實際操作中不可能只毀滅雜菌，而是毀滅全部微生物。C是正確，因為與發(fā)酵相關全部設備和物質都要滅菌；發(fā)酵所用微生物是滅菌后專門接種，滅菌必須在接種前，假如接種后再滅菌就會把所接菌種也殺死。微生物的培養(yǎng)基一專家講座第35頁編號成份含量①粉狀硫10g②（NH4）2SO40.4g③K2HPO44.0g④MgSO49.25g⑤FeSO40.5g⑥CaCl20.5g⑦H2O100ml例3．右表是某微生物培養(yǎng)基成份，請據(jù)此回答：（1）右表培養(yǎng)基可培養(yǎng)微生物類型是

（2）若不慎將過量NaCl加入培養(yǎng)基中。如不想浪費此培養(yǎng)基，可再加入

.用于培養(yǎng)金黃色葡萄球菌.自養(yǎng)型微生物

含碳有機物

微生物的培養(yǎng)基一專家講座第36頁（3）若除去成份②，加入（CH2O），該培養(yǎng)基可用于培養(yǎng)

。（4）表中營養(yǎng)成份共有

類。（5）不論何種培養(yǎng)基，