隱球菌臨床推廣第1頁(yè)，共39頁(yè)，2023年，2月20日，星期日

隱球菌病感染診斷現(xiàn)狀一

產(chǎn)品介紹二

適用科室及臨床意義三

相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)四第2頁(yè)，共39頁(yè)，2023年，2月20日，星期日隱球菌為圓形菌體，外周有莢膜，內(nèi)有反光孢子，但無(wú)菌絲。隱球菌屬已知有37個(gè)不同的種，但具致病性的多為新型隱球菌，其特點(diǎn)是菌體由一層很厚的多糖莢膜所包被。

新型隱球菌主要包括新生變種、格特變種等簡(jiǎn)介第3頁(yè)，共39頁(yè)，2023年，2月20日，星期日流行病學(xué)38個(gè)ICUsof27個(gè)意大利醫(yī)院384例真菌感染(318例侵襲性念珠菌感染；63例霉菌感染；3例隱球菌感染)TortoranoAMetal.Mycoses.2011,55:73–79.第4頁(yè)，共39頁(yè)，2023年，2月20日，星期日HIV感染者器官移植患者接受大劑量皮質(zhì)類固醇或單克隆抗體（如阿侖單抗、英夫利昔單抗）和/或其他免疫抑制劑治療的患者其他無(wú)基礎(chǔ)疾病的患者JohnR.Perfect,etc.ClinicalInfectiousDiseases2010;50:291–322

美國(guó)感染病學(xué)會(huì)的“隱球菌病治療臨床實(shí)踐指南（2010年更新）”中指出，隱球菌病的易感人群主要包括：宿主因素第5頁(yè)，共39頁(yè)，2023年，2月20日，星期日流行病學(xué)隨著AIDS患者的增多，各種機(jī)會(huì)性感染的發(fā)病率也隨之上升，新型隱球菌成為繼白色念珠菌之后最常見(jiàn)的機(jī)會(huì)性感染真菌，其在HIV中的感染率已達(dá)8.5%。隱球菌性腦膜炎發(fā)生率和死亡率在發(fā)達(dá)國(guó)家達(dá)到10-30%，

在發(fā)展中國(guó)家可達(dá)到50-100%。早期隱球菌感染臨床表現(xiàn)缺乏特異性，腦脊液變化不典型，但是當(dāng)發(fā)展為隱球菌性腦膜炎時(shí)，死亡率可達(dá)到20%。早期、快速、準(zhǔn)確地診斷很有必要第6頁(yè)，共39頁(yè)，2023年，2月20日，星期日現(xiàn)有檢測(cè)手段墨汁染色（菌體）真菌培養(yǎng)（活菌）ELISA（莢膜多糖抗原）乳膠凝集法（莢膜多糖抗原）膠體金法（莢膜多糖抗原）第7頁(yè)，共39頁(yè)，2023年，2月20日，星期日1.印度墨汁染色：

敏感性差，陽(yáng)性檢出率很低2.腦脊液或血液培養(yǎng)（金標(biāo)準(zhǔn)）：

陽(yáng)性檢出率低，培養(yǎng)（2-10天）及鑒定時(shí)間長(zhǎng)，易誤診3.抗原檢測(cè)試驗(yàn)：

腦脊液和血清樣本抗原檢測(cè)的敏感性可達(dá)到97%和87%*，能實(shí)現(xiàn)早期快速診斷*TylerWarkentien,MD.IntJSTDAIDS.2010October;21(10):679–684.現(xiàn)有檢測(cè)手段第8頁(yè)，共39頁(yè)，2023年，2月20日，星期日隱球菌莢膜多糖抗原

由3種不同的單糖聚合而成是引起病理變化的主要毒性因子在菌體生長(zhǎng)和繁殖過(guò)程中，GXM不斷分泌到胞外通過(guò)發(fā)揮免疫抑制作用和免疫調(diào)理作用影響宿主免疫系統(tǒng)OscarZaragoza,etc..AdvApplMicrobiol.2009,68:133–216隱球菌莢膜多糖抗原GXM(Glucuronoxylomannan,GXM)：莢膜多糖抗原是隱球菌特有的分泌物，可以作為隱球菌感染的診斷依據(jù)第9頁(yè)，共39頁(yè)，2023年，2月20日，星期日

隱球菌病感染診斷現(xiàn)狀一

產(chǎn)品介紹二

臨床意義及適用科室三

相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)四第10頁(yè)，共39頁(yè)，2023年，2月20日，星期日隱球菌抗原檢測(cè)試劑盒（膠體金法）原理第11頁(yè)，共39頁(yè)，2023年，2月20日，星期日隱球菌抗原檢測(cè)試劑盒（膠體金免疫層析法）試劑盒組成隱球菌抗原檢測(cè)試紙條50條樣本稀釋液滴定液陽(yáng)性對(duì)照穩(wěn)定性/儲(chǔ)存方法2年有效期室溫儲(chǔ)存第12頁(yè)，共39頁(yè)，2023年，2月20日，星期日特點(diǎn)無(wú)需樣本預(yù)處理10分鐘得到結(jié)果定性或半定量測(cè)定結(jié)果客觀血清，腦脊液，血漿第13頁(yè)，共39頁(yè)，2023年，2月20日，星期日樣本收集及制備按照無(wú)菌操作收集腦脊液、血漿和血清樣本。樣本最多可以在2-8℃放置72小時(shí)。不反復(fù)凍融的情況下，樣本可以在-20℃以下保存更長(zhǎng)時(shí)間。樣本在運(yùn)輸過(guò)程中應(yīng)保持在2-8℃或者-20℃以下。第14頁(yè)，共39頁(yè)，2023年，2月20日，星期日定性檢測(cè)操作步驟簡(jiǎn)單5步，10分鐘得到結(jié)果第15頁(yè)，共39頁(yè)，2023年，2月20日，星期日

注意：若對(duì)照條帶未出現(xiàn)，則說(shuō)明該檢測(cè)無(wú)效，應(yīng)重新檢測(cè)。定性檢測(cè)結(jié)果第16頁(yè)，共39頁(yè)，2023年，2月20日，星期日半定量檢測(cè)操作步驟1、以1:5作為初始稀釋濃度，依次1:2稀釋至1:2560。分別放置于10個(gè)微離心管中并編號(hào)1-10。2、向1號(hào)試管中加入4滴樣本稀釋液。3、分別向標(biāo)號(hào)2-10的試管中加入2滴滴定液。4、將40μL樣本加入1號(hào)試管并混勻。5、從1號(hào)試管中吸取80μL樣本混合液轉(zhuǎn)移至2號(hào)試管并混勻，依次進(jìn)行稀釋直至10號(hào)試管。6、10號(hào)試管中吸取80μL樣本混合液并丟棄以保證試管內(nèi)最終體積為80μL。7、將試紙條的白端分別沒(méi)入試管中。8、等待10分鐘，讀取并記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果。第17頁(yè)，共39頁(yè)，2023年，2月20日，星期日半定量檢測(cè)操作步驟第18頁(yè)，共39頁(yè)，2023年，2月20日，星期日半定量檢測(cè)操作步驟-2第19頁(yè)，共39頁(yè)，2023年，2月20日，星期日半定量檢測(cè)(滴度)結(jié)果對(duì)于半定量滴定檢測(cè)，患者的滴度應(yīng)報(bào)告為產(chǎn)生陽(yáng)性結(jié)果的最高稀釋度。第20頁(yè)，共39頁(yè)，2023年，2月20日，星期日質(zhì)量控制陽(yáng)性對(duì)照：將1滴樣本稀釋液加入試管中，再加入1滴隱球菌抗原陽(yáng)性對(duì)照。陰性對(duì)照為：將2滴樣本稀釋液加入試管中。分別插入試紙條，10分鐘后讀取結(jié)果。依據(jù)本地、國(guó)家的法規(guī)及認(rèn)證機(jī)構(gòu)的指導(dǎo)方針或要求，可能需要做額外的質(zhì)控檢測(cè)。第21頁(yè)，共39頁(yè)，2023年，2月20日，星期日膠體金法和培養(yǎng)/墨汁染色對(duì)比CrAgLFApackageinsert(IMMY)靈敏度特異性膠體金法試劑盒95.83%99.84%墨汁染色86.39%100.00%真菌培養(yǎng)60.72%100.00%第22頁(yè)，共39頁(yè)，2023年，2月20日，星期日膠體金法和ELISA/乳膠凝集法對(duì)比血清型靈敏度(ng隱球菌抗原/ml)A

(新型隱球菌)B

(哥特隱球菌)C(哥特隱球菌)D(新型隱球菌)IMMY膠體金法1198IMMY乳膠凝集法284738062ELISA2823>2,000770其他廠家乳膠凝集法193794054TRKozel,Clin.VaccineImmunol.(2011)18:1292TRKozel,8thInternationalConferenceonCryptococcusandCryptococcosis(2011)靈敏度遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其他方法第23頁(yè)，共39頁(yè)，2023年，2月20日，星期日隱球菌抗原分布時(shí)間感染血液腦脊液肺部腦膜炎肺以外無(wú)癥狀癥狀膠體金法隱球菌抗原檢測(cè)的其他方法AdaptedfromKozelandBauman,ExpertOpin.Med.Diagn.(2012)6:245第24頁(yè)，共39頁(yè)，2023年，2月20日，星期日膠體金法和乳膠凝集法對(duì)比

膠體金法乳膠凝集法檢測(cè)時(shí)間10分鐘長(zhǎng)達(dá)60分鐘樣品預(yù)處理無(wú)需需要(蛋白酶處理血清)樣品類型血清,腦脊液,血漿血清和腦脊液儲(chǔ)存室溫冷藏第25頁(yè)，共39頁(yè)，2023年，2月20日，星期日

隱球菌病感染診斷現(xiàn)狀一

產(chǎn)品介紹二

適用科室及臨床意義三

相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)四第26頁(yè)，共39頁(yè)，2023年，2月20日，星期日適用科室及臨床意義新型隱球菌感染可發(fā)生于全身多個(gè)部位，最常見(jiàn)的感染主要發(fā)生在中樞神經(jīng)系統(tǒng)、肺部、皮膚等。第27頁(yè)，共39頁(yè)，2023年，2月20日，星期日中樞神經(jīng)系統(tǒng)隱球菌病-神經(jīng)內(nèi)科隱球菌侵犯中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見(jiàn)，包括腦膜炎或亞急性腦膜炎、散播型腦膜炎等。

臨床癥狀：首發(fā)癥狀間歇性頭痛、惡心及嘔吐，伴低熱、周身不適、精神不振等非特異性癥狀。隨病情發(fā)展，頭痛漸加重轉(zhuǎn)為持續(xù)性、精神異常、躁動(dòng)不安，嚴(yán)重者出現(xiàn)不同程度意識(shí)障礙。肺隱球菌病-呼吸科肺部是隱球菌侵入的門戶適用科室及臨床意義第28頁(yè)，共39頁(yè)，2023年，2月20日，星期日皮膚黏膜隱球菌病-皮膚科

10%～15%的隱球菌病患者出現(xiàn)皮膚損害，比如出現(xiàn)丘疹、水皰、膿皰、傳染性軟疣樣丘疹、痤瘡樣膿皰等癥狀。

兒童腦膜炎-兒科

兒童由于免疫系統(tǒng)不健全，也容易被隱球菌感染，一般兒童的腦脊液樣本都會(huì)做隱球菌篩查免疫缺陷人群-感染科、器官移植科、ICU等新型隱球菌作為一種機(jī)會(huì)性感染真菌，主要侵犯免疫缺陷人群，如器官移植患者以及AIDS患者及使用免疫抑制劑人群等。

適用科室及臨床意義第29頁(yè)，共39頁(yè)，2023年，2月20日，星期日臨床意義在撒哈拉以南的非洲地區(qū)，隱球菌腦膜炎是造成艾滋患者死亡的一種重要疾病，隱球菌抗原可以在病癥發(fā)生的幾周前被檢測(cè)到。隱球菌抗原的檢測(cè)對(duì)于隱球菌腦膜炎的預(yù)防有非常積極的作用。第30頁(yè)，共39頁(yè)，2023年，2月20日，星期日臨床意義

篩查了HIV感染病人進(jìn)行隱球菌抗原預(yù)防的成本效益，使用隱球菌抗原可以顯著降低成本第31頁(yè)，共39頁(yè)，2023年，2月20日，星期日臨床意義莢膜多糖抗原是隱球菌特有的分泌物，是隱球菌感染確診的依據(jù)。在感染的初期，莢膜多糖抗原就被檢測(cè)到，因此是隱球菌病早期診斷的標(biāo)志物。隨著病情的發(fā)展，莢膜多糖抗原的含量會(huì)隨之發(fā)生變化，還可作為病情監(jiān)測(cè)的指標(biāo)。第32頁(yè)，共39頁(yè)，2023年，2月20日，星期日G實(shí)驗(yàn)：檢測(cè)真菌細(xì)胞壁特有成分1,3-β-D-葡聚糖吞噬細(xì)胞將菌吞噬消化后釋放1,3-β-D-葡聚糖到血液不能檢測(cè)到的真菌：隱球菌和接合菌（包括毛霉菌、 根霉菌等）G實(shí)驗(yàn)檢測(cè)隱球菌為陰性結(jié)果的原因：隱球菌含1,3-β-D-葡聚糖的量少莢膜很厚，不易被吞噬細(xì)胞消化聯(lián)合檢測(cè)的意義第33頁(yè)，共39頁(yè)，2023年，2月20日，星期日聯(lián)合檢測(cè)的意義第34頁(yè)，共39頁(yè)，2023年，2月20日，星期日

隱球菌病感染診斷現(xiàn)