第十五章色譜法導(dǎo)論演示文稿現(xiàn)在是1頁\一共有22頁\編輯于星期二優(yōu)選第十五章色譜法導(dǎo)論現(xiàn)在是2頁\一共有22頁\編輯于星期二1906年，俄國植物學(xué)家Tswett最先創(chuàng)立。他采用填充有固體CaCO3細粒子的玻璃柱，將植物色素的混合物加于柱頂端，然后以溶劑淋洗，被分離的組分在柱中顯示了不同的色帶，他稱之為色譜。

20世紀50年代，色譜發(fā)展最快（一些新型色譜技術(shù)的發(fā)展；復(fù)雜組分分析發(fā)展的要求）。

1937年-1972年，15年中有12個Nobel獎是有關(guān)色譜研究的。一、色譜法簡介現(xiàn)在是3頁\一共有22頁\編輯于星期二(1）粗葉綠素+石油醚（2）石油醚

流動相相對運動

固定相（吸附劑）CaCO3

色譜柱胡蘿卜素利用不同物質(zhì)在流動相葉黃素與固定相作用時的行為葉綠素差異得到分離(吸附)（3）小刀割開，用醇溶出

（吸附作用）現(xiàn)在是4頁\一共有22頁\編輯于星期二1931年奧地利化學(xué)家?guī)於骱}卜素植物色素分離20世紀30年代離子交換色譜建立1940年吸附色譜與電泳相結(jié)合1941年分配色譜創(chuàng)立1952年氣相色譜法建立1968年高效液相色譜法建立1975年之后離子色譜、超臨界流體色譜、高效毛細管電泳、場流動分級分離現(xiàn)在是5頁\一共有22頁\編輯于星期二

Tiselius,A.W.K.Martin,A.J.P.Synge,R.L.M.

1948年Nobel化學(xué)獎1952年Nobel化學(xué)獎

吸附色譜與電泳分配色譜現(xiàn)在是6頁\一共有22頁\編輯于星期二

使用外力使含有樣品的流動相（氣體、液體或超臨界流體）通過一固定于柱或平板上、與流動相互不相溶的固定相表面。樣品中各組份在兩相中進行不同程度的作用。與固定相作用強的組份隨流動相流出的速度慢，反之，與固定相作用弱的組份隨流動相流出的速度快。由于流出速度的差異，使得混合組份最終形成各個單組份的“帶”或“區(qū)”，對依次流出的各個單組份物質(zhì)可分別進行定性、定量分析。色譜分離基本原理現(xiàn)在是7頁\一共有22頁\編輯于星期二

利用不同物質(zhì)在固定相和流動相中具有不同的分配系數(shù)，當兩相作相對移動時，使這些物質(zhì)在兩相間進行反復(fù)多次分配，原來微小的分配差異產(chǎn)生了很明顯的分離效果，按先后順序流出色譜柱。通過適當?shù)臋z測手段，可以對分離后的各組分進行測定。

固定相，流動相，色譜柱。色譜法的實質(zhì)現(xiàn)在是8頁\一共有22頁\編輯于星期二1.按兩相物理狀態(tài)分：

氣相色譜（GC）：流動相為氣體。氣固色譜（GSC）和氣液色譜（GLC）。

液相色譜（LC）：流動相為液體。液固色譜（LSC）和液液色譜（LLC）。

超臨界流體色譜（SFC）：流動相是超臨界流體。二、色譜法分類現(xiàn)在是9頁\一共有22頁\編輯于星期二2.按固定相的固定方式分：

柱色譜（CC）：有兩類：填充柱色譜和毛細管色譜。

紙色譜（PC）：以多孔濾紙為載體，吸附在濾紙上的水為固定相。

薄層色譜（TLC）：以涂漬在玻璃板或塑料板上的吸附劑薄層為固定相。薄層色譜和紙色譜屬于平板色譜?，F(xiàn)在是10頁\一共有22頁\編輯于星期二3.按分離機理分：

吸附色譜：不同組分在固定相的吸附作用不同。

分配色譜：不同組分在兩相間的分配系數(shù)不同。

離子交換色譜：不同組分在固定相（離子交換劑）上的親和力不同。

凝膠色譜（尺寸排阻色譜）：不同尺寸的分子在固定相上的滲透作用不同。現(xiàn)在是11頁\一共有22頁\編輯于星期二1.分離效率高，可分離復(fù)雜混合物。2.靈敏度高，可達g/g，ng/g。3.分析速度快，幾分鐘或幾十分鐘可完成。4.應(yīng)用范圍廣。氣相色譜，液相色譜。5.定性較困難。三、色譜法特點現(xiàn)在是12頁\一共有22頁\編輯于星期二

混合組分的分離過程及檢測器對各組分在不同階段的響應(yīng)一、色譜分離過程§15-2色譜基本概念現(xiàn)在是13頁\一共有22頁\編輯于星期二二、色譜常用術(shù)語1.色譜圖：當某組分從色譜柱中流出時，檢測器對該組分的響應(yīng)信號隨時間變化所形成的峰形曲線即為該組分的色譜圖。當進樣量很低時，色譜圖一般呈高斯分布。色譜圖是色譜定性/定量和評價色譜分離情況的基本依據(jù)?，F(xiàn)在是14頁\一共有22頁\編輯于星期二2.基線：在實驗條件下，色譜柱后僅有純流動相進入檢測器時的流出曲線稱為基線，穩(wěn)定的基線應(yīng)為水平直線。圖中CD。3.色譜峰高h：色譜峰頂點與基線之間的垂直距離。AB現(xiàn)在是15頁\一共有22頁\編輯于星期二4.區(qū)域?qū)挾龋河糜诤饬恐Ъ胺从成V操作條件下的動力學(xué)因素。通常希望區(qū)域?qū)挾仍秸胶?。通常?種表示方法：（1）標準偏差：0.607倍峰高處色譜峰寬度的一半（2）半峰寬W1/2：峰高一半處的峰寬。W1/2=2.354

（3）峰底寬Wb：色譜峰兩側(cè)拐點上切線與基線的交點間的距離。Wb=4現(xiàn)在是16頁\一共有22頁\編輯于星期二5.保留值（Retentionvalue,R）（1）死時間t0（Deadtime）：不與固定相作用的物質(zhì)從進樣到出現(xiàn)峰極大值時的時間，它與色譜柱的空隙體積成正比。由于該物質(zhì)不與固定相作用，因此，其流速與流動相的流速相近。據(jù)t0可求出流動相平均流速?，F(xiàn)在是17頁\一共有22頁\編輯于星期二（2）保留時間tR：試樣從進樣到出現(xiàn)峰極大值時的時間。它包括組分隨流動相通過柱子的時間t0和組分在固定相中滯留的時間。一定條件下，任一化合物都有確定的保留時間，是色譜定性依據(jù)。（3）調(diào)整保留時間

：某組分的保留時間扣除死時間后的保留時間，它是組分在固定相中的滯留時間。即：反映了組分在色譜過程中，與固定相相互作用所消耗的時間，是各組分產(chǎn)生差速遷移的物理化學(xué)基礎(chǔ)現(xiàn)在是18頁\一共有22頁\編輯于星期二（4）死體積V0：色譜柱管內(nèi)固定相顆粒間空隙、色譜儀管路和連接頭間空隙和檢測器間隙的總和。即t0這段時間內(nèi)通過色譜柱的載氣體積，等于死時間t0與載氣流量F0的乘積：其中，F(xiàn)o為柱出口的載氣流速（mL/min）。現(xiàn)在是19頁\一共有22頁\編輯于星期二（5）保留體積VR：指從進樣到待測物在柱后出現(xiàn)濃度極大點時所通過的流動相的體積。（6）調(diào)整保留體積：某組分的保留體積扣除死體積后的體積。現(xiàn)在是20頁\一共有22頁\編輯于星期二（7）相對保留值r2,1：組分2的調(diào)整保留值與組分1的調(diào)整保留值之比。注意：r2,1只與柱溫和固定相性質(zhì)有關(guān)，而與柱內(nèi)徑、柱長L、填充情況及流動相流速等無關(guān)，是色譜定性分析尤其是GC定性分析的重要參數(shù)之一。具體做法：固定一個色譜峰為標準s，然后再求其它峰i對