電穿孔簡介演示文稿目前一頁\總數(shù)三十一頁\編于二點(diǎn)電穿孔簡介目前二頁\總數(shù)三十一頁\編于二點(diǎn)電穿孔的工作原理是什么?電穿孔的基本原理是將細(xì)胞置于一個瞬時的高電場的環(huán)境中，此高電場的環(huán)境使得細(xì)胞膜的表面出現(xiàn)很多小孔，這種條件下細(xì)胞膜對于環(huán)境中分子的透性大大增加，這樣就可以將外源分子進(jìn)入細(xì)胞。利用上述的原理，那么采用電穿孔的方法就可將DNA等其他類的生物分子導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi)部進(jìn)行研究，如蛋白分子、糖類分子等等。目前三頁\總數(shù)三十一頁\編于二點(diǎn)采用電穿孔的優(yōu)點(diǎn)本質(zhì)上屬于物理的方法，不采用任何化學(xué)試劑，因此不會對細(xì)胞產(chǎn)生損傷操作方便低毒性高的轉(zhuǎn)染效率使用于種類廣泛的細(xì)胞目前四頁\總數(shù)三十一頁\編于二點(diǎn)電穿孔的主要應(yīng)用導(dǎo)入標(biāo)記基因，起到標(biāo)記、指示的作用導(dǎo)入具體的功能基因進(jìn)行研究導(dǎo)入藥物、蛋白、抗體等其他分子對細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能進(jìn)行研究目前五頁\總數(shù)三十一頁\編于二點(diǎn)具體的工作原理?將細(xì)胞和外源DNA混合后一起放在電擊杯內(nèi)電擊杯被加上電壓后，細(xì)胞膜進(jìn)行重排，細(xì)胞表面出現(xiàn)很多小孔外源DNA分子通過上述形成的小孔進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)部當(dāng)外界的電場撤消后，細(xì)胞膜表面的小孔重新關(guān)閉，這時阻止外界的分子再進(jìn)入細(xì)胞目前六頁\總數(shù)三十一頁\編于二點(diǎn)GenePulserXcell

電穿孔系統(tǒng)目前七頁\總數(shù)三十一頁\編于二點(diǎn)主要的優(yōu)點(diǎn)、特點(diǎn)提供指數(shù)波和方波2種電穿孔條件，可對任何的真核細(xì)胞、原核細(xì)胞的電轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行優(yōu)化采用Bio-Rad專利的PulseTrac電路和電弧保護(hù)設(shè)計(jì)，可確保實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性并保護(hù)樣品模塊化的設(shè)計(jì)可方便用戶根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)要求進(jìn)行選擇友好的數(shù)字化界面，可直觀的編程控制所有的參數(shù)，包括附屬模塊的參數(shù)提供多種操作模式，包括手動設(shè)置、預(yù)設(shè)模式、用戶編程等多種方式目前八頁\總數(shù)三十一頁\編于二點(diǎn)主要的優(yōu)點(diǎn)、特點(diǎn)：2種波型電穿孔的過程中可以有2種波型來控制外界電壓的變化TheGenePulserXcell可以提供2種波型，即指數(shù)波和方波目前九頁\總數(shù)三十一頁\編于二點(diǎn)ExponentialDecay電容器充電到預(yù)定的電壓(v0)放電后，即向樣品釋放脈沖，細(xì)胞表面的電壓隨時間按指數(shù)方式下降的電容器的電壓值達(dá)到峰值釋放脈沖后迅速的衰減電場強(qiáng)度E(V/cm)是用來描述電擊杯外界電場環(huán)境的一個參數(shù)（E=V/d）脈沖時間是一般用時間常數(shù)來進(jìn)行衡量(~37%ofV0，V0/e)脈沖的時間是由電阻和電容的大小所決定的目前十頁\總數(shù)三十一頁\編于二點(diǎn)GPX和指數(shù)波GPX產(chǎn)生指數(shù)波的電路結(jié)構(gòu)Charger充電回路放電回路電容器電擊杯3ohm電阻基本電路目前十一頁\總數(shù)三十一頁\編于二點(diǎn)GPX和指數(shù)波GPX產(chǎn)生指數(shù)波的電路結(jié)構(gòu)Charger充電回路放電回路電容器電擊杯3ohm電阻r充電根據(jù)具體電壓及電容的選擇，可以采用主單元或者CE模塊對電容進(jìn)行充電目前十二頁\總數(shù)三十一頁\編于二點(diǎn)GPX和指數(shù)波GPX產(chǎn)生指數(shù)波的電路結(jié)構(gòu)Charger充電回路放電回路電容器r電擊杯3ohm電阻放電Thechargeisdeliveredtothecuvette目前十三頁\總數(shù)三十一頁\編于二點(diǎn)PulseTrac電路是如何確保每次實(shí)驗(yàn)電壓的精確度及實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性在每次放電前，PulseTrac電路都會預(yù)測整個放電回路的電阻值，并計(jì)算得到應(yīng)該加在電容器上的電壓，確保放電后樣品上獲得的電壓和理論電壓值的一致在放電回路中3歐姆的電阻可以起到減小回路中電流的作用，適當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)樣品注意：PulseTrac回路技術(shù)是Bio-Rad公司的專利技術(shù)，其他任何廠家都不能提供目前十四頁\總數(shù)三十一頁\編于二點(diǎn)PC模塊的結(jié)構(gòu)與原理?電流會經(jīng)過電阻最小的通路PC模塊中的電阻決定了脈沖過程中的時間常數(shù)，電阻越小，放電時間越短Charger充電回路放電回路電容器Cuvette3ohm電阻rPC模塊并聯(lián)電阻當(dāng)樣品的電阻遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于PC模塊的電阻時，則PC模塊的電阻約等于放電回路的電阻目前十五頁\總數(shù)三十一頁\編于二點(diǎn)方波電容器的指數(shù)放電過程中被截止后就會形成方波，其時間常數(shù)遠(yuǎn)大于脈沖時間脈沖時間就是細(xì)胞被放電的時間脈沖是可以被反復(fù)釋放的，在低壓回路最多可以重復(fù)10次，在高壓回路最多可以重復(fù)2次脈沖的間隔時間就是指2個脈沖間的時間脈沖下降是指終止電壓和起始電壓值之間的差值目前十六頁\總數(shù)三十一頁\編于二點(diǎn)GPX和方波高電壓回路:

一次充電，一次脈沖。在下一次脈沖前，電容器需要重新充電

最多只能進(jìn)行2次脈沖，脈沖時間為0.05–5msec，脈沖間隔為5-30sec低電壓回路:

該電路是可調(diào)的，因此可一次充電，進(jìn)行多次的脈沖

最多可進(jìn)行10次脈沖，脈沖時間為0.05-100msec，脈沖間隔為0.1–10sec目前十七頁\總數(shù)三十一頁\編于二點(diǎn)特點(diǎn):PulseTrac電路和電弧保護(hù)PulseTrac電路確保樣品上所加電壓的精確度將CE模塊中的低壓電容器的精度從20%提高到10%電容器的校正方便，確保每次脈沖的精確，并且能修正隨著使用而產(chǎn)生的電容器指標(biāo)的偏差

在每次脈沖前就能預(yù)測樣品的電阻當(dāng)脈沖或電路中斷時，可進(jìn)行安全的放電，確保安全電弧保護(hù)設(shè)計(jì)，確保設(shè)備和樣品的安全目前十八頁\總數(shù)三十一頁\編于二點(diǎn)什么是電弧保護(hù)?

在電擊杯中出現(xiàn)電阻特別小的區(qū)域時，就會形成短路，產(chǎn)生電弧。樣品緩沖液中的離子成分就會造成電弧現(xiàn)象只要上述電阻突然變小的情況被檢測到，那么電流就不會經(jīng)過樣品電弧保護(hù)就是在存在短路的情況下，使電流不經(jīng)過樣品，確保樣品不受強(qiáng)電流的損傷如果樣品量很少的話，那么產(chǎn)生的熱量會使得樣品蒸發(fā)如果由于樣品的低電阻而產(chǎn)生電弧，那么GPX會給出提示，并不能提供脈沖Ionscollectabovesample目前十九頁\總數(shù)三十一頁\編于二點(diǎn)特點(diǎn):模塊化設(shè)計(jì)主機(jī)CE模塊PC模塊ShockPod電擊槽系統(tǒng)部件目前二十頁\總數(shù)三十一頁\編于二點(diǎn)特點(diǎn):友好的操作界面圖表化的操作界面可以設(shè)置所有的實(shí)驗(yàn)參數(shù)，包括附屬模塊的參數(shù)目前二十一頁\總數(shù)三十一頁\編于二點(diǎn)特點(diǎn):可選擇的程序設(shè)置HOME1.Exponentialprotocol2.Timeconstantprotocol3.Squarewaveprotocol4.Pre-setprotocols>5.Userprotocols

HOME<6.Lastpulse7.Optimize8.Datamanagement9.Measurements10.Userpreferences主菜單目前二十二頁\總數(shù)三十一頁\編于二點(diǎn)1.指數(shù)波程序顯示結(jié)果顯示目前二十三頁\總數(shù)三十一頁\編于二點(diǎn)2.時間常數(shù)確定的指數(shù)波形式程序顯示結(jié)果目前二十四頁\總數(shù)三十一頁\編于二點(diǎn)3.方波程序顯示結(jié)果顯示目前二十五頁\總數(shù)三十一頁\編于二點(diǎn)4.GPX內(nèi)部預(yù)設(shè)程序MammalianCellsBacterialCellsFungalCellsCHOE.coliS.cerivisiaeCos7A.tumefaciensP.pastoris3T3P.aeruginosaC.albicans293S.aureusS.pombeHeLaB.cereusD.discoideumBHK21S.pyogenesA549L.plantrumCV1K562HL60JurkatHuT78對于常規(guī)的細(xì)胞，經(jīng)過優(yōu)化的電穿孔條件目前二十六頁\總數(shù)三十一頁\編于二點(diǎn)5.用戶自儲存的程序

最多可儲存144個程序

12個人，每人12個程序

可按照名字儲存

可修改或刪除目前二十七頁\總數(shù)三十一頁\編于二點(diǎn)6.最后一次電穿孔的條件即使關(guān)機(jī)后，GPX還是可以調(diào)出儀器最后一次電穿孔的條件，并利用該程序進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。方便實(shí)驗(yàn)室最常用程序的使用目前二十八頁\總數(shù)三十一頁\編于二點(diǎn)7.實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化可用于方便的優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，可連續(xù)的對脈沖條件中的電壓某一個參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化該功能可在指數(shù)波、方波、特定時間常數(shù)的指數(shù)波模式下使用目前二十九頁\總數(shù)三十一頁\編于二點(diǎn)8.實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)管理數(shù)據(jù)管理可以調(diào)出之前的100個實(shí)驗(yàn)程序顯示每個程序的設(shè)置條件和結(jié)果目前三十頁\總數(shù)三十一頁\編于二點(diǎn)9.儀器的測量功能該