實驗六

觀察血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶的活力變化Experiment6

ObservingEnzymeActivityChangesofAlanineAminotransferaseinSample一、目的要求1、了解血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活力變化的意義2、掌握血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活力的測定方法二、相關知識點1.轉(zhuǎn)氨作用transamination2.氨基轉(zhuǎn)移酶轉(zhuǎn)氨酶（aminotransferase，transaminase）催化氨基酸與酮酸之間氨基轉(zhuǎn)移的一類酶谷丙轉(zhuǎn)氨酶glutamic-pyruvictransminaseGPT

又稱丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶alanineaminotransferaseALT谷草轉(zhuǎn)氨酶glutamicoxaloacetictransaminaseGOT又稱天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶aspartatetransaminase,AST3.轉(zhuǎn)氨作用的機制：4．轉(zhuǎn)氨作用的意義正常時轉(zhuǎn)氨酶主要分布在細胞內(nèi)，血清中酶活力很低GOT以心臟細胞中活力最大，其次為肝臟細胞GPT則以肝臟細胞中活力最大三、實驗原理SUBSTRATEPyruvatedinitratephenylhydrazone2,4-dinitratephenylhydrazinealanineα-ketoglutarateRedbrownpyruvicacidpyrivicacidglutamicacidSALT單位的定義是：1ml血清在37℃與底物作用30min，每產(chǎn)生2.5μg丙酮酸所需酶的量為一個SALT單位。四、實驗操作1.標準曲線的繪制試劑管號012345丙酮酸標準液，mlSALT底物溶液，ml磷酸緩沖液，ml0.000.500.100.050.450.100.100.400.100.150.350.100.200.300.100.250.250.1037℃水浴中保溫10min2,4-二硝基苯肼

0.500.500.500.500.500.5037℃水浴保溫20min氫氧化鈉ml555555室溫下靜置10min蒸餾水調(diào)零點，于520nm處測吸光度為什么在制作標準曲線時要加入底物溶液為什么加入底物溶液的體積不同，對反應沒有影響怎么計算丙酮酸的質(zhì)量丙酮酸微克數(shù)-吸光度標準曲線2．SALT活力測定：潔凈干燥試管4支，即測定管、對照管各2支

試劑測定管對照管血清，mlSALT底物溶液，ml0.10.50.1____37℃水浴30min2,4-二硝基苯肼溶液，mlSALT底物溶液，ml0.5____0.50.537℃水浴20min0.4mol/L氫氧化鈉溶液，ml5.05.0室溫下靜置10min

4根干燥試管的用途是什么？樣品測定為什么要使用對照管？樣品測定的酶反應怎樣終止？血清樣品和底物在使用前最好提前放置于水浴中預熱，保證反應時的溫度的準確性反應溫度和計時要準確SALT活力=測定管微克數(shù)—對照管微克數(shù)

2.5×0.1

（單位）

五、注意事項1.2，4-二硝基苯肼可與有酮基的化合物作用形成苯腙2.吸量應準確，嚴格控制反應時間和溫度。3.在測定SALT活力時，應事先將底物、血清在37℃水浴中恒溫4.溶血標本不宜采用，因血細胞內(nèi)轉(zhuǎn)氨酶活力較高，影響測定結(jié)果。5．在測定時，如酶活力較大（大于100單位），應將樣品稀釋后再進行測定。六、專業(yè)詞匯

glutamic-pyruvictransminaseGPTalanineaminotransferaseALTglutamicoxaloacetictransaminaseGOTaspartatetransaminase,ASTenzymeactivityserumAminotransferase/transaminasecatalyzealanineα-ketoglutarateglutamicacidpyruvicacidalkalisubstrateABSTRACT

ObservingEnzymeActivityChangesofAlanineAminotransferaseinSample

Abstract:Objetcive:TodeterminetheactivityofserumALTinsample.

Method:SALTwasmeasuredbyReitman-Frankelcolorimetricendpointmethod

Results:ThenormalSALTactivityis()unit,theabnormalSALTactivityis()unit.

Conclusion:

TheactivityofSALTinabnormalsampleismuchhigherthanthatinnormalsampleKeyWords:alanineaminotransferase，aspartatetransaminase,enzymeactivity,serum,α-ketoglutarate,substrate,（1）drawcalibrationcurvetubesAddstandardpyrivicacidsolution,SALTsubstratesolutionandphosphatebufferWaterbathingat37℃for10’Add2,4-dinitratephenylhydrazineandwaterbathat37℃for20’AddNaOHsolutionandkeepinroomtemperaturefor10’Assayat520nm（2）determiningtheactivityofSALTNormaltubesAbnormaltubesseraSALTsubstratesolutionsera____Waterbathingat37℃for30’Waterbathingat37℃for30’2,4-dinitratephenylhydrazine2,4-dinitratephenylhydrazine____SALTsubstratesolutionWaterbathingat37℃for20’Waterbathi