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文檔簡介
微生物的菌種選育-霉菌的分離篩選霉菌菌落的特征:A、形態(tài)較大,質(zhì)地疏松,外觀干燥,不透明,呈現(xiàn)或松或緊的形狀。B、菌落和培養(yǎng)基間的連接緊密,不易挑取,菌落正面與反面的顏色、構(gòu)造,以及邊緣與中心的顏色、構(gòu)造常不一致。C、霉菌的菌絲有營養(yǎng)菌絲和氣生菌絲的分化,而氣生菌絲沒有毛細(xì)管水,故它們的菌落必然與細(xì)菌或酵母菌的不同,較接近放線菌。
根霉菌孢子形態(tài):
顯微鏡下根霉孢子形態(tài):
根霉菌落形態(tài):分離霉菌需要的材料
酒曲、馬鈴薯、葡萄糖、瓊脂、蒸餾水、1mol/LNaOH、1mol/LHCl分離霉菌需要的設(shè)備高壓蒸汽滅菌鍋、電爐、天平、鐵架臺、滅菌培養(yǎng)皿、錐形瓶、漏斗、試管、燒杯、膠頭滴管、石蕊試紙、接種環(huán)、酒精燈、量筒、玻璃棒、紗布、濾紙、試管塞、報紙、扎繩、標(biāo)簽、溫箱、冰箱、蓋玻片、載玻片、顯微鏡、杜氏管馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)的制備
將新鮮的馬鈴薯洗凈、去皮,(注意:發(fā)霉、變綠的不要使用。)切成薄片或蠶豆大小的方塊,稱取所需的重量,倒入鍋內(nèi),加水1000mL煮沸半小時左右,至馬鈴薯酥而不爛為止,用四層紗布過濾,然后將事先稱好的瓊脂加到上述濾液中,用小火加熱,使之慢慢融化,并用玻棒不斷攪拌,以免燒焦鍋底。再加入事先用溫水溶化的糖溶液,用二層紗布過濾。測定pH值,用1mol/L的NaOH或HCl調(diào)至pH為5.5~6.5之間,最后加水補(bǔ)足至1000mL。(1)水瓊脂制備:將瓊脂粉直接加入無菌水中在微波爐中加熱至融化:如果將瓊脂粉加入自來水中,則需要進(jìn)行高溫蒸汽滅菌,單孢分離常用2%水瓊脂。(2)瓊脂片制備:用1ml滅菌移液槍吸取2%的無菌水瓊脂涂布在無菌載玻片上,厚度均勻。毛細(xì)管單胞打孔法獲取霉菌單孢子毛細(xì)管單胞打孔法獲取霉菌單孢子(3)孢子涂布:用滅菌挑針挑取一小塊酒曲,一般會足以沾有霉菌的孢子,將其沾復(fù)到水瓊脂片上,用滅菌波棒或毛細(xì)管沾取無菌水,稀釋涂布孢子。或者用直徑1mm的毛細(xì)管,在酒精燈下燒軟后拉絲,折斷后制作成細(xì)針(簡稱“毛細(xì)管針”)用毛細(xì)管針挑取孢子,直接涂布到水瓊脂片上。(4)孢子選取:顯微鏡檢(常用十倍物鏡)涂有孢子的水瓊脂片,找到典型孢子后,移入視野中央(要求視野內(nèi)僅此一個孢子),然后下移載物臺。毛細(xì)管單胞打孔法獲取霉菌單孢子(5)瓊脂打孔:取內(nèi)徑為1mm的毛細(xì)管,在酒精燈上燒軟后彎成直角,短臂長約1cm。短臂端部在酒精燈上加熱滅菌后,對準(zhǔn)顯微鏡物鏡下的光斑中央下壓,在水瓊脂上打一個直徑1cm的圓餅,提升載物臺到原來位置,觀察目標(biāo)孢子是否在瓊脂并上,如果不在重新選取孢子(6)單胞轉(zhuǎn)移:用無菌針或毛細(xì)管針,挑去帶有目標(biāo)孢子的瓊脂餅轉(zhuǎn)入馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基中,有孢子的一面緊貼培養(yǎng)基,每皿可放3-5個單孢。室溫下過夜培養(yǎng)12-20小時。(或放入設(shè)置好的培養(yǎng)箱中23-25℃),觀察長出菌落的形態(tài)。1、光學(xué)顯微
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