關(guān)于實(shí)驗(yàn)四細(xì)菌的革蘭染色法第1頁(yè)，課件共13頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、了解革蘭染色的原理。2、掌握革蘭染色的方法。3、掌握細(xì)菌的基本形態(tài)和結(jié)構(gòu)。第2頁(yè)，課件共13頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月二、試驗(yàn)原理細(xì)菌先經(jīng)堿性染料結(jié)晶紫染色，再經(jīng)碘液媒染后，用酒精或丙酮脫色，再用復(fù)染劑（番紅）染色，如果細(xì)菌不被脫色而保持原來(lái)染料的藍(lán)紫色者，為革蘭氏陽(yáng)性菌；如果被脫色，而被染上復(fù)染劑的紅色者則為革蘭氏陰性菌。第3頁(yè)，課件共13頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月革蘭氏陽(yáng)性菌與革蘭氏陰性菌染色差別的原因G+菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)致密(肽聚糖層厚)，且脂質(zhì)含量少，乙醇不易滲入脫色。G-菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)疏松(肽聚糖層薄)，且脂質(zhì)含量多，乙醇溶解脂質(zhì)后易滲入細(xì)胞而脫色。G+菌菌體含有大量核糖核酸鎂鹽，可與碘、結(jié)晶紫牢固結(jié)合，使已著色的細(xì)菌不被乙醇脫色。G-菌菌體核糖核酸鎂鹽含量小，易被乙醇脫色。G+菌等電點(diǎn)比G-菌低，在同一pH值條件下陽(yáng)性菌比陰性菌所帶負(fù)電荷要多，故與帶正電荷的堿性染料(結(jié)晶紫)結(jié)合牢固，不易被乙醇脫色。第4頁(yè)，課件共13頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月三、試驗(yàn)材料顯微鏡、酒精燈、火柴、牙簽、載玻片、吸水紙、擦鏡紙、香柏油、二甲苯、生理鹽水、蒸餾水草酸銨結(jié)晶紫染色液、盧戈氏（Lugol）碘液、95%乙醇、蕃紅紅染液口腔中的細(xì)菌第5頁(yè)，課件共13頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月四、操作步驟1、標(biāo)本片制備

①取載玻片1塊，加1滴生理鹽水。用牙簽小心輕刮自己舌苔幾下，鹽水中混勻涂成一薄層。 ②在室溫下自然干燥。 ③用片夾夾住玻片通過(guò)火焰3次固定標(biāo)本，自然冷卻。第6頁(yè)，課件共13頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2、染色

①初染：在固定好并已冷卻的涂片標(biāo)本上滴加結(jié)晶紫染液，要蓋滿涂膜。約1分鐘后，用細(xì)水流從玻片的一端把游離的染液洗去。

②媒染（增加染料與細(xì)胞的親和力）：滴加盧戈碘液數(shù)滴，作用1分鐘后，輕輕水洗。

③脫色：在玻片上加95%乙醇2~3滴，并輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)玻片數(shù)秒鐘，使玻片傾斜讓乙醇流去，如此重復(fù)數(shù)次，直至流下的乙醇幾乎無(wú)色或稍成淡紫色，流水沖洗。

④復(fù)染：滴加稀釋復(fù)紅染液數(shù)滴，作用1~2分鐘后流水沖洗。第7頁(yè)，課件共13頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月3、結(jié)果判定染色完畢，用吸水紙將標(biāo)本片吸干，玻片上滴加香柏油，油鏡觀察。注意觀察菌體的形態(tài)、大小、排列和染色。第8頁(yè)，課件共13頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月五、注意事項(xiàng)1、決定革蘭染色成敗的關(guān)鍵是脫色程度。

若脫色過(guò)度，即使是G+菌，其藍(lán)紫色也會(huì)被脫去而染上紅色，被誤認(rèn)為是G-菌（假陰性）。若脫色不足，即使G-菌也因藍(lán)紫色被保留而染不上紅色，被誤認(rèn)為G+菌(假陽(yáng)性)。脫色程度又受脫色時(shí)間、涂片之厚薄、脫色時(shí)載玻片搖晃的快慢及酒精用量多少等因素的影響，無(wú)法嚴(yán)格規(guī)定。一般可用已知G+菌和G-菌作練習(xí)，以掌握脫色時(shí)間。當(dāng)要確證一個(gè)未知菌的革蘭反應(yīng)時(shí)，應(yīng)同時(shí)另作一張已知G+菌和G-菌的混合涂片，以資對(duì)照。第9頁(yè)，課件共13頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月五、注意事項(xiàng)2、涂片以薄而勻?yàn)榧眩胁豢蓾夂瘛? 過(guò)于密集的菌體，因脫色不均勻常呈假陽(yáng)(陰)性。鏡檢時(shí)，要以分散開(kāi)的細(xì)菌著色為準(zhǔn)。3、做革蘭染色的菌種，以培養(yǎng)18~24h為宜。 一般情況下G-菌的染色反應(yīng)較穩(wěn)定，不易受菌齡的影響；而G+菌,有的在幼齡時(shí)呈陽(yáng)性，培養(yǎng)24和48h以上，由于細(xì)胞老化或死亡也可變?yōu)殛幮苑磻?yīng)。4、不宜使用放置過(guò)久的碘液，以免影響固定結(jié)晶紫的作用。第10頁(yè)，課件共13頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月六、作業(yè)繪圖：油鏡下觀察到的細(xì)菌及染色狀況。革蘭染色結(jié)果記錄第11頁(yè)，課件共13頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月七、思考題1、試比較革蘭陽(yáng)性菌和革蘭陰性菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)的特征？2、革蘭染色有什么實(shí)際意義？3、當(dāng)