第五章酶學(xué)分析技術(shù)永州職業(yè)技術(shù)學(xué)院陳武哲酶學(xué)分析技術(shù)基本知識（1）概念：是由活細胞產(chǎn)生的具有特異和高效催化效率的一類蛋白質(zhì)，屬于生物催化劑。一、酶的基礎(chǔ)知識底物產(chǎn)物酶酶促反應(yīng)S

P（一）酶的組成和命名

1.酶的組成酶單純酶:酶分子中只有氨基酸殘基組成的肽鏈結(jié)合酶酶蛋白:

由多肽鏈組成輔助因子：非蛋白成分，如金屬離子、鐵卟啉或含B族維生素的小分子有機物體內(nèi)大多數(shù)酶為結(jié)合酶，輔因子按照其與酶蛋白結(jié)合的緊密程度不同可分為兩類：輔因子輔酶：與蛋白質(zhì)結(jié)合疏松，往往是維生素或維生素衍生物，如NAD+和NADP+輔基：與酶蛋白結(jié)合緊密，多數(shù)是金屬離子根據(jù)酶所催化的反應(yīng)性質(zhì)的不同，將酶分成六大類：氧化還原酶、轉(zhuǎn)移酶、水解酶、裂解酶、異構(gòu)酶和合成酶六大類。2.酶的命名有習(xí)慣命名法和系統(tǒng)命名法兩種。系統(tǒng)命名法：1961年國際酶學(xué)委員會（EC）提出，但因其復(fù)雜難記，實際工作中較少應(yīng)用。習(xí)慣命名法：命名原則：來源＋底物（或產(chǎn)物）＋反應(yīng)性質(zhì)＋酶如，胰蛋白水解酶(胃蛋白酶)（二）酶的催化特性及應(yīng)用1、高度的催化效率（能大大降低反應(yīng)所需活化能）2、高度的特異性：表現(xiàn)為酶與底物的相互識別

（1）絕對特異性（2）相對特異性（3）立體異構(gòu)特異性3、高度的可調(diào)節(jié)性：激素、激動劑、抑制劑可改變酶的催化能力4、高度的不穩(wěn)定性（由其化學(xué)本質(zhì)所決定）生化檢驗上有重要意義二、酶含量的表示方法（一）酶活性濃度表示法1.酶活性的概念：指在規(guī)定條件下，單位時間內(nèi)底物的減少量或產(chǎn)物的生成量，即酶促反應(yīng)的速度。

V=Δ[P]/t或-Δ[S]/t底物濃度為〔S〕,產(chǎn)物濃度為〔P〕,時間為t，反應(yīng)速度為v注：在實際測定酶促反應(yīng)速度時，以測定單位時間內(nèi)產(chǎn)物的生成量為好。2.酶活性單位定義：指在一定條件下使酶促反應(yīng)達到某一速度時所需要的酶量。酶活性單位是一個人為規(guī)定的標準。慣用單位：酶活性測定方法的建立者所規(guī)定的單位。國際單位：1IU指在規(guī)定條件（25℃，最適pH，最適底物濃度）下，每分鐘轉(zhuǎn)化1mol底物的酶量。單位為IU/L。目前臨床測定時為接近人體環(huán)境，反應(yīng)溫度常選擇37℃，故將IU簡寫為U。Katal單位：1Katal指在規(guī)定條件下，每秒鐘轉(zhuǎn)化1mol底物的酶量，1U＝1μmol/min＝1×10-6/60s＝16.67nkatal3、酶活性單位的計算步驟：運用公式進行計算。明確測定方法的酶單位定義，按照酶單位定義確定物質(zhì)量、體積和時間的單位。計算公式:產(chǎn)物的增加量每單位規(guī)定的保溫時間1000（ml）酶單位/升=—————————×——————————×————————

每單位規(guī)定的產(chǎn)物增加量實際保溫時間實際標本用量（ml）

分光光度法測定的計算公式

（A測定–A對照）·V總·106

每單位規(guī)定的保溫時間酶單位/升=—————————×————————

·L·V標實際保溫時間例如，血清淀粉酶測定（碘-淀粉比色法）中：若淀粉緩沖液（0.4g/L），用量1.0ml，血清0.02ml。（單位定義：100ml血清37℃，作用15mim每水解5mg淀粉為一個淀粉酶單位）。淀粉酶活性單位計算方法如下：4、正常上限升高倍數(shù)概念：指用測得的酶活性結(jié)果除以參考范圍上限。即ULN＝例：如某人血ALT測定結(jié)果為80u/L，該測定方法正常參考范圍上限為40mmol/L，其ULN＝80/40＝2（二）酶蛋白質(zhì)量濃度表示法原理：用免疫學(xué)技術(shù)直接測定酶的質(zhì)量，以質(zhì)量濃度單位報告結(jié)果。如ng/ml或μg/L等。優(yōu)點：1、靈敏度高；2、特異性高；