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細(xì)菌基因敲除技術(shù)資料第一頁,共8頁。細(xì)菌基因敲除原理示意圖(示例)一、技術(shù)原理電話/p>
技術(shù)服務(wù)第二頁,共8頁?;蚯贸Y(jié)果鑒定(示例)二、敲除結(jié)果檢測(cè)電話/p>
技術(shù)服務(wù)第三頁,共8頁。三、革蘭氏陰性菌基因敲除流程自殺載體構(gòu)建自殺載體導(dǎo)入供體菌供體菌與靶細(xì)菌接合作用,自殺載體轉(zhuǎn)移第一次同源重組及篩選第二次同源重組及篩選基因缺失株鑒定自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)自殺載體之一電話/p>
技術(shù)服務(wù)第四頁,共8頁。四、革蘭氏陽性菌基因敲除流程自殺載體構(gòu)建陽性菌電轉(zhuǎn)化(不同菌培養(yǎng)條件、電轉(zhuǎn)化程序、電擊緩沖液、恢復(fù)培養(yǎng)條件不同,需要摸索)第一次同源重組及篩選第二次同源重組及篩選基因缺失株鑒定電話/p>
技術(shù)服務(wù)電轉(zhuǎn)化儀電擊緩沖液第五頁,共8頁。五、本公司細(xì)菌基因敲除服務(wù)優(yōu)勢(shì)電話/p>
技術(shù)服務(wù)獨(dú)特的供體菌,可以不要求靶細(xì)菌具有抗生素抗性。高效的供體菌接合系統(tǒng),保證自殺質(zhì)粒具有高的接合轉(zhuǎn)移效率。自殺載體為T線性化載體,可直接與純化PCR產(chǎn)物連接,不需要考慮酶切位點(diǎn),大大節(jié)省客戶時(shí)間。優(yōu)化的自殺載體序列,最大化減少冗余區(qū),從而提高接合轉(zhuǎn)移效率,減少非特異重組的概率。自殺載體具有自主開發(fā)的反向篩選基因vmt,用于替換常規(guī)的sacB基因,從而大大增加基于自殺載體基因敲除技術(shù)的適用范圍,大大減少第二次重組后缺失突變克隆的篩選工作。第六頁,共8頁。細(xì)菌送樣前請(qǐng)鑒定確認(rèn)好菌株的種類,以免基因擴(kuò)增不能匹配靶基因。細(xì)菌送樣前請(qǐng)先測(cè)試菌株是否具有氨芐青霉素(Ap)、卡那霉素(Kn)、氯霉素(Cm)、四環(huán)素(Tc)抗性,并保證至少不具有其中一種抗性。如需委托抗性測(cè)試,另需收費(fèi)300元單個(gè)抗性測(cè)試。請(qǐng)按附件1要求標(biāo)識(shí)需要敲除的基因,以及上下游500bp左右的序列。細(xì)菌樣品以液體或平板劃線形式寄出。在樣品寄出前請(qǐng)以電子郵件形式提供培養(yǎng)條件。六、送樣要求
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