植物激素對附子多糖含量的影響【摘要】目的研究植物激素對附子多糖含量的影響。方法在附子的苗期和子根膨大期噴施不同的激素，采用蒽酮-硫酸比色法測定多糖含量。結果不同的激素間差異明顯，赤霉素(GA)、α-萘乙酸(NAA)對多糖含量的增加也有作用;6-芐氨基嘌呤(6-BA)和6-糠氨基嘌呤(KT)對多糖含量的增加也有作用;吲哚乙酸(IAA)有抑制影響。結論植物激素對附子多糖的含量有顯著的影響。

【關鍵詞】植物激素;附子;多糖

Abstract：ObjectiveTostudytheeffectsofplanthormonesonthedeterminationofpolysaccharideofAconitumplanthormonesweresprayedontheAconitumcarmichailiattheseedlinggrowingperiodandtubersexpandinganthrone-sulfuricacidcolorimetrywasusedtodeterminetheresultsshowedthattherewassignificantdifferencebetweentheeffectontheincrementofthecontentofpolysaccharidewiththetreatmentsofGAandNAAwereandKTalsoimprovedthecontentofpolysaccharide,butIAAhadinhibitoryeffectoneffectsofplanthormonesonthedeterminationofpolysaccharideofAconitumcarmichailiaresingificant.

Keywords：Planthormones;Aconitumcarmichaili;Polysaccharide

附子是我國常用的中藥，為毛茛科烏頭AconitumcarmichaeliDeb.的子根，附子的主要有效成分為烏頭類生物堿:烏頭堿(aconitine)、中烏頭堿(mesaconitine)與次烏頭堿(hypaconitine)等，具有抗炎、鎮(zhèn)痛、強心、抗心律失常、降血糖等藥理作用,有回陽救逆、補火助陽、散寒除濕的功效[1，2]。中草藥多糖在增強機體免疫功能及抗腫瘤、抗肝炎、抗?jié)?、調(diào)血脂、降血糖、抗衰老方面都有作用。附子多糖提取液還具有抗癌、抗衰老和增強免疫機能等作用。附子多糖高效低毒的生物學特性,近年來逐漸受到了人們的關注，是人們新藥研發(fā)方向之一。植物激素作為化控技術在上發(fā)揮了重要的作用,對藥用植物次生代謝產(chǎn)物也有影響，但在附子上的研究尚未開展。因此，研究激素對多糖含量的影響，對附子的栽培、標準化生產(chǎn)和藥用價值的利用都有重要的意義。

1材料與儀器

材料試驗材料來自四川江油附子GAP基地的主要栽培種，由侯大斌教授鑒定。隨機區(qū)組設計，重復3次，種植在西南科技大學校內(nèi)實驗田。試驗田土壤特性：全氮含量為%，速效氮含量為mg/kg，速效磷含量為mg/kg，速效鉀含量為mg/kg,有機質(zhì)mg/kg。底肥：農(nóng)家肥30000kg/ha，油枯3000kg/ha，高效磷肥750kg/ha，按附子生產(chǎn)要求進行田間管理，每月除1次草。激素選用：GA(60mg/L)，6-BA(40mg/L)，NAA(30mg/L)，IAA(20mg/L)，KT(25mg/L)，對照(清水)，分別在苗期和子根膨大期噴施，06-27收獲。

收獲附子先用自來水清洗干凈，在用蒸餾水漂洗兩次，裝入牛皮紙袋放入烘箱，在105℃下烘30min，再在60～70℃下烘干至恒重，粉碎過60目篩，4℃冰箱保存，備用。

儀器設備、試劑旋轉蒸發(fā)儀(Buchi公司)，BP211D電子分析天平(Storis公司)，T6普析通用新世紀紫外分光光度計(北京普析)，高速冷凍離心機(Backman公司)，中藥切片機(長沙中南制藥廠)、中草藥粉碎機(天津泰斯特儀器有限公司)。

無水乙醇，丙酮，乙醚，氯仿，正丁醇，濃硫酸，蒽酮，葡萄糖等，以上試劑均為分析純。

2方法

附子多糖的提取[5，6]稱取干燥的附子粉200g,加入適量80%乙醇,回流提取3h,抽濾，藥渣揮盡乙醇后,沸水提取2次,1h/次,合并提取液,濃縮至200ml,加95%乙醇使醇含量達到80%,于4℃冰箱中醇沉過夜，離心(5000r/min，10min)，沉淀依次用無水乙醇、丙酮洗滌,得到粗多糖。用熱水將粗多糖溶于水,用Sevage法(氯仿∶正丁醇=5∶1)除蛋白,重復3次(用考馬斯亮藍法測得無蛋白為止)。流水透析后,蒸發(fā)濃縮至200ml,加95%乙醇使醇含量達到80%,于4℃冰箱中醇沉過夜。離心,沉淀依次用無水乙醇、丙酮洗滌,真空干燥，稱重計算得率。

多糖含量的測定采用蒽酮-硫酸法。以糖濃度(C，μg/L)為橫坐標，吸光度(A)為縱坐標，繪制標準曲線，得回歸方程A=7,r=2，葡萄糖在20～100μg/L與吸光度呈良好的線性關系。

換算因子的測定精密稱取附子多糖100mg,溶于1L容量瓶中,稀釋至刻度,搖勻。精密吸取1ml于具塞試管中,按照蒽酮-硫酸法方法測定吸光度,根據(jù)回歸方程計算多糖濃度中葡萄糖的濃度C,按下式計算出換算因子f。f=C·D/W。式中W為多糖質(zhì)量(mg),C為葡萄糖濃度(μg/ml),D為稀釋倍數(shù)。測得換算因子f=(n=5,RSD=%)。

樣品溶液的制備精密稱取不同處理的附子樣品g(n=3)，加入150ml80%乙醇回流提取3h,抽濾，殘渣揮盡乙醇后,用100ml水提取1h,2次,離心，定容至250ml的容量瓶中,為樣品液。

精確度實驗精密稱取附子粉5份，每份1g，按照“”項下的方法同時制取5份樣品溶液。精密移取各樣品溶液各1ml分別置于具塞試管中，按照“”項下的方法測定吸光度，計算附子多糖含量。測得RSD=%(n=5),說明該分析方法精密度良好。

穩(wěn)定性實驗按“”項下樣品溶液制備方法制備，吸取1ml試液于具塞試管中，按照“”下的方法測定吸光度，每隔1h測定1次，連續(xù)6h，考察其穩(wěn)定性。測得吸光度在6h內(nèi)無明顯變化，穩(wěn)定性較好(RSD=%)。

數(shù)據(jù)處理數(shù)據(jù)用SAS進行方差分析和最小顯著差數(shù)法(LSD)分析。

3結果

精制多糖的得率干燥的附子粉200g,得到精制多糖g,得率為%(n=3)。

回收率的測定精密稱取5份附子樣品液各g,分別加入30mg左右的附子多糖,按照“”項下樣品溶液的制備和“”項下的測定方法操作,測得吸光度,計算回收率(R)。回收率R=%，RSD=%(n=5)表1回收實驗結果

植物激素對附子多糖含量的影響精密吸取“”項下樣品液1ml于具塞試管中，按照蒽酮-硫酸法測定吸光度，按回歸方程計算樣品液中葡萄糖的濃度，按照下面公式計算附子粉中多糖的含量。樣品中含量(%)=(CD/WRf)×100%。式中:C為樣品液中葡萄糖的濃度,D為稀釋倍數(shù),f為換算因子,W為樣品質(zhì)量,R為回收率。各處理樣品中多糖含量和方差分析表見表2。表2方差分析表

激素對附子多糖的含量的影響見表3。區(qū)組間的方差分析可知，F(xiàn)=,說明不同的激素間差異具有明顯的差異性，多糖對不同激素的敏感性存在差異。GA，NAA對多糖含量的提高最為顯著，平均含量分別是，mg/g，比對照增加了%，%，與其它激素和對照的差異達到極顯著;兩種細胞分裂素對多糖含量的影響也有顯著的增加，但作用低于GA,NAA，含量分別為mg/g和mg/g，增加量分別是%，%和對照的差異也達到極顯著。IAA對多糖含量有明顯的抑制作用，多糖含量僅為mg/g。幾種激素的作用效果GA，NAAKT，6-BACKIAA。表3激素對附子多糖含量影響分析

字母表示處理間的差異顯著水平，相同的字母表示兩處理間沒有差異，不同的字母表示兩處理間差異顯著，大寫字母表示差異極顯著(1%)，小寫字母表示差異顯著(5%)

4討論

植物在生長的過程中受到內(nèi)源激素(或外源激素)的調(diào)節(jié)作用，因此在植物的栽培過程中激素對其生長發(fā)育、生理生化、產(chǎn)量、品質(zhì)、次生代謝產(chǎn)物等都可能會產(chǎn)生作用。多糖作為附子有效成分之一，是評價附子藥用價值的主要標準之一。目前對多糖含量的測定使用的方法還主要是經(jīng)典的紫外比色法，通過驗證，該方法具有較好精密度和穩(wěn)定性，回收率也較高，是檢測多糖含量的優(yōu)良的方法之一。通過實驗可以發(fā)現(xiàn)，激素對多糖的含量有調(diào)節(jié)作用。除IAA外其它幾種激素對多糖含量都有明顯的增加作用，說明IAA的作用具有不穩(wěn)定性，這與前人研究的激素IAA的調(diào)節(jié)作用具有不穩(wěn)定性比較相似。IAA在植物生長的不同時期易受到吲哚乙酸氧化酶的破壞而失去作用，對植物的生長發(fā)育產(chǎn)生有影響，可能是抑制多糖含量的原因之一。由于激素對植物生長調(diào)節(jié)機理目前還不是很清楚，激素對多糖含量的影響還有待進一步研究。

【參考文獻】

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董蘭鳳,張英俊,劉京生,等.附子多糖與阿霉素長循環(huán)熱敏脂質(zhì)體的抗腫瘤作用及其機制探討[J].細胞與分子免疫學雜志,2006,22(4)